郭桂芳，郝利華，吳 啟，楊大偉，劉艷華

(中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，北京 100081)

在新獸藥研發(fā)中，穩(wěn)定性考察是重要研究項目之一，要求對試驗的設(shè)計、檢查方法、評價項目等有充分的研究，以便為藥品生產(chǎn)、包裝、貯存、運(yùn)輸和有效期提供科學(xué)依據(jù)。我國先后發(fā)布了《獸藥穩(wěn)定性試驗技術(shù)規(guī)范》［1］和《獸用化學(xué)藥物穩(wěn)定性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》［2］，對穩(wěn)定性研究進(jìn)行了詳細(xì)的規(guī)定，指導(dǎo)獸藥研發(fā)。目前國外FDA、ICH、WHO和國內(nèi)SFDA［3］等均出臺了有關(guān)藥物穩(wěn)定性研究的指導(dǎo)文件。國外還發(fā)布了臨床使用期間的穩(wěn)定性研究指導(dǎo)原則，但我國不論是人用藥還是獸藥均未出臺此方面的指導(dǎo)文件，僅在《獸用消毒劑鑒定技術(shù)規(guī)范》(試行)中要求申報單位提交使用期間穩(wěn)定性試驗(in－use stability testing)。新獸藥申報資料也顯示，國內(nèi)部分企業(yè)研發(fā)多劑量包裝產(chǎn)品時忽視使用期間穩(wěn)定性考察，發(fā)補(bǔ)較多，而此時藥物的穩(wěn)定與否，與用藥安全和臨床有效密切相關(guān)。針對這種情況，有必要對使用期間穩(wěn)定性研究的意義、范圍、試驗方法和評價指標(biāo)等進(jìn)行深入探討，提出合理的技術(shù)要求，以指導(dǎo)藥物使用期間穩(wěn)定性試驗的開展，保證用藥安全有效。

1 使用期間穩(wěn)定性試驗的定義及其范圍

使用期間穩(wěn)定性試驗不同于常規(guī)的穩(wěn)定性試驗，它是研究新獸藥在一定使用期間內(nèi)的穩(wěn)定性而進(jìn)行的試驗。關(guān)于使用期間穩(wěn)定性試驗，WHO指導(dǎo)文件草案 2．2．10 條款中有明確描述［4］:對多劑量藥物在打開容器第一次使用后，建立一個使用期限，在該時間期限內(nèi)制劑可以在保證質(zhì)量的前提下繼續(xù)使用。EMEA也提出使用期間穩(wěn)定性試驗的目的和概念［5－6］:建立一段時間，在此期間多劑量藥物可以在包材被啟封后保持質(zhì)量符合規(guī)定的情況下被應(yīng)用。ICH指導(dǎo)原則也明確規(guī)定［7］:對配伍或稀釋后的藥物進(jìn)行使用期間的穩(wěn)定性試驗并建立一個使用期限，為標(biāo)簽或說明書提供關(guān)于制備、貯存條件、配伍后藥物的使用期限等信息。

可見，使用期間穩(wěn)定性試驗主要針對兩部分制劑:用前需要重新配制的和/或多劑量包裝制劑。如注射用粉針，需適量的溶媒(如滅菌注射用水、氯化鈉注射液、葡萄糖注射液或其他適宜的溶劑)溶解后或者進(jìn)一步稀釋至大容量葡萄糖注射液或氯化鈉注射液中使用;為臨床用藥方便，采用多劑量包裝的一些軟膏劑、口服溶液劑、消毒劑、注射液等。

