張 淵，黎七雄 （武漢大學(xué)醫(yī)學(xué)院，湖北 武漢430071）

眾所周知氨基糖苷類抗生素主要的副作用是腎臟毒性，占所有急性腎功能損傷的10%～15%［1］。研究表明，慶大霉素 （GM）治療的病人中30%存在腎損傷［2］。已有實(shí)驗(yàn)研究報(bào)道，丹紅注射液對大鼠腎缺血再灌注損傷、糖尿病腎病均有保護(hù)作用，并且認(rèn)為其作用機(jī)制與抑制氧化應(yīng)激有關(guān)［3］。本實(shí)驗(yàn)通過建立健康SD大鼠的慶大霉素腎毒性動(dòng)物模型，應(yīng)用丹紅注射液進(jìn)行預(yù)防和治療干預(yù)，觀察丹紅注射液對慶大霉素腎損傷的保護(hù)作用，為臨床上丹紅注射液治療腎臟疾病提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1．1 材料

1．1．1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 雄性SD大鼠40只，體質(zhì)量180～240g，SPF級，由武漢大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

1．1．2 藥物與試劑 丹紅注射液 （濟(jì)南步長制藥有限公司）；慶大霉素注射液 （湖北天藥藥業(yè)股份有限公司）；尿素氮 （BUN）、肌酐 （Scr）、丙二荃 （MDA）、超氧化物歧化酶 （SOD）、過氧化氫酶（CAT）試劑盒均購于南京建成生物制品研究所。

1．2 方法

1．2．1 動(dòng)物分組、造模及給藥 SD大鼠40只，隨機(jī)分為空白對照組 （C組）、慶大霉素模型組（G組）、丹紅注射液低劑量組 （DHL組，GM＋丹紅注射液2．5ml／kg）、丹紅注射液中劑量組 （DHM組，GM＋丹紅注射液5ml／kg）、丹紅注射液高劑量組 （DHH組，GM＋丹紅注射液10ml／kg），每組8只。于造模前4d，以上各給藥組每天腹腔注射丹紅注射液1次，連續(xù)給藥10d，對照組和模型組則給予生理鹽水1．5ml。給藥第5天開始，模型組及各給藥組分別腹腔注射GM 100mg／kg（4ml／kg），同時(shí)空白對照組腹腔注射同體積生理鹽水，連續(xù)10d。大鼠末次給藥稱重后異氟醚麻醉，斷頭處死。

1．2．2 檢測指標(biāo) ①各組給藥24h后經(jīng)下腔靜脈取血2ml，全自動(dòng)生化分析儀測定血清尿素氮和肌酐水平。②各組給藥24h后取腎組織勻漿進(jìn)行SOD、CAT、MDA測定，分別按試劑盒說明書進(jìn)行操作、檢測和計(jì)算。③腎組織HE染色行形態(tài)學(xué)觀察。

1．3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié) 果

2．1 各組血肌酐和血尿素氮檢測結(jié)果

各組大鼠血肌酐和血尿素氮水平見表1。與慶大霉素模型組 （G組）比較，丹紅注射液各劑量組 （DHL組、DHM組、DHH組）血肌酐和血尿素氮水平顯著降低 （P＜0．01），表明丹紅注射液干預(yù)可有效降低慶大霉素引起的血肌酐和血尿素氮的升高。

2．2 各組SOD、CAT、MDA水平

各組大鼠腎臟組織SOD、CAT、MDA水平見表2。經(jīng)各組均數(shù)間的多重比較，與慶大霉素模型對照組 （G組）相比，丹紅注射液中劑組和高劑量 組 （DHM 組、DHH 組）腎臟組織SOD和CAT水平顯 著 升 高 （P＜ 0．01），MDA水平顯著降低 （P＜0．01），表明中劑量及高劑量丹紅注射液干預(yù)對慶大霉素腎損傷有保護(hù)作用。

