唐立萍，張瑞鎬，居 漪，王美娟，胡春力，諸佩超，詹方堯

(1.上海市臨床檢驗中心，上海200126;2.上海伊華醫(yī)學科技有限公司，上海201203)

載脂蛋白A1(apo A1)、載脂蛋白B(apo B)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)、膽固醇(CHOL)及甘油三酯(TG)是臨床生化脂質代謝檢驗的最常用的檢驗項目。對高血脂癥的篩選是針對心血管危險因素的常規(guī)檢查，具有重要的臨床檢測價值。為保證檢測結果的準確性和可靠性，實驗室應通過室內(nèi)質量控制(IQC)系統(tǒng)，使用質控品，確立質控標準，間接評價檢測結果的精密度，同時結合室間質量評價(EQA)間接評價檢測結果的準確性。但目前我國所用的多為國外進口質控品，面臨價格昂貴、入關難等問題。因此，我們研制了一種液體非定值血脂質控品，采用混合人血清為基質，可替代人血清用于臨床實驗室的日常IQC以及進行不同實驗室之間的EQA和檢測結果一致性調查使用。

材料和方法

一、材料

1.儀器和試劑 日立7180全自動生化分析儀。HDL-C、LDL-C、CHOL、TG 試劑盒由日本和光(Wako)純藥工業(yè)株式會社提供。apo A1、apo B試劑盒由羅氏診斷產(chǎn)品(上海)有限公司提供。

2.校準品 采用羅氏多項目校準品(c.f.a.s)、羅氏脂類多項校準品(c.f.a.s lipids)和Wako復合脂類校準品。

3.參考質控品 Bio-Rad血脂調查品。

4.主要原材料 人類免疫缺陷病毒(HIV)抗體、丙型肝炎病毒(HCV)抗體、乙型肝炎表面抗原(HBsAg)陰性的混合人血清，疊氮鈉，穩(wěn)定劑。液體 apo A1抗原、apo B抗原、HDL-C、LDL-C、CHOL及TG成分由上海北加生化試劑有限公司提供。

二、制備過程

選取HIV抗體、HCV抗體、HBsAg均陰性的血清混合，儲存于 -80℃凍存?zhèn)溆?。取潔?0 mL量筒及250 mL三角燒瓶各2個，用工藝用水沖洗3次，置37℃，烘干。按需量取上述備用人血清，檢測各成分濃度。按需添加apo A1抗原、apo B 抗原、HDL-C、LDL-C、CHOL 及 TG 等成分。經(jīng)核對無誤后，放入容器內(nèi)，添加萬分之二疊氮鈉及穩(wěn)定劑。將容器用薄膜密閉封口，上下左右輕輕振搖10 min，重復3次，每次間隔10 min，混勻。檢測中間品各成分，確定檢測值是否與預期值相符合(允許偏移≤15%)。用0.22 μm孔徑的硝酸纖維素濾膜抽濾，分裝，每瓶分裝1 mL，各分裝50瓶。置-20℃保存。

三、評價方法

校準儀器系統(tǒng)，所需檢測項目試劑重新定標。使用Bio-Rad血脂調查品做IQC。

1.精密度 取同批號的在-20℃密閉保存的自制質控品11瓶，每瓶檢測1次，計算測定結果的均值(1)和標準差(s1)，即批間精密度。另取其中1瓶連續(xù)測定11次，計算測定結果的2和s2，即批內(nèi)精密度;按下列公式計算瓶間重復性［變異系數(shù)(CV)］。

2.儲存穩(wěn)定性 質控品制備后各項目分別檢測2 次，計算，置 -20 ℃保存。分別于第4、5、11、13、14、16、18個月隨機抽取1瓶自制質控品，復溶、混勻后分別測定各項目2次，與其初始比較，計算偏移。偏移(%)=［(當月檢測值-初始檢測值)÷初始檢測值］×100%。

3.開瓶穩(wěn)定性 取在-20℃密閉保存的質控品，開封后置2～8℃密閉存放，每天檢測2次，取。連續(xù)檢測19 d，計算連續(xù)19 d檢測結果的變異系數(shù)(CV)。

結 果

一、精密度(瓶間差)

各項目精密度應≤1/4 CLIA’88可接受性能指標，即 apo A1、apo B、HDL-C、LDL-C 的 CV≤7.5%。CHOL的CV≤2.5%，TG的CV≤6.25%。檢測結果見表1。質控品各項目瓶間差均符合要求。

表1 自制質控品各項目精密度(瓶間差)

二、穩(wěn)定性

1.儲存穩(wěn)定性 偏移結果應符合1/2美國CLIA’88可接受性能指標規(guī)定，即apo A1、apo B、HDL-C、LDL-C的偏移≤±15%，CHOL的偏移≤±5%，TG的偏移≤ ±12.5%。自制質控品-20℃保存18個月，各項指標的穩(wěn)定性均符合要求。結果見表2。