2 使用期間穩(wěn)定性試驗的意義

盡管我國現(xiàn)有指導(dǎo)文件中未涉及此部分內(nèi)容，但使用期間穩(wěn)定性試驗對保證制劑安全有效是不可或缺的內(nèi)容。臨床使用前需配制使用的藥物，在配制或稀釋時，不同種類、不同形態(tài)、不同體積的組分在混合過程中，或因受外界條件如溫濕度、日光、空氣和微生物等的影響下，可能會發(fā)生水解、氧化、潮解、異構(gòu)化及晶型轉(zhuǎn)變等物理化學(xué)變化，從而產(chǎn)生新的降解產(chǎn)物，導(dǎo)致雜質(zhì)譜的改變。對于多劑量包裝制劑，在初次使用時不可避免地接觸到空氣、水分、光等外界因素，可能影響其含量、外觀色澤、產(chǎn)生新的降解產(chǎn)物、使雜質(zhì)量增加，尤其是重復(fù)打開使用可能導(dǎo)致微生物的污染、細(xì)菌繁殖［6］，對藥物后續(xù)使用產(chǎn)生實質(zhì)影響，如果不進(jìn)行使用期間穩(wěn)定性試驗，則很難判斷藥物在使用期間是否穩(wěn)定。為了保證使用過程對藥物的質(zhì)量不產(chǎn)生影響，需要進(jìn)行相關(guān)的使用期間穩(wěn)定性試驗，以保證藥物配制時和配制后一定時間內(nèi)的質(zhì)量穩(wěn)定。

目前，我國獸藥研發(fā)企業(yè)較少關(guān)注使用期間穩(wěn)定性的考察，在說明書中涉及相關(guān)信息的更是少之又少。如粉針、注射劑等，缺少使用后的放置條件(溫度、濕度、避光)、使用期限等信息，無法有效指導(dǎo)用藥。而在獸藥審評中也缺乏統(tǒng)一的評價指標(biāo)，故迫切需要建立相應(yīng)的技術(shù)指導(dǎo)原則。

3 國外對藥物使用期間穩(wěn)定性試驗的規(guī)定

WHO技術(shù)報告953－藥物制劑標(biāo)準(zhǔn)［4］要求，如有可能，應(yīng)進(jìn)行使用期間穩(wěn)定性試驗，并規(guī)定:“試驗應(yīng)模擬實際的用法來設(shè)計，需要考慮容器的填充體積以及配制所用的稀釋溶劑;應(yīng)在與實際情況相對應(yīng)的間隔時間點(diǎn)取樣，采用說明書中標(biāo)注的方法抽取容器中適宜的藥量來進(jìn)行試驗;需要考察制劑使用期間適宜的物理化學(xué)和微生物特性。如果可能，應(yīng)在使用期限的中間點(diǎn)和末次時間點(diǎn)取容器中剩余的藥物進(jìn)行測定。應(yīng)考察特定的參數(shù)，如抗氧劑需要研究。”

ICH Q1A(R)新原料藥和制劑穩(wěn)定性試驗的指導(dǎo)文件［7］中也明確寫明:“必要時，對配制或稀釋后使用的制劑應(yīng)進(jìn)行穩(wěn)定性試驗，如果可行，應(yīng)進(jìn)行藥物的配伍或稀釋穩(wěn)定性試驗，為標(biāo)簽或說明書提供關(guān)于制備、貯存條件、配伍后藥物的使用期限等信息。試驗應(yīng)采用配伍后或稀釋后的產(chǎn)品進(jìn)行，要貫穿整個建議的使用期限，采用正規(guī)穩(wěn)定性試驗的主要批次樣品，在起始和終點(diǎn)時間點(diǎn)進(jìn)行。如果申報前無法得到貨架期的長期試驗數(shù)據(jù)，在12個月時間點(diǎn)或最終時間點(diǎn)進(jìn)行?！?/p>

EMEA在1998年頒布了滅菌制劑在首次開封啟用或配制后的使用期限的指導(dǎo)文件［5］。較為詳細(xì)地規(guī)定了如何在說明書中標(biāo)明使用期間穩(wěn)定性試驗的結(jié)果，以助于安全用藥。EMEA在2001年發(fā)布了關(guān)于人用藥物使用期間穩(wěn)定性試驗的指導(dǎo)文件［6］，明確規(guī)定了多劑量藥物使用期間穩(wěn)定性試驗的考慮要點(diǎn)，包括樣品批次的選擇、試驗設(shè)計、試驗貯存條件、試驗參數(shù)、分析過程、數(shù)據(jù)表示、數(shù)據(jù)評價、說明書等。EMEA認(rèn)為［6］，如果制藥企業(yè)未進(jìn)行相關(guān)的使用期間穩(wěn)定性考察，則從評價的角度認(rèn)為，屬于較大的技術(shù)缺陷，一般會要求補(bǔ)充提供，并隨著穩(wěn)定性試驗的主要文件一同提交。如果不進(jìn)行該項試驗，則應(yīng)提供充分的依據(jù)。

