張明，倪穎，金偉華，呼永河 （．成都軍區(qū)總醫(yī)院藥劑科，四川 成都60083；．成都醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院，四川 成都6053）

萎胃寧顆粒是由白花蛇舌草、半枝蓮、香附、白術(shù)、高良姜、廣木香、延胡索組成的臨床經(jīng)驗(yàn)方。有清熱解毒，活血化淤，增強(qiáng)免疫力，防治癌變的藥效。用于治療慢性萎縮性胃炎、慢性淺表性胃炎。經(jīng)過(guò)多年的臨床應(yīng)用，已成為療效確切的經(jīng)驗(yàn)方。通過(guò)提取、濃縮、制粒等工藝設(shè)計(jì)，將原湯劑改為顆粒劑，為控制制劑質(zhì)量、確保臨床療效本實(shí)驗(yàn)采用TLC法對(duì)方中延胡索、白術(shù)進(jìn)行定性鑒別；用HPLC法測(cè)定方中主藥半枝蓮中野黃芩苷的含量，并初步考察了制劑的穩(wěn)定性。

1 材料

1．1 儀器 高效液相色譜儀（Agilent Technologies 1200 series）；分析天平（AL－204，梅特勒－托利多儀器上海市有限公司）；超聲波清洗器（HU－3120B型，功率120 W，頻率40 kHZ，天津市恒奧科技發(fā)展有限公司）；電熱鼓風(fēng)干燥箱 （101－2B型 ，上海市實(shí)驗(yàn)儀器總廠 ）；三用紫外燈（ZF－2型，上海市安亭電子儀器廠）；薄層色譜硅膠預(yù)制板（青島海浪硅膠干燥劑廠制造）。

1．2 藥物及試劑 萎胃寧顆粒由成都軍區(qū)總醫(yī)院藥劑科制劑中心提供（批號(hào)：110104、110105、110106）；延胡索對(duì)照藥材（批號(hào)：101215）、白術(shù)對(duì)照藥材（批號(hào)101109）；野黃芩苷對(duì)照品（批號(hào)：101201），對(duì)照藥品均由中國(guó)食品藥品檢定研究院提供；甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純，水為純化水。

2 方法與結(jié)果

2．1 定性鑒別

2．1．1 延胡索的 TLC鑒別［1］取供試品1g，研細(xì)，加甲醇60mL，超聲提取30min，濾過(guò)，濾液揮干，殘?jiān)铀?0mL使溶解，加濃氨試液調(diào)至堿性，用乙醚振搖提取3次，每次10mL，合并乙醚液，揮干，殘?jiān)蛹状?mL使溶解，作為供試品溶液。另取延胡索對(duì)照藥材1g，同法制成對(duì)照藥材溶液。取除延胡索的陰性樣品，按供試品溶液的制備方法制備陰性對(duì)照品溶液。照TLC法試驗(yàn)［1］，吸取上述3種溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一用1%氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以甲苯－丙酮（9∶2）為展開劑，展開，取出，晾干，置碘缸中約3min后，取出，揮干，置365nm紫外燈下。供試品色譜中，在于對(duì)照品色譜相對(duì)應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，而陰性對(duì)照無(wú)干擾。

2．1．2 白術(shù)的TLC鑒別 取供試品1 g，研細(xì)，加正己烷60 mL，超聲提取30 min，濾過(guò)，濾液揮干，殘?jiān)诱和? mL使溶解，作為供試品溶液。另取白術(shù)對(duì)照藥材0．4 g，同法制成對(duì)照品溶液，作為對(duì)照藥材溶液。照TLC法試驗(yàn)［1］，吸取上述3種溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60～90℃）－醋酸乙酯（50∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液，加熱，置254 nm紫外燈下。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)位置上，顯相同的斑點(diǎn)。

2．2 野黃芩苷測(cè)定

2．2．1 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取野黃芩苷4．0 mg加流動(dòng)相超聲定容于25 mL棕色量瓶中，制成濃度為0．16 mg·mL－1的野黃芩苷對(duì)照品溶液。

