閻 昊，顧士棟，鄒 君，佟繼銘，劉永平

(河北省中藥研究與開(kāi)發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，承德醫(yī)學(xué)院中藥研究所，河北承德 067000)

滿藥赤雹根是葫蘆科植物赤雹(Thladiantha dubia Bunge，TDB)的干燥根，主要分布于華北、東北、內(nèi)蒙古等地區(qū)，資源豐富，為滿族民間沿用至今的一種藥物。赤雹根味苦、性寒，可治療乳汁不下、乳房脹痛以及多種慢性疼痛，如跌打損傷、肌肉痛、類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等，且無(wú)明顯的毒副作用，具有重要的開(kāi)發(fā)利用價(jià)值[1]。前期研究表明，赤雹根抗炎的主要成分赤雹根總皂苷(total saponins ofThladiantha dubiaroot，TSTDR)對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎(adjuvant arthritis，AA)模型大鼠具有良好的療效，并且能明顯降低AA模型大鼠血清腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、白介素-1β(IL-1β)以及白介素-6(IL-6)的含量[2]。本研究進(jìn)一步觀察了TSTDR對(duì)AA大鼠足跖部炎癥反應(yīng)病理學(xué)變化的改善作用。

1 材料與方法

1.1 藥品與試劑 TSTDR，承德醫(yī)學(xué)院中藥研究所制備;雷公藤多苷片，安徽新隴海藥業(yè)有限公司，批號(hào):100301;弗氏完全佐劑(FCA)，美國(guó)Sigma公司，批號(hào):100M8725。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及處理 健康雄性8周齡SD大鼠60只，體重180-200g，購(gòu)自北京華阜康生物科技股份有限公司，合格證號(hào):SCXK京2009-0007。大鼠隨機(jī)分為正常對(duì)照組，模型組，TSTDR低、中、高劑量組和雷公藤多苷組，每組10只大鼠。除正常對(duì)照組大鼠外，其余各組大鼠均于右后足跖部皮下注射FCA 0.1ml，以注射點(diǎn)周?chē)霈F(xiàn)明顯白泡為佳，以造模后第18d大鼠關(guān)節(jié)炎指數(shù)AI值≥6為模型建立成功。

于造模后第18d開(kāi)始，TSTDR各劑量組大鼠分別灌胃給予不同劑量的TSTDR(160、80、40mg/kg/d);雷公藤多苷組大鼠灌胃給予雷公藤多苷(12mg/kg/d);正常組和模型組大鼠分別灌胃給予相應(yīng)體積的蒸餾水;各組大鼠每天給藥1次，連續(xù)給藥21d。

1.3 關(guān)節(jié)炎指數(shù)AI值評(píng)分方法 0級(jí)，無(wú)紅腫，0分;1級(jí)，跖關(guān)節(jié)稍腫，1分;2級(jí)，小趾關(guān)節(jié)及足跖關(guān)節(jié)腫脹，2分;3級(jí)，踝關(guān)節(jié)以下足爪腫脹，3分;4級(jí)，包括踝關(guān)節(jié)在內(nèi)的全部關(guān)節(jié)腫脹，4分。AI值=非致炎3只肢體關(guān)節(jié)腫脹級(jí)別之和(最高分為12分)。

1.4 檢測(cè)大鼠足腫脹度 于給藥前(致炎后18d)以及給藥后第5d開(kāi)始，每隔4d用游標(biāo)卡尺測(cè)量大鼠左后足踝部直徑，并計(jì)算足腫脹度:足腫脹度(%)=[測(cè)量時(shí)踝部直徑值(cm)-造模前踝部直徑值(cm)]/造模前踝部直徑值(cm)。

1.5 組織病理學(xué)觀察 給藥結(jié)束后處死大鼠，剪取足跖部炎癥組織，10%甲醛固定液固定48h，常規(guī)石蠟包埋、切片，HE染色，10×20倍光鏡下觀察病理變化。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，組間比較行方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 TSTDR對(duì)大鼠足腫脹度的影響 與模型組相比，TSTDR高、中、低劑量組大鼠足腫脹度分別于給藥后第5d、9d、13d時(shí)明顯下降(P＜0.01);同時(shí)間點(diǎn)TSTDR各劑量組大鼠足腫脹度比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;給藥后第21d TSTDR 高劑量組大鼠足腫脹度明顯低于雷公藤多苷組(P＜0.05)。見(jiàn)附表。

附表 TSTDR對(duì)AA模型大鼠左后足腫脹度的影響(n=10，±s)

附表 TSTDR對(duì)AA模型大鼠左后足腫脹度的影響(n=10，±s)