4 獸藥使用期間穩(wěn)定性研究的技術(shù)要求探討

目前ICH和WHO指導(dǎo)文件對使用期間穩(wěn)定性試驗提出了一般要求，但均未給出具體的試驗方法。實際上使用期間穩(wěn)定性試驗也應(yīng)包括完善的試驗設(shè)計方案、實施過程、試驗結(jié)果及評價，以得到準(zhǔn)確的試驗結(jié)論。使用期間穩(wěn)定性試驗涉及到樣品的批次和規(guī)模、樣品在穩(wěn)定性試驗中的時間要求、樣品考察方法、樣品放置條件、考察指標(biāo)及限度、測試時間點(diǎn)、分析方法、結(jié)果評價等要素。與常規(guī)穩(wěn)定性試驗相比二者既有相似處，又有明顯的區(qū)別。參考國外指導(dǎo)原則相關(guān)要求，結(jié)合在具體審評工作中遇到的實例，認(rèn)為獸藥使用期間穩(wěn)定性試驗要素中需要考慮如下方面。

4．1 樣品批次及規(guī)模 EMEA與WHO要求［5］:至少為2批，其中一批至少為中試規(guī)模。ICH要求采用與常規(guī)穩(wěn)定性試驗相同的主批次，但未明確采用的批次數(shù)目。因此，根據(jù)國外的技術(shù)要求，獸藥研發(fā)企業(yè)可以選擇2批中試規(guī)模樣品進(jìn)行使用期間穩(wěn)定性試驗，其中所選批次可以與常規(guī)穩(wěn)定性試驗中的批次相同，并結(jié)合穩(wěn)定性研究一起進(jìn)行考察。針對樣品為多個規(guī)格或采用多種包裝材料，可以參考EMEA指導(dǎo)原則的要求:“采用最容易引起變化的規(guī)格或包裝，同時應(yīng)說明選擇或不選擇某些規(guī)格和包裝材料的詳細(xì)原因”。使用期間穩(wěn)定性試驗并不一定對每一個規(guī)格和包裝材料均進(jìn)行試驗，但應(yīng)結(jié)合常規(guī)穩(wěn)定性試驗結(jié)果加以判斷，選取其中最不穩(wěn)定的規(guī)格和包裝材料進(jìn)行試驗，以說明在最惡劣規(guī)格和包裝下臨床使用期間的穩(wěn)定性。

4．2 試驗時間點(diǎn) 常規(guī)穩(wěn)定性試驗要求進(jìn)行系統(tǒng)的不同時間點(diǎn)的加速試驗和長期穩(wěn)定性試驗，以全面反映樣品本身的穩(wěn)定性，而使用期間穩(wěn)定性則在常規(guī)試驗的基礎(chǔ)上進(jìn)行，所用樣品應(yīng)是已進(jìn)行了一定時間的長期穩(wěn)定性試驗和影響因素試驗，其取樣點(diǎn)也應(yīng)結(jié)合長期穩(wěn)定性試驗的時間點(diǎn)設(shè)置。WHO和EMEA建議:使用期間穩(wěn)定性試驗應(yīng)在長期穩(wěn)定性試驗中貨架期末進(jìn)行，如果無法取得即申報時長期試驗時間未到貨架期末，則應(yīng)提供申報注冊時最后一次穩(wěn)定性時間點(diǎn)的使用期間穩(wěn)定性數(shù)據(jù)。ICH規(guī)定:使用期間穩(wěn)定性試驗應(yīng)在長期穩(wěn)定性研究開始時(T=0)以及在長期穩(wěn)定性試驗結(jié)束時(如24個月)取樣進(jìn)行。如果在申報時未能取得貨架期數(shù)據(jù)，則在第12個月或申報時可獲得的最后一個時間點(diǎn)進(jìn)行該項試驗。綜合上述規(guī)定，建議獸藥使用期間穩(wěn)定性試驗的時間點(diǎn)應(yīng)與ICH規(guī)定一致，即:2批，1批為T=0時，1批為貨架期末這樣要求的目的是保證樣品在生產(chǎn)放置足夠長時間以后，在開啟使用或配制后樣品仍然穩(wěn)定。