2．2．2 供試品溶液的制備 取樣品約0．2 g，精密稱重，置索式提取器中，加石油醚（60～90℃）提取至無(wú)色，過(guò)濾，置蒸發(fā)皿揮干，殘?jiān)眉状既芙獠⒕芏ㄈ葜?00 mL量瓶中，搖勻，精密量取50 mL，揮干，殘?jiān)?0%甲醇溶解并精密定容至10 mL量瓶中。

2．2．3 陰性樣品溶液的制備 按處方量取除半枝蓮?fù)獾钠溆嗨幉?，按制劑工藝及?．2．2”項(xiàng)下方法制成陰性樣品溶液。

2．2．4 色譜條件 色譜柱：Agilent C18（150 mm×4．6 mm，5μm）；流動(dòng)相為甲醇－水－醋酸（31∶61∶4）；檢測(cè)波長(zhǎng)：335 nm；體積流量：1．0mL·min－1；柱溫：30℃；進(jìn)樣量：20μL，理論塔板數(shù)不低于2 000，分離度不低于1．5。此色譜條件下野黃芩苷保留時(shí)間約為9．9 min左右，色譜圖見圖1。

2．2．5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 分別精密吸取0．16 mg·mL－1的野黃芩苷對(duì)照品溶液1，2，3，4，5，10 mL于10 mL量瓶中，再用流動(dòng)相分別定容后搖勻密封。依次進(jìn)樣分析，以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線［2］，回歸方程為Y＝154．46X＋130．16，r＝0．999。結(jié)果表明，野黃芩苷在0．016～0．16 mg·mL－1范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系。

2．2．6 精密度試驗(yàn)［3］分別精密吸取0．16 mg·mL－1的野黃芩苷對(duì)照品溶液20μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)得峰面積，RSD為0．54% （n＝6）。

2．2．7 重復(fù)性試驗(yàn)［4］取同一批號(hào)樣品適量，共6份，分別按“2．2．2”項(xiàng)下方法平行制備供試品溶液，按上述色譜條件測(cè)定峰面積并計(jì)算含量。結(jié)果，野黃芩苷的RSD為1．20%（n＝6）。

2．2．8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一批號(hào)供試品溶液適量，分別在0，2，4，8，12，24 h進(jìn)樣20μL，測(cè)定峰面積，RSD為1．15%（n＝6），表明供試品溶液（避光）至少在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2．2．9 加樣回收率 取已知含量樣品（含量：1．73 mg·g－1，批號(hào)110104）適量，共9份，每份0．2 g，再分別加入一定量野黃芩苷對(duì)照品溶液1，1，1，2，2，2，3，3，3 mL，按“2．2．2”項(xiàng)下方法制成供試品溶液，按上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，并計(jì)算加樣回收率，結(jié)果見表1。

2．2．10 樣品測(cè)定 取供試品3批，精密稱取樣品適量，按照按“2．2．2”項(xiàng)下方法，按上述色譜條件測(cè)定，結(jié)果見表2。

2．3 穩(wěn)定性考察［5］

2．3．1 樣品包裝及考察條件 取樣品（批號(hào)110104）以臨床試驗(yàn)用包裝（包裝材料——鋁塑的質(zhì)地與結(jié)構(gòu)相當(dāng)于上市藥品包裝）于室溫下放置，連續(xù)考察12個(gè)月。

表2 萎胃寧顆粒中野黃芩苷的含量測(cè)定結(jié)果（n＝3）Tab 2 Results of content determination of scutellarin（n＝3）

2．3．2 考察項(xiàng)目及方法依據(jù) 按2010年版中國(guó)藥典中顆粒劑穩(wěn)定性重點(diǎn)考察項(xiàng)目［1］操作，包括性狀、鑒別、含量、粒度、溶化性、微生物限度（細(xì)菌數(shù)、霉菌、酵母菌數(shù)、大腸埃希菌）、裝量項(xiàng)目。