2.開瓶穩(wěn)定性 各項目CV應≤1/4美國CLIA’88 可接受性能指標，即 apo A1、apo B、HDL-C、LDL-C的 CV≤7.5%，CHOL的 CV≤2.5%，TG的CV≤6.25%。自制質控品開瓶后連續(xù)檢測19 d，各項目CV均符合要求。結果見表3。

表2 自制質控品-20℃保存第1個月與第4、11、13、14、16及18個月結果比較

表3 自制質控品開瓶后連續(xù)檢測19 d結果

討 論

隨著社會經(jīng)濟的發(fā)展，生活水平的提高和生活方式的變化，我國血脂異常人群已達到1.6億［1］。大量研究表明血脂異常是心血管疾病和缺血性腦卒中發(fā)病的重要危險因素。因此，臨床工作中經(jīng)常采用血脂指標評估相關疾病的發(fā)病風險，如 TG、CHOL、LDL-C、HDL-C、apo A1、apo B等［2］。

為保證檢測結果的可靠性，IQC和EQA是質量管理體系中一個重要環(huán)節(jié)，其控制著整個實驗流程，如樣本吸取、樣本測定、結果分析等，是保證高質量操作的必要措施［3］。質控品是保證室內(nèi)質控工作順利進行的重要物質基礎。隨著醫(yī)學檢驗質量控制的開展和深入，生產(chǎn)質控品的單位日益增多，合格的質控品應具有分析物穩(wěn)定、均一、瓶間差異小、合理的分析物濃度和摻入成份對測定無干擾等特性，其中分析物的穩(wěn)定性是評價質控品優(yōu)劣的首要指標。

目前血脂指標有多種測定試劑及方法，各試劑方法間測定的敏感性及不精確度不同，樣本采集后，由于細胞的代謝活動、化學反應、微生物降解、滲透作用、光學作用等，都將直接或間接地影響到分析結果的準確性［4］。但受多種因素的影響，特別是試劑的質量不一，不同廠家的質控品穩(wěn)定性不一致，無論選用哪種均應滿足穩(wěn)定性好、基質效應小的要求。而進口質控品價格比較昂貴，入關較難。本研究采用混合人血清(HIV抗體、HCV抗體、HBsAg陰性)為基質，自制了液體非定值血脂質控品，可替代人血清用于臨床實驗室的IQC以及進行不同實驗室之間的(EQA)和檢測結果一致性調查使用。我國目前尚無血脂質控品的國家或行業(yè)標準，因此參考臨床實驗室質量控制現(xiàn)行主要評價方法，以美國CLIA’88可接受性能指標為實驗室EQA評價指標，以1/2 CLIA’88可接受性能指標為實驗室IQC評價指標。制訂以1/4美國CLIA’88可接受性能指標為本質控品精密度技術指標，以1/2美國 CLIA’88可接受性能指標為本質控品穩(wěn)定性技術指標。本研究中自制質控品的6項檢測指標精密度均符合1/4美國CLIA’88可接受性能指標。于-20℃密閉保存，連續(xù)18個月性能穩(wěn)定，6項檢測指標的偏移均＜1/2美國CLIA’88可接受性能指標，符合要求。開瓶后于2～8℃密閉保存連續(xù)19 d，性能穩(wěn)定，6項檢測指標19 d的偏移均＜1/4美國 CLIA’88可接受性能指標，精密度較好。本研究同時將Bio-Rad血脂質控品(進口)水平1和水平2進行了比較試驗，自制質控品精密度與之相似。開瓶后于2～8℃密閉保存可穩(wěn)定19 d，長于Bio-Rad血脂質控品說明書中的14 d。Bio-Rad血脂質控品-20℃密閉保存可穩(wěn)定約2年，而本研究自制質控品連續(xù)18個月性能穩(wěn)定，至于更長時間的穩(wěn)定性情況需作進一步研究。由于時間、實驗條件等限制，本研究自制質控品在不同儀器、不同試劑(方法)等的測定特性還有待進一步研究、完善。

綜上所述，本研究自制質控品均勻性、穩(wěn)定性都能滿足要求，且有原料來源方便，價格便宜之優(yōu)勢，有利于開展IQC和EQA，提高檢測質量。為國內(nèi)相關診斷試劑產(chǎn)業(yè)的全面、健康發(fā)展，為臨床實驗室間最終實現(xiàn)結果的準確、可比性提供可行的實驗技術支撐。

［1］中國成人血脂異常防治指南制訂聯(lián)合委員會.中國成人血脂異常防治指南［J］.中華心血管病雜志，2007，35(5):390-419.

［2］Burtis CA，Ashwood ER，Bruns DE.Tietz textbook of clinical chemistry and molecular diagnostics［M］.6th edition.St.Louis Missouri:Elsevier Saunders，2008:402-430.

［3］王治國，李小鵬，武平原.臨床檢驗定量測定室內(nèi)質控系統(tǒng)的建立［J］.檢驗醫(yī)學，2004，19(1):6-9.

［4］章晉林，張小鵬.血液標本的保存條件與保存時間對常規(guī)生化檢測結果的影響［J］.現(xiàn)代檢驗醫(yī)學雜志，2005，20(6):9-10.