史洋，王小平，白吉慶，龍凱花

(陜西中醫(yī)學(xué)院，陜西 咸陽 712046)

連翹抗菌、抗病毒的藥理作用研究△

史洋，王小平，白吉慶*，龍凱花

(陜西中醫(yī)學(xué)院，陜西 咸陽 712046)

近年來關(guān)于連翹在抗菌、抗病毒方面的研究報道不斷增多，特別是應(yīng)用連翹在抗疫病方面的作用引起了人們的廣泛高度關(guān)注。作者對近年連翹在抗菌、抗病毒方面的研究進(jìn)行系統(tǒng)歸納，以期為闡明連翹清熱解毒作用機理進(jìn)行探討，并提出要研究不同組分的藥效和機制，結(jié)合體內(nèi)、體外及臨床療效對連翹抗菌、抗病毒的效果進(jìn)行全面評價的建議。

連翹；抗菌；抗病毒

連翹為木犀科植物連翹Forsythiasuspensa(Thunb.)Vahl的干燥果實。秋季果實初熟尚帶綠色時采收，除去雜質(zhì)，蒸熟，曬干，習(xí)稱“青翹”；果實熟透時采收，曬干，除去雜質(zhì)，習(xí)稱“老翹”。具有清熱解毒，消腫散結(jié)、疏散風(fēng)熱的功能，用于癰疽，瘰疬，乳癰，丹毒，風(fēng)熱感冒，溫病初起，溫?zé)崛霠I，高熱煩渴，神昏發(fā)斑，熱淋澀痛[1]。連翹是我國40種大宗藥材之一，臨床上廣泛用于由細(xì)菌、病毒引起的感染類疾病，雙黃連口服液、雙黃連粉針劑、清熱解毒口服液、連草解熱口服液、銀翹解毒沖劑、Vc銀翹片等以連翹為主要原料藥制備成的中藥制劑被廣泛應(yīng)用。作者就連翹抗菌、抗病毒研究報道進(jìn)行系統(tǒng)歸納，以期為進(jìn)一步的研究和開發(fā)提供參考。

1 抗菌作用研究

1.1 對大腸桿菌的作用

李德成等[2]用連翹的提取液，采用紙片法，以抑菌圈大小為參考指標(biāo)，觀察抑菌效果。研究結(jié)果顯示水提液,30%、50%、70%、95%乙醇提取液的抑菌圈分別為9.5，10.0，12.2，9.3，10.1 mm。馬雪梅等[3]用不同極性的溶劑提取連翹，用K-B紙片擴散法對提取物的抑菌活性進(jìn)行了初步研究，研究結(jié)果表明，連翹的乙酸乙酯提取液具有抑制大腸桿菌的作用。

1.2 對金黃色葡萄球菌的作用

虹韜等[4]用連翹提取液，采用紙片法，以抑菌圈大小為參考指標(biāo)，研究結(jié)果顯示水提液,30%、50%、70%、95%乙醇提取液對金黃色葡萄球菌的抑菌圈分別為15，16.33，17.0，17.31，19.07 mm。徐坤[5]采用濾紙片擴散法測定抑菌效果，結(jié)果表明連翹揮發(fā)油對金黃色葡萄球菌的抑菌圈大于10 mm，具有中、強度抗菌活性。

1.3 對傷寒沙門菌的作用

程曉莉等[6]用連翹乙醇提取物腹腔注射感染鼠傷寒的小鼠，觀察小鼠的生存時間，脾臟的重量指數(shù)，臟器菌落計數(shù)，檢測血清中抗體IgG水平，用ELISA法測定小鼠脾臟釋放的細(xì)胞因子，結(jié)果顯示經(jīng)連翹乙醇提取物治療的小鼠，與對照組相比，生存時間均延長，脾臟重量指數(shù)均降低，脾臟菌落計數(shù)均降低，血清中抗體IgG水平均升高，脾臟細(xì)胞分泌細(xì)胞因子IFN-γ水平均上升。說明連翹乙醇提取物能夠通過增強抗體的產(chǎn)生，調(diào)節(jié)細(xì)胞因子的釋放，增強宿主的體液免疫和細(xì)胞免疫功能，保護(hù)宿主抵抗胞內(nèi)菌的感染。

1.4 對大腸埃希菌的作用

任玲玲等[7]用連翹干粉的雙蒸水溶液作用于多重耐藥性大腸埃希菌，通過對連翹作用后的多重耐藥性大腸埃希菌AcrA基因產(chǎn)物的序列分析，可以看出多重耐藥性大腸埃希菌AcrA基因發(fā)生了24個堿基突變，說明連翹能夠改變大腸埃希菌AcrA基因的外排系統(tǒng)結(jié)構(gòu)，使大腸埃希菌對環(huán)境的適應(yīng)能力及抗菌藥耐藥水平下降，從而達(dá)到抑制大腸埃希菌的作用。

