楊麗娟，顧地周，王曉偉，郭志欣，欒志慧，馮 穎

(通化師范學(xué)院 生命科學(xué)學(xué)院，吉林 通化 134002)

藜蘆(VeratrumnigrumL)為百合科(Lihaceae)藜蘆屬(evartmuLin)植物，又名黑藜蘆，山蔥.藜蘆是一種有毒植物，也是一種藥用植物，有祛痰催吐，殺蟲的功效，合理利用藜蘆的毒性，又有很多益處[1].水稻稻瘟病是水稻生產(chǎn)上的重要病害之一，是一種世界性稻作病害， 全球每年因稻瘟病造成的水稻產(chǎn)量損失達(dá)11%～30%，我國稻瘟病的年發(fā)生面積均在380萬 hm2以上，所造成的稻谷損失達(dá)數(shù)億公斤，給糧食安全帶來隱患.因此，以高效、低毒、低殘留的環(huán)境友好型生物農(nóng)藥逐漸替代傳統(tǒng)的高毒化學(xué)農(nóng)藥是農(nóng)藥發(fā)展的必然趨勢,而且從植物中尋找殺菌、抑菌、殺蟲活性物質(zhì)是當(dāng)今開發(fā)研制無公害新型藥劑的熱點(diǎn)之一[2-3].

本文以分布于長白山的藜蘆為材料，用不同溶劑進(jìn)行了梯度提取，并用提取物做了對水稻稻瘟病菌的生物活性測定，為今后在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的實(shí)際應(yīng)用提供了理論基礎(chǔ).

1 材料與方法

1.1 材料

藜蘆采于哈泥河自然保護(hù)區(qū)并經(jīng)鑒定，培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基，水稻稻瘟病菌由吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)友情提供.

1.2 方法

(1)藜蘆提取液的制備[4].將采集的藜蘆自然晾干或烘干后用粉碎機(jī)制成粉末，各取50g.分別用70%乙醇、60%丙酮、沸水，用索氏提取器提取8h，再濃縮到50ml，即為藜蘆提取液的母液.提取液經(jīng)0.22μm濾膜除菌,4℃冰箱貯存?zhèn)溆?

(2)無菌操作[5-6].無菌條件下,將滅菌培養(yǎng)皿分成9組，每組18個(gè)，將滅菌的培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中約1/3量，冷卻，制成固體培養(yǎng)基．將滅菌試管分成9組，每組6支，每組試管分別加入相應(yīng)提取液.各組試管提取液濃度依次為無菌水，6.25%，12.5%，25%，50%，100%不同方法提取的藜蘆根、莖、葉提取液.每皿加入1ml提取液，每個(gè)濃度重復(fù)3次，涂布，用打孔器取菌塊0.5cm，放入培養(yǎng)皿中間，然后在25oC培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng).

(3)供試植物提取液離體抗菌活性的測定．以菌絲生長速度法[7]測定提取液對病菌菌落生長的抑制作用，于培養(yǎng)48h ,72h, 96h測定菌落直徑，根據(jù)公式抑菌率=(對照菌落直徑-處理菌落直徑)/對照菌落直徑×100%計(jì)算抑菌效果.

2 結(jié)果

2.1 不同溶劑提取物的抑菌效果

表1～3說明用3種不同提取方法制備的藜蘆提取液，對水稻稻瘟病菌均有明顯的抑菌作用，抑菌作用與提取液濃度呈正相關(guān)．但抑菌效果有一定的差異．3種不同的提取溶劑的提取物中，70%乙醇提取物具有最強(qiáng)的抑菌作用．其次是60%丙酮提取物，沸水提取物抑菌效果較差．

2.2 植物不同部位提取物的抑菌效果

為了確定藜蘆的不同藥用部位的抑菌效果，以70%的乙醇提取藜蘆的根、莖、葉的活性成分進(jìn)行抑菌實(shí)驗(yàn)(表4)．結(jié)果說明,對供試菌的抑制作用最強(qiáng)的為葉，莖次之，根最弱．由于70%乙醇葉提取液的抑菌效果最好，故用此來確定最低抑菌濃度，最低抑菌濃度(MIC)為0.50g/mL[8].

