趙俊芳，喬趁峰，常聚普，楊玉巧，郭利民，李潔茹

(濮陽市林業(yè)科學(xué)院，河南濮陽 457000)

蘋果葉枯病病原立枯絲核菌Rhizctonia solani Kühn是近幾年河南蘋果樹上發(fā)生的一種新病害。主要分布在濮陽市南樂縣、清豐縣，安陽市內(nèi)黃縣，鄭州市中牟縣，商丘市虞城縣等地，幾年來發(fā)病日趨嚴(yán)重。2011年調(diào)查，嚴(yán)重果園病株率達(dá)到90%以上，病枝率達(dá)到50%以上。為掌握該病發(fā)生規(guī)律，我們自2008年開始對該病害進行研究，在確定該病病原的基礎(chǔ)上，對該病在豫北蘋果上的發(fā)病規(guī)律進行了系統(tǒng)研究，為生產(chǎn)上防治提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料和方法

1.1 寄主范圍的測試 立枯絲核菌菌株采自河南省內(nèi)黃縣中召鄉(xiāng)徐寨蘋果園葉枯病樹，用常規(guī)組織分離方法獲得。測試樹種有梨、桃、李、杏、山楂、棗、核桃、櫻桃、葡萄等。

1.1.1 室內(nèi)接種 每個樹種各采莖粗0.5～1 cm、長20～25 cm的1年生帶葉枝段6個，進行無傷接種。即枝段用70%酒精消毒后，把5 mm×5 mm的病原菌餅貼在枝條上，用無菌棉保濕、保鮮膜固定，下部放入盛有清水的三角瓶中，水以上部位套塑料袋，袋內(nèi)裝濕棉球保濕，然后置于28℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)。3～7 d觀察枝段菌絲生長和發(fā)病情況。7 d后取疑似病葉做分離純化培養(yǎng)，每個樹種分離5皿，每皿3點，共15點。24 h后調(diào)查感病點，對疑似點純化，最后確定是否感染絲核菌。

1.1.2 室外接種 在田間每個樹種選擇6個粗0.5～1 cm 1年生枝條，進行無傷和貼病葉接種。無傷接種方法同上，貼葉接種時用70%酒精消毒被接種葉片，將從田間采回的病葉貼到消毒過的葉片上，用無菌棉保濕、保鮮膜固定，整個枝條套上塑料袋，袋內(nèi)裝濕棉球保濕，每隔1 d加濕1次，3～7 d觀察田間菌絲生長和發(fā)病情況。7 d后采回田間疑似病葉做分離純化培養(yǎng)，方法同上，最后確定是否感染絲核菌。

1.2 侵染循環(huán)

1.2.1 病原菌的越冬場所 2010—2012年在早春3月從病樹上采回1年、2年和多年生病枝，老粗樹皮和病樹下土壤。

對從田間采回的病枝分葉芽(葉芽又分帶菌核和不帶菌核)、花芽(花芽又分表層、中間層、花心)、帶芽枝段、不帶芽枝段(帶菌核的和不帶菌核的)、芽鱗痕、枯葉，以及病樹主干基部樹皮等部位。各供試材料用清水沖洗并消毒后分別放入培養(yǎng)皿中，用無菌藥棉保濕，然后置入28℃的恒溫培養(yǎng)箱中保濕培養(yǎng)。每個部位3皿，每皿3～5個點。72 h后鏡檢帶菌情況。

采用5點取樣法采取病樹基部和病枝下部土壤，挑出雜草后分別裝袋，實驗室風(fēng)干，過20目篩，放入5℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

稱取準(zhǔn)備好的土壤樣品10 g，加到盛有100 mL無菌水的三角瓶中，搖床震蕩2 h，分別配成10-1，10-2，10-3的懸浮液，充分震蕩，靜置5 min。吸取不同濃度的懸浮液各1mL放入滅菌培養(yǎng)皿中(每個濃度培養(yǎng)3皿，連續(xù)做3次)，然后把PDA培養(yǎng)基倒入15～18 mL，并按住培養(yǎng)皿蓋輕輕地在臺面上劃轉(zhuǎn)小圈，順時針5圈，逆時針5圈，混勻后平放冷卻，凝成平板，置于28℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。1 d后，對疑似菌絲分離、純化，確定是否含有病原菌株。

1.2.2 侵染方式和途徑 供試品種為紅星和富士蘋果。

采用人工接種試驗法，2010—2011年對蘋果樹無病1年生枝進行室內(nèi)和室外接種試驗。室內(nèi)做有傷、無傷和葉片貼葉接種，以無菌水作對照，28℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，3～7 d觀察枝段菌絲生長和發(fā)病情況。室外接種72 h后觀察菌絲擴展和枝條、葉的發(fā)病情況，連續(xù)觀察7 d。每個處理10個重復(fù)。