2．3．3 影響因素試驗(yàn)

2．3．3．1 高溫試驗(yàn) 取樣品（批號(hào)110104）適量，除去外包裝，置適宜的開口容器中，于60℃放置10 d，分別于0，5，10 d時(shí)取樣，按“2．3．2”項(xiàng)下要求檢測(cè)。結(jié)果見表3。

2．3．3．2 高濕試驗(yàn) 取樣品適量，置恒濕密閉容器中，在25℃相對(duì)濕度（90±2．5）%條件下放置10 d，分別于0，5，10 d時(shí)取樣，按“2．3．2”項(xiàng)下要求檢測(cè)。結(jié)果見表3。

2．3．3．3 強(qiáng)光照試驗(yàn) 取樣品（批號(hào)110104）開口，于照度為（4 500±500）lx的條件下放置10 d，分別于0，5，10 d時(shí)取樣，按“2．3．2”項(xiàng)下要求檢測(cè)。結(jié)果見表3。

2．3．4 加速試驗(yàn)［6］取樣品（批號(hào)110104）適量，按上市包裝，于溫度（40±2）℃、相對(duì)濕度（75±5）%的條件下放置6個(gè)月，分別于第0，1，2，3，6個(gè)月末取樣1次，按“2．3．2”項(xiàng)下要求檢測(cè)。結(jié)果見表4。

2．3．5 長(zhǎng)期試驗(yàn) 取樣品（批號(hào)：110104）適量，按上市包裝，于溫度（25±2）℃、相對(duì)濕度（60±10）%的條件下放置24個(gè)月，分別于第0，3，6，9，12，18，24個(gè)月末取樣1次，按“2．3．2”項(xiàng)下要求檢測(cè)。結(jié)果見表5。

2．3．6 考察結(jié)論 萎胃寧顆粒樣品為期24個(gè)月的質(zhì)量考察結(jié)果表明，萎胃寧顆粒在24個(gè)月內(nèi)質(zhì)量穩(wěn)定，所以本品有效期定為2年。

表3 萎胃寧顆粒高溫、高濕、光照試驗(yàn)結(jié)果（批號(hào)：110104）Tab 3 Results of temperature，high humidity and illumination test（lot number：110104）

表4 萎胃寧顆粒加速試驗(yàn)結(jié)果（批號(hào)：110104）Tab 4 Results of accelerated test（lot number：110104）

表5 萎胃寧顆粒長(zhǎng)期試驗(yàn)結(jié)果（批號(hào)：110104）Tab 5 Results of long－term test（lot number：110104）

3 討論

本研究擬定TLC條件，對(duì)方中臣藥延胡索、白術(shù)兩味藥材進(jìn)行定性鑒別，展開效果良好，色譜斑點(diǎn)清晰，陰性對(duì)照無(wú)干擾。所建立的HPLC法，測(cè)定方中君藥半枝蓮中野黃芩苷含量時(shí)，方法靈敏，準(zhǔn)確、可行，重復(fù)性好，專屬性強(qiáng)，能準(zhǔn)確地控制產(chǎn)品中野黃芩苷的含量，可用于其質(zhì)量控制。

穩(wěn)定性考察結(jié)果顯示，24個(gè)月內(nèi)萎胃寧顆粒的質(zhì)量符合規(guī)定，在高溫、高濕、強(qiáng)光環(huán)境中均穩(wěn)定，表明萎胃寧顆粒在2年內(nèi)質(zhì)量穩(wěn)定。

［1］中國(guó)藥典．一部［S］．2010：130，附錄34，附錄201．

［2］郭美華，史文秀，王金華，等．高效液相色譜法測(cè)定安神益心液中異嗪皮啶的含量［J］．中國(guó)醫(yī)院藥學(xué)雜志，2011，31（2）：172．

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［4］張錦文，唐菲，張小瓊，等．高效液相色譜法測(cè)定金線蓮中金線蓮苷的含量［J