4．3 試驗方式及試驗期間樣品的放置條件 關(guān)于試驗方式，EMEA和WHO規(guī)定:應(yīng)盡可能模擬藥物使用的實際過程，考慮容器的填充體積以及使用前的配制和稀釋過程。如果在實際中需要抽取一定量的藥物或藥液，則試驗時應(yīng)模擬同樣的情形。取樣測定應(yīng)置于實際的使用環(huán)境下進(jìn)行。可見使用期間穩(wěn)定性試驗考察方式的基本原則是:盡可能模擬實際的使用過程，包括用法、用量、以及測試樣品的放置條件。模擬實際使用時的配制環(huán)境(溫度、濕度)及配制后的狀態(tài)(如可溶性粉在溶解后直至畜禽飲水結(jié)束)，測試在整個使用期間的穩(wěn)定性。

對于開啟后的樣品放置應(yīng)按照擬放置的要求存放，建議必要時采用橫放或倒置等方式，以考察在特殊放置位置下的使用期間穩(wěn)定性。整個試驗期間測試樣品均應(yīng)在擬定的保存條件下放置，并在說明書中收載。

4．4 試驗時間區(qū)間和測試時間點(diǎn)的設(shè)置 使用期間穩(wěn)定性試驗的主要目的之一是得到穩(wěn)定的使用期限，以保證此期間內(nèi)藥物的安全使用，因此在樣品配制或首次開啟使用后，測試的時間宜足夠長，應(yīng)覆蓋擬定的配制后或多次開啟后的使用期限。例如，配制后的樣品需要使用至第24 h，則應(yīng)至少將測試時間區(qū)間定為24 h。對于多劑量包裝制劑，在首次開啟使用后，如果擬定可以在10 d內(nèi)使用，則測試的時間區(qū)間至少定為10 d。還可以將測試時間區(qū)間定為直至質(zhì)量不符合要求為止，以獲得使用期間不穩(wěn)定時的時間點(diǎn)信息。

在確定了試驗時間的區(qū)間后，應(yīng)在實際測試過程中設(shè)置足夠多的測試時間點(diǎn)，以全面考察使用期間穩(wěn)定性。國外指導(dǎo)原則沒有對從測試時間點(diǎn)的設(shè)置提出相應(yīng)的技術(shù)要求。個人認(rèn)為，可根據(jù)藥品特性及臨用新配穩(wěn)定性和多劑量使用期間穩(wěn)定性的不同，充分考慮劑型特點(diǎn)和臨床使用情況，設(shè)置合適的測試時間點(diǎn)。例如，配制后的樣品需要使用至第8 h，則時間點(diǎn)設(shè)置可考慮定為 0、1、2、3、6、8 h 等時間點(diǎn)，如果測試結(jié)果表明有不穩(wěn)定趨勢，則建議增加取樣時間點(diǎn)，便于監(jiān)控到穩(wěn)定性不符合要求時的時間點(diǎn)，為藥物的使用提供依據(jù)。相反，如果樣品的使用期間穩(wěn)定性較好，則可相應(yīng)減少測試時間點(diǎn)。