1.5 對多重耐藥性鮑曼不動桿菌的作用

黃瑞玉等[8]用對環(huán)丙沙星外排表型和外排泵編碼基因均為陽性的多重耐藥性鮑曼不動桿菌作為實驗菌株，應(yīng)用瓊脂對倍稀釋法檢測連翹水煎劑作用前后環(huán)丙沙星對細(xì)菌的最小抑菌濃度(MIC)，選取作用前后MIC變化較大的代表菌株進(jìn)行基因測序，并將作用前后的測序結(jié)果進(jìn)行比對分析。結(jié)果顯示連翹水煎劑可降低環(huán)丙沙星對多重耐藥性鮑曼不動桿菌的MIC；測序分析表明，連翹作用后鮑曼不動桿菌adeB基因序列共有12個堿基突變；突變發(fā)生氨基酸替換的有E140V、K145I、A147V、K150N、A151V、K153I。說明連翹水煎劑可引起鮑曼不動桿菌的主動外排泵編碼基因ade-ABC序列發(fā)生突變，抑制鮑曼不動桿菌的主動外排泵，從而達(dá)到抑制多重耐藥性鮑曼不動桿菌的作用。

1.6 對內(nèi)毒素的作用

傅強等[9]用致病大腸桿菌制造大鼠腹膜炎模型，分別采用慶大霉素、連翹提取液進(jìn)行治療，觀察各組動物血漿中IL-1、TNF-ɑ水平及其肝組織TNF-ɑ、IL-1 mRNA原位雜交結(jié)果。結(jié)果顯示連翹組血漿中IL-1、TNF-ɑ水平和肝組織TNF-ɑ、IL-1 mRNA表達(dá)水平低于慶大霉素組和腹膜炎模型組。說明連翹能抑制細(xì)菌內(nèi)毒素誘發(fā)的炎性因子的過度表達(dá)，從而具有拮抗內(nèi)毒素的作用。王耀等[10]以脂多糖(LPS)刺激RAW264.7細(xì)胞，用連翹提取物進(jìn)行干預(yù)，測定NO和TNF-ɑ含量，Western blot法檢測iNOS蛋白表達(dá)水平。結(jié)果顯示連翹在12.5～100 μg·mL-1濃度范圍內(nèi)可明顯抑制RAW264.7細(xì)胞釋放TNF-ɑ及NO，并可顯著抑制iNOS蛋白表達(dá)；說明連翹通過下調(diào)iNOS蛋白表達(dá)，抑制炎癥介質(zhì)TNF-ɑ及NO而發(fā)揮抗炎作用。

1.7 對表皮葡萄球菌的作用

李仲興等[11]采用連翹提取液對140株表皮葡萄球菌進(jìn)行體外抗菌活性的測定，結(jié)果顯示連翹對表皮葡萄球菌能抑制50%菌株的最低細(xì)菌濃度(MIC50)為0.122 g·L-1，抑制90%菌株的最低抑菌濃度(MIC90)為0.244 g·L-1。說明連翹對表皮葡萄球菌具有較好的體外抑菌效果。官妍等[12]采用體外構(gòu)建表皮葡萄球菌生物膜、XTT減低法評價連翹苷對表皮葡萄球菌生物膜內(nèi)細(xì)菌代謝的影響，顯微鏡下觀察用藥后表皮葡萄球菌生物膜形態(tài)和結(jié)構(gòu)改變。結(jié)果顯示連翹苷對表皮葡萄球菌生物膜菌的SMIC50為31.25 μg·mL-1，在顯微鏡下觀察，連翹苷使部分表皮葡萄球菌被膜的形態(tài)發(fā)生改變。說明連翹苷對生物膜菌的代謝和生物膜形態(tài)均有顯著影響。

2 抗病毒作用研究

2.1 對甲型流感病毒的作用

段林建等[13]用甲型流感病毒核蛋白(NP)基因轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞，用甲型流感病毒膠體金法檢測連翹苷對轉(zhuǎn)染后細(xì)胞內(nèi)和上清核蛋白表達(dá)情況，用實時定量反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測Hela細(xì)胞內(nèi)NP基因的拷貝數(shù)。重復(fù)4次轉(zhuǎn)染后48 h連翹苷組NP基因表達(dá)量為(2.1±0.3)×105拷貝數(shù)·μL-1，NP重組質(zhì)粒組NP基因表達(dá)量為(61.5±15.0)×105拷貝數(shù)·μL-1，連翹苷組NP基因表達(dá)量低于NP重組質(zhì)粒組。說明連翹苷可以抑制甲型流感病毒NP基因轉(zhuǎn)染后表達(dá)。