表1 各組大鼠血肌酐、血尿素氮水平

2．3 形態(tài)學(xué)觀察

空白對照組腎組織層次清晰，細(xì)胞排列整齊，腎小球、腎小管、腎間質(zhì)結(jié)構(gòu)清楚可辨，無明顯充血、腫脹。慶大霉素模型組組織層次結(jié)構(gòu)不清晰，細(xì)胞排列紊亂，近端腎小管上皮細(xì)胞水腫，腎小管出現(xiàn)強(qiáng)嗜酸性團(tuán)塊，可見大量脫落的上皮細(xì)胞以及崩解的細(xì)胞碎片，腎小管片狀壞死，以腎髓質(zhì)外側(cè)帶近端腎小管最為嚴(yán)重。丹紅注射液低劑量組組織層次尚清晰，可見近端腎小管上皮細(xì)胞水腫，腎小管管腔擴(kuò)張。丹紅注射液中劑量組組織層次清晰，細(xì)胞排列整齊，腎小球、腎小管、腎間質(zhì)結(jié)構(gòu)清楚，無充血腫脹，與空白對照組接近。丹紅注射液高劑量組組織層次清晰，細(xì)胞排列整齊，腎小球、腎小管、腎間質(zhì)結(jié)構(gòu)清楚，無充血腫脹，與空白對照組接近。

表2 各組SOD、CAT、MDA水平

3 討 論

慶大霉素是臨床上治療革蘭氏陰性菌感染的有效藥物，由于其化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，殺菌作用快而成為臨床上的第一線治療藥。慶大霉素腎毒性作用引起腎功能損傷，血清肌酐和血尿素氮升高，出現(xiàn)蛋白尿，腎小球?yàn)V過率下降，最終致腎功能障礙［4-5］。慶大霉素腎毒性作用引起結(jié)構(gòu)異常：腎小球萎縮，腎小管壞死，腎小管纖維化，近端小管內(nèi)皮細(xì)胞水腫，腎小球肥大，血管周圍水腫和炎癥反應(yīng)，腎小球阻塞，伴有細(xì)胞脫落［6］。文獻(xiàn)報(bào)道有多種機(jī)制參與了慶大霉素腎毒性作用。慶大霉素引起巨噬細(xì)胞滲透增加，TGF-β水平升高，進(jìn)一步導(dǎo)致腎小管間質(zhì)性腎炎［7］。另外，溶酶體磷脂質(zhì)病和細(xì)胞凋亡也在慶大霉素的腎毒性作用中發(fā)揮了重要作用［8］。本研究發(fā)現(xiàn)，慶大霉素模型組SOD和CAT明顯降低，MDA顯著升高，進(jìn)一步證實(shí)了腎臟由慶大霉素所致的腎毒性是由于腎皮質(zhì)活性氧自由基產(chǎn)生增加所導(dǎo)致的。

丹紅注射液主要為丹參和紅花的復(fù)合制劑，具有活血祛瘀，擴(kuò)張血管，抗血小板積聚、抗凝，抗血栓作用。能改善微循環(huán)，降低血管壁的通透性，提高心肌鈣離子泵活性，抑制慢通道鈣離子內(nèi)流，促進(jìn)細(xì)胞膜上鈣鈉離子交換，降低血管內(nèi)皮細(xì)胞鈣離子濃度，使腎動(dòng)脈血管擴(kuò)管，改善腎血流［9］。已有研究表明，丹紅注射液可通過下調(diào)ICAM-1表達(dá)，減輕炎癥反應(yīng)對大鼠移植腎臟的缺血-再灌注損傷。He等［10］研究發(fā)現(xiàn)，缺血-再灌注損傷大鼠給予丹紅注射液治療，顯著增強(qiáng)腦組織SOD活性，降低MDA水平。本研究發(fā)現(xiàn)，丹紅注射液引起MDA的降低，升高SOD和CAT的水平，抑制氧化應(yīng)激過程，提高腎臟組織抗氧化應(yīng)激能力，有效地保護(hù)慶大霉素所致的腎損傷。

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