4．5 考察指標(biāo)和限度的確定 參照《獸用化學(xué)藥物穩(wěn)定性研究技術(shù)指導(dǎo)原則》考察項目可包括pH、有關(guān)物質(zhì)、無菌、含量測定等。使用期間穩(wěn)定性試驗的指標(biāo)分為化學(xué)、物理、生物及微生物等方面。設(shè)置考察指標(biāo)時，首先選擇最能反映使用過程中穩(wěn)定性變化的項目，即注重指標(biāo)的靈敏性，有關(guān)物質(zhì)或雜質(zhì)通常屬于這一類指標(biāo)。其次，還應(yīng)注重指標(biāo)的全面性，需配制使用的藥物需要考察稀釋劑的相關(guān)指標(biāo)和檢測配制過程中引入的特定雜質(zhì)，含有抑菌劑、抗氧劑，需要考察使用期間抑菌劑和抗氧劑的含量變化，以直觀反映藥物多次使用期間的抑菌和抗氧性能，保證藥物使用安全。對于配制后使用的注射液，應(yīng)注意考察熱原或細(xì)菌內(nèi)毒素、無菌、不溶性微粒、顏色變化等。應(yīng)事先規(guī)定好各項目詳細(xì)的限度，限度的確定可參考產(chǎn)品的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，結(jié)合臨床前和臨床研究一并考慮。

4．6 分析方法和方法學(xué)要求 整個測試操作和分析方法應(yīng)明確。與常規(guī)穩(wěn)定性試驗一樣，使用期間穩(wěn)定性測試所采用的分析方法必須經(jīng)過驗證，證明其精密度、靈敏度、準(zhǔn)確度和重現(xiàn)性符合相應(yīng)的要求。分析方法應(yīng)考慮使用期間穩(wěn)定性試驗中的一些特殊情況，對于配制且稀釋后的藥物，在檢測有關(guān)物質(zhì)時，由于藥液濃度較低，需要注意有關(guān)物質(zhì)檢測方法的靈敏度是否符合相關(guān)要求，需要注意方法學(xué)驗證的要求。

4．7 試驗結(jié)果的評價 如果使用期間穩(wěn)定性測試結(jié)果表明各項考察項目符合預(yù)定的限度，則可證明在擬定的用法和使用環(huán)境下，在一定的使用期限和儲存條件下，配制后的樣品或多劑量包裝產(chǎn)品在使用期間是穩(wěn)定的。如果試驗結(jié)果表明使用期間的穩(wěn)定性無法保證，則應(yīng)分析原因，考慮修訂使用的環(huán)境、修改使用期間的儲存條件以及其他因素，重新進(jìn)行該項試驗，直至使用期間的穩(wěn)定性符合要求。

4．8 試驗結(jié)果在說明書中的體現(xiàn) 使用期間穩(wěn)定性試驗的目的是指導(dǎo)藥物安全使用，其試驗結(jié)果應(yīng)收入說明書中。參照EMEA指導(dǎo)原則規(guī)定，使用期間穩(wěn)定性試驗結(jié)果的以下內(nèi)容應(yīng)列入說明書:是否進(jìn)行了使用期間穩(wěn)定性試驗、推薦的使用期限、使用期間的貯存條件、與其他藥物或稀釋劑能否配伍使用、使用期間不穩(wěn)定現(xiàn)象描述及處理等信息。

目前，國內(nèi)對獸用化學(xué)藥品使用期間穩(wěn)定性試驗的要求還有待于提高，對其技術(shù)要求和試驗方法還需進(jìn)行深入研究，研發(fā)企業(yè)應(yīng)充分重視使用期間穩(wěn)定性考察，以保證臨床用藥的穩(wěn)定、安全和有效。

［1］ 獸藥試驗技術(shù)規(guī)范匯編［S］．2001．

［2］ 獸用化學(xué)藥物穩(wěn)定性研究技術(shù)指導(dǎo)原則［S］．2006．

［3］ 國家藥品食品監(jiān)督管理局．化學(xué)藥物穩(wěn)定性研究技術(shù)指導(dǎo)原則［S］．2005．

［4］ WHO．Guidelines for stability of pharmaceutical products containing well established drug substances in conventional dosage forms stability testing of active pharmaceutical ingredients and pharmaceutical products(draft)［S］．2007．

［5］ EMEA．Note for guidance on in － use stability testing of human medical products［S］．2001．

［6］ EMEA maximum shelf－ life for sterile products for human use after first opening or following reconstitution［S］．1998．

［7］ ICH．Q1A(R2)．Stability testing of new drug substances and products［S］．2003．