2.2 對人巨細(xì)胞病毒的作用

張丹丹等[14]用細(xì)胞病變法和MTT法，檢測連翹、槲皮素抗人巨細(xì)胞病毒的最小有效濃度，并與更昔洛韋進(jìn)行比較。結(jié)果顯示更昔洛韋、連翹及槲皮素的最小有效濃度分別為10，30，0.3 mg·L-1，槲皮素抗人巨細(xì)胞病毒的效果遠(yuǎn)高于更昔洛韋和連翹。證明連翹尤其是槲皮素具有良好的體外抗人巨細(xì)胞病毒效果。

2.3 對乙型腦炎病毒的作用

洪文艷等[15]以白紋伊蚊C6/36細(xì)胞為宿主細(xì)胞，阿昔洛韋為陽性對照藥物,通過細(xì)胞病變效應(yīng)(CPE)觀察法和改良MTT法來測定藥物抗乙型腦炎病毒對細(xì)胞的吸附作用以及藥物對乙型腦炎病毒在細(xì)胞內(nèi)復(fù)制增殖的抑制作用。結(jié)果顯示連翹濃煎液在16.0 mg·mL-1以上濃度用藥時有抗乙型腦炎病毒吸附細(xì)胞的作用，也能抑制乙型腦炎病毒在細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制增殖，半數(shù)有效濃度為7.6 mg·mL-1。說明連翹濃煎劑在體外細(xì)胞模型中有較好的抗乙腦病毒感染作用，作用機理可能是干擾病毒對細(xì)胞的吸附及抑制病毒在細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制增殖。

2.4 對呼吸道合胞病毒的作用

田文靜等[16]采用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，以病毒唑為陽性對照藥，比較觀察連翹水提液對呼吸道合胞病毒(RSV)引起的細(xì)胞病變的抑制作用。結(jié)果顯示連翹水提液抗呼吸道合胞病毒的半數(shù)有效濃度(EC50)為0.15 mg·mL-1；于感染呼吸道合胞病毒后0，2，4，6，8 h加入連翹水提液均有抑制呼吸道合胞病毒活性的作用。說明連翹在Hela細(xì)胞中對呼吸道合胞病毒有抑制作用。陳楊等[17]將連翹水提液經(jīng)水提醇沉法、大孔吸附樹脂柱層析法，洗脫劑洗脫分離得到連翹抗病毒有效部位LC-4，采用細(xì)胞病變效應(yīng)(CPE)觀察法和中性紅實驗法，以利巴韋林為陽性對照藥，測定LC-4在最大無毒濃度下于Hela細(xì)胞中對呼吸道合胞病毒的治療作用。結(jié)果顯示LC-4的半數(shù)有效濃度(EC50)為2.11 μg·mL-1。說明連翹抗病毒有效部位LC-4在體外對感染呼吸道合胞病毒的Hela細(xì)胞有明顯的治療作用。

2.5 對單純胞疹病毒的作用

劉穎娟等[18]通過細(xì)胞培養(yǎng)和活細(xì)胞染色計數(shù)法(MTT)，觀察研究連翹的有效成分在Hep-2細(xì)胞上抗單純胞疹病毒Ⅰ型的作用。結(jié)果顯示連翹4個部位的有效成分均有不同程度的抑制病毒復(fù)制的作用，其ED50分別為8.63、2.65、3.50、8.90 mg·mL-1。

3 討論

中藥連翹抗菌、抗病毒的研究結(jié)果表明，連翹不僅具有顯著的抗菌、抗病毒作用，而且還具有逆轉(zhuǎn)耐藥菌的作用。由于其成分復(fù)雜多樣，決定其作用機制的復(fù)雜性和多樣性，因此，有必要對連翹的全組分進(jìn)行提取，定向分離，研究不同組分的藥效和機制，尤其是提高其抗菌、抗病毒的有效成分的含量。目前大多數(shù)有關(guān)連翹抗菌、抗病毒的研究都是體外試驗，體內(nèi)試驗還相對較少，應(yīng)選擇合適的實驗方法，結(jié)合體內(nèi)、體外及臨床療效對連翹抗菌、抗病毒的效果進(jìn)行全面評價。在臨床治療中，抗菌藥的使用頻率較高，但濫用現(xiàn)象也很普遍，導(dǎo)致了藥物不良反應(yīng)和耐藥菌的增加，降低了藥物的療效，造成藥品浪費。中藥抗菌、抗病毒由于其特殊的作用機制以及不易產(chǎn)生耐藥性等特點，愈發(fā)受到學(xué)者們的關(guān)注，成為研究的熱點[19]。

[1] 國家藥典委員會.中國藥典[S].一部.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：159-160.