與同時(shí)間點(diǎn)模型組比較:*P＜0.01，**P＜0.05;與同時(shí)間點(diǎn)雷公藤多苷組比較:△P＜0.05

組 別 劑量(mg/kg)給藥前 5d 9d 13d 17d 21d模型組 — 0.32±0.16 0.43±0.18 0.43±0.19 0.43±0.19 0.42±0.22 0.43±0.19 TSTDR低劑量組 40 0.33±0.11 0.29±0.11 0.26±0.13 0.21±0.09** 0.18±0.06** 0.16±0.06*TSTDR中劑量組 80 0.25±0.12 0.26±0.15 0.22±0.12** 0.17±0.09* 0.17±0.08** 0.13±0.09*TSTDR高劑量組 160 0.27±0.10 0.22±0.11** 0.13±0.10* 0.11±0.08* 0.12±0.06* 0.10±0.08*△雷公藤多苷組 12 0.24±0.10 0.24±0.16** 0.18±0.13* 0.14±0.03* 0.14±0.05** 0.18±0.10**

2.2 大鼠足跖部HE染色結(jié)果 正常對(duì)照組大鼠足跖部為完整的肌肉組織，無(wú)炎癥浸潤(rùn)及血管增生(附圖A)。模型組大鼠足跖部肌肉組織壞死，有大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，出現(xiàn)較多毛細(xì)血管增生，成纖維細(xì)胞大量生成(附圖B)。與模型組比較，TSTDR 80mg/kg/d組和雷公藤多苷組大鼠足跖部炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)水平明顯降低，但仍可見(jiàn)大量成纖維細(xì)胞(附圖C);TSTDR 160mg/kg/d組大鼠足跖部炎性細(xì)胞浸潤(rùn)水平與成纖維細(xì)胞數(shù)明顯降低，血管增生明顯減少，可見(jiàn)新生的肌肉組織(附圖D)。

附圖 大鼠足跖部HE染色結(jié)果

3 討論

類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)是以多發(fā)性和對(duì)稱性增生性滑膜炎為主要表現(xiàn)的慢性全身性自身免疫性疾病。由于炎癥加劇和緩解反復(fù)交替進(jìn)行，引起關(guān)節(jié)軟骨和關(guān)節(jié)囊的破壞，最終導(dǎo)致關(guān)節(jié)強(qiáng)直畸形[3]。RA的發(fā)病機(jī)理尚不明確，但有研究表明細(xì)胞因子網(wǎng)絡(luò)失衡，各種炎癥因子的表達(dá)相互促進(jìn)，形成惡性循環(huán)，持續(xù)作用于病變部位是導(dǎo)致關(guān)節(jié)侵蝕進(jìn)展的主要原因[4]。AA大鼠模型是常用的RA實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，與RA同樣表現(xiàn)為關(guān)節(jié)部位的腫脹、滑膜組織增生、大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)、血管增生以及骨組織的損傷等[5]。

本研究發(fā)現(xiàn)，TSTDR可明顯降低AA模型大鼠足腫脹度，表現(xiàn)出良好的抗炎效果，TSTDR 160、80、40mg/kg/d劑量組分別于給藥第5d、9d和13d顯示出治療作用。本研究提示，雖然不同劑量的TSTDR表現(xiàn)出相同的治療作用，但大劑量可更早達(dá)到治療效果。足跖部病理切片顯示，中劑量(80mg/kg/d)的TSTDR對(duì)于炎性細(xì)胞浸潤(rùn)這一炎癥的早期反應(yīng)即有一定的抑制作用，而對(duì)毛細(xì)血管增生、組織纖維化等無(wú)明顯抑制作用;而高劑量(160mg/kg/d)的TSTDR不僅能降低炎性細(xì)胞浸潤(rùn)水平，還能減少毛細(xì)血管增生和組織纖維化。本研究結(jié)果表明，各劑量TSTDR均有降低AA模型大鼠足腫脹度、抑制足跖部炎癥反應(yīng)的作用，并且，高劑量TSTDR的抗炎作用優(yōu)于陽(yáng)性對(duì)照藥雷公藤多苷，因此TSTDR可作為良好的抗RA藥物加以研究。

[1]宋立人，洪恂，丁緒亮，等.現(xiàn)代中藥大辭典[M].上冊(cè).北京:人民衛(wèi)生出版社，2001.1022.

[2]陳建雙，于海榮，張玉玲，等.赤雹根總皂苷對(duì)類(lèi)風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎大鼠血清細(xì)胞因子的影響[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2010，23(5):1097-1098.

[3]戴冽，湯美安.類(lèi)風(fēng)溫關(guān)節(jié)炎的診斷與治療[J].新醫(yī)學(xué)，1998，29(2):61-63.

[4]Cantagrel A, Navaux F, Loubet-Lescoulié P,et al.Interleukin-1beta, interleukin -1 receptor antagonist, interleukin -4,and interleukin -10 gene polymorphisms: relationship to occurrence and severity of rheumatoid arthritis[J].Arthritis Rheumatism,1999, 42(6): 1093-1100.

[5]Kawahito Y, Kondo M, Tsubouchi Y,et al.15-deoxy-delta(12,14)-PGJ(2)induces synoviocyte apoptosis and suppresses adjuvantinduced arthritis in rats[J].J Clin Invest, 2000, 106(2):189-197.