表1 藜蘆葉提取液的抑菌效果

表2 藜蘆莖提取液的抑菌效果

表3 藜蘆根提取液的抑菌效果

表4 70%乙醇提取液的抑菌效果

3 討論

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明藜蘆各部位的沸水提取液、乙醇提取液、丙酮提取液對水稻稻瘟病菌均存在不同程度的抑菌效果，說明藜蘆是一種具有一定抑菌作用的植物.根據(jù)不同提取溶劑和不同提取部位抑菌效果比較，藜蘆的藥用成分提取最好使用藜蘆葉70%乙醇提取液.比較藜蘆對水稻稻瘟病菌的抑菌效果,發(fā)現(xiàn)藜蘆葉提取物對水稻稻瘟病菌的抑菌效果好于莖、根提取物.目前對中草藥提取物抑菌效果的檢測一般采用試管法或?yàn)V紙片法,但中草藥提取的藥液一般為顏色較深的制劑,用試管法常常會因?yàn)橹苿╊伾疃鴮?dǎo)致觀察不準(zhǔn)確,用濾紙片法則會因?yàn)橹胁菟帞U(kuò)散慢、抑菌弱,較難得到準(zhǔn)確的抑菌濃度[9-10].本實(shí)驗(yàn)將藥液涂于平板后，將菌塊置于培養(yǎng)皿中央培養(yǎng)，通過測量菌塊直徑的生長研究藜蘆的抑菌效果,避免了試管法或?yàn)V紙片法的不足,具有穩(wěn)定可靠且定量性好的優(yōu)點(diǎn),比較適合用于有色中草藥制劑抑菌濃度的測定.由于本實(shí)驗(yàn)采用此法判斷抑菌效果且以無菌落生長為最低抑菌濃度，故所測定的數(shù)據(jù)實(shí)際上是最低殺菌濃度.其結(jié)果為水稻稻瘟病菌的抑制提供了科學(xué)依據(jù).

參考文獻(xiàn)：

[1]劉新波,孔令武.藜蘆的開發(fā)與利用[J].中國林副特產(chǎn),1997,2(41):57.

[2]周其書,但守軍.山區(qū)水稻稻瘟病的發(fā)生與防治[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技,2010(16):179-181.

[3]曲慶華,馬學(xué)禮,劉春暉,等.水稻稻瘟病發(fā)病因素與防治對策現(xiàn)代化農(nóng)業(yè)[J].現(xiàn)代化農(nóng)業(yè),2010(5):29-30.

[4]金忠民,沙 偉,胡修茵,等.藍(lán)萼香茶菜提取液抑菌作用研究[J].廣西科學(xué),2007,14(2):160-162.

[5]林清洪,章寧,劉福平,等.銀杏外種皮提取液對幾種蔬菜和花卉病原菌的抑制效應(yīng)研究[J].福建農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào), 2005(20):87-89.

[6]陳笑笑,于海寧,應(yīng)優(yōu)敏,等.仙鶴草內(nèi)生真菌的分離鑒定與抗菌活性[J].浙江工業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2011(2):39-43.

[7]黃彰欣.植物化學(xué)實(shí)驗(yàn)保護(hù)指導(dǎo)[M].北京:農(nóng)業(yè)出版社,2000.

[8]王興華.多種藥用植物抑菌效果研究[J].山西大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2005,28(3):322-324.

[9]伍賢進(jìn),毛倩,劉勝貴,等.翻白草提取物的抑菌作用研究[J].遼寧中醫(yī)雜志,2007,34(9):1295-1296.

[10]王錦文,邊才苗.五味子提取物的抑菌和殺菌活性研究[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2008,36(16):6799-6800.