[2] 李德成，劉慶艷.連翹不同提取液對大腸桿菌體外抑菌作用比較[J].西南國防醫(yī)藥，2011，21(10)：1059-1060.

[3] 馬雪梅，馬文兵.連翹提取物的抑菌活性研究[J].光明中醫(yī)，2012，27(8)：1529-1531.

[4] 虹韜，李德成.連翹不同提取液對金黃色葡萄球菌體外抑制作用研究[J].山西中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2012，13(1)：36-38.

[5] 徐坤.連翹果實揮發(fā)油的分離抑菌研究及固體脂質(zhì)納米粒的制備[D].蘭州：西北大學(xué)，2012.

[6] 程曉莉，肖琴，劉明星，等.連翹乙醇提取物對小鼠抵御傷寒沙門菌感染能力的研究[J].中國藥師，2009，12(4)：435-438.

[7] 任玲玲，關(guān)立增.連翹對大腸埃希菌多重耐藥基因AcrA的影響研究[J].動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2008，29(5)：43-45.

[8] 黃瑞玉，穆小萍，柏彩英，等.連翹對多藥耐藥鮑曼不動桿菌主動外排泵編碼基因adeB的影響[J].中國病原生物學(xué)雜志，2011，6(2)：111-114.

[9] 傅強，崔華雷，崔乃杰.連翹提取物抑制內(nèi)毒素誘導(dǎo)的炎癥反應(yīng)的實驗研究[J].天津醫(yī)藥,2003，31，(3)：161-163.

[10] 王耀，方輝，高萬，等.連翹提取物對RAW264.7細(xì)胞生成NO及表達(dá)iNOS的影響[J].亞太傳統(tǒng)中藥，2012，8(2)：21-22.

[11] 李仲興，王秀華，趙建宏，等.連翹對金黃色葡萄球菌及表皮葡萄球菌的體外抗菌活性研究[J].天津中醫(yī)藥，2007，24(4)：328-331.

[12] 官妍，謝萌，汪長中，等.連翹苷和黃芩苷對表皮葡萄球菌生物膜抑制作用的研究[J].中國微生態(tài)學(xué)雜志，2010，22(10)：886-889.

[13] 段林建，張清，王農(nóng)榮，等.連翹苷對甲型流感病毒核蛋白基因表達(dá)的影響研究[J].中國全科醫(yī)學(xué)，2012，15(18)：2082-2084.

[14] 張丹丹，方建國，陳娟娟，等.連翹及其主要有效成分槲皮素體外抗人巨細(xì)胞病毒的實驗研究[J].中國中藥雜志，2010，35(8)：1055-1059.

[15] 洪文艷，唐博恒，劉金華，等.連翹濃縮煎劑抗乙型腦炎病毒的體外實驗研究[J].亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2010，6(12)：13-14.

[16] 田文靜，李洪源，姚振江，等.連翹抑制呼吸道合胞病毒作用的實驗研究[J].哈爾濱醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2004，38(5)：421-423.

[17] 陳楊，李鑫，周婧瑜，等.連翹抗病毒有效部位(LC-4)體外抗呼吸道合胞病毒作用的研究[J].衛(wèi)生研究，2009，38(6)：733-735.

[18] 劉穎娟，楊占秋，肖紅，等.中藥連翹有效成分體外抗單純皰疹病毒的實驗研究[J].湖北中醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2004，6(1)：36-38.

[19] 劉華鋼，申慶榮，劉麗敏.中藥抗菌研究進(jìn)展[J].時珍國醫(yī)國藥，2012，21(2)：463-465.

StudyonAnti-bacterial、Anti-viralEffectsoftheForsythiasuspensa

SHI Yang，WANG Xiao-ping，BAI Ji-qing*，LONG Kai-hua

(ShanxiUniversityofChineseMedicine，Xianyang712046，China)

Recently，the reports on the study about the antiviral，antibacterial effects ofForsythiasuspensaare increasing，especially its application in epidemic have attracted wide attention at present.In this paper，we systematically sum up the research findings about the antiviral，antibacterial functions ofForsythiasuspensa，to clarify the mechanisms ofForsythiasuspensain clearing heat and removing toxin.We try to investigate the possible pharmacodynamic effects and mechanisms of different components fromForsythiasuspensa，and furtherly put forward the overall evaluation methods about the antiviral，antibacterial effects ofForsythiasuspensaby in vivo，in vitro test and clinic trial.

Forsythiasuspensa；Anti-bacterial；Anti-viral

2013-05-02)

國家科技型中小企業(yè)技術(shù)創(chuàng)新基金(11C26216103652)

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白吉慶，副主任中藥師，從事中藥資源開發(fā)與抗腫瘤機制研究,Tel：(029)38184880，E-mail：baijiqing323@126.com