1.2.3 田間發(fā)病期的觀察 2010—2012年每年在安陽市內(nèi)黃縣中召鄉(xiāng)徐寨自6月開始選代表性病株5株，選東、西、南、北、中5個方位各1枝進行定枝觀察，每3 d調(diào)查1次，記錄發(fā)病情況，統(tǒng)計菌絲、菌核和病葉出現(xiàn)的始期和盛期。

2 結(jié)果與分析

2.1 寄主范圍 室內(nèi)、外接種試驗結(jié)果見表1。

表1 絲核菌室內(nèi)、外接種感病點

從表1可以看出:絲核菌在棗樹、山楂、梨、核桃、桃、李、杏樹上接種后，室內(nèi)外分離純化后都有感病點。這7個樹種在室內(nèi)和室外的接種試驗中均分離到了該菌，說明棗樹、山楂、梨、核桃、桃、李、杏樹都是該病原菌的寄主。柿樹和櫻桃室內(nèi)接種后感病點分別為4/15和13/15，室外為0。這2個樹種在室內(nèi)接種后均分離到了該菌，但室外接種未發(fā)現(xiàn)，是否寄主還有待進一步驗證。葡萄室內(nèi)外接種后均未分離到該菌，說明該病原菌不能成功侵染葡萄。

2.2 侵染循環(huán)

2.2.1 病原菌的越冬場所和形態(tài) 1年生病枝上的花芽不論外層、中間層和心層均帶有大量的絲核菌，72 h后的帶菌點分別為 24/60，16/60，25/60;2年生病枝上的花芽也帶有絲核菌，帶菌點分別為1/45，3/45，1/45，明顯少于1年生的;3年生病枝上的花芽中間層未發(fā)現(xiàn)帶菌點。病枝上的葉芽外層和內(nèi)層均帶有絲核菌，72 h后的帶菌點分別為5/40和3/40。病樹的健康枝上、1～3年生病枝上的芽鱗痕均帶有該菌，72 h后的帶菌點分別為4/15，15/60，1/60，2/60。病枝上殘留的葉和葉柄72 h后的帶菌點為2/16。病枝上不帶菌核的樹皮、病枝上部健康樹皮、病枝附近健康枝上殘留的葉和葉柄、病枝上的皮孔、病樹主干基部樹皮、病樹下草莓和病樹下落葉均未發(fā)現(xiàn)病原菌。1～3 a的菌核經(jīng)過保濕培養(yǎng)均能生長。

病樹下基部和病枝下土壤培養(yǎng)分離純化后均未發(fā)現(xiàn)絲核菌。分析原因該病癥狀主要表現(xiàn)在1年生枝和葉上，在花芽、葉芽和芽鱗痕均能分離到病原菌，跟土壤關(guān)系不大，不同于禾本科植物感染絲核菌引起的枯萎病。

2.2.2 侵染方式和途徑 不同接種方式絲核菌72 h侵染率見表2。

表2 不同接種方式絲核菌72 h侵染率 %

從表2可以看出:不論有傷、無傷和貼病葉接種病原菌都可以侵染，但有傷侵染速度稍慢，室內(nèi)接種72 h侵染率為25%，室外為35%;無傷接種室內(nèi)為90%，室外為65%;貼葉接種室內(nèi)外均為90%。無傷和貼葉接種沒有顯著差別。

2.2.3 田間發(fā)病期 2010—2012年菌絲、菌核、病葉出現(xiàn)的始期和盛期見表3。

表3 菌絲、菌核、病葉的發(fā)生期

連續(xù)3 a的系統(tǒng)觀察得出:蘋果葉枯病絲核菌菌絲的發(fā)生期為6月底—7月上旬;菌核的產(chǎn)生期為8月上旬，形成盛期為9月中下旬;病葉產(chǎn)生的初期為7月上旬，盛期為7月中下旬—9月底。8—9月若遇陰雨連綿，則暴發(fā)成災(zāi)。

3 結(jié)論與討論

蘋果葉枯病病原絲核菌寄主范圍比較廣泛，薔薇科果樹基本上都能感染發(fā)病，可通過傷口或直接接觸侵入寄主，以菌絲和菌核在病花芽、葉芽、芽鱗痕和樹上的病葉上越冬。田間發(fā)病期觀察和室內(nèi)保濕培養(yǎng)證明:病原菌6月末—9月末均有侵染能力，7月中下旬—9月下旬為發(fā)病盛期。菌絲接觸葉片即可引起葉片干枯。菌絲在雨季生長旺盛，遇干旱或天氣變冷即停止生長形成菌核或菌絲團。在豫北蘋果栽培區(qū)，一般7月初開始發(fā)病，7月中下旬—9月底為發(fā)病盛期，10月初為末期。

［1］ 任飛娟，常聚普，賀偉，等.河南省蘋果新病害—絲核菌葉枯病病原鑒定［J］.中國果樹，2011(4):38-41.

［2］ 張永春，方宇澄，黃鎮(zhèn)，等.煙草主要土傳病害拮抗微生物生物菌株的篩選［J］.貴州農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009(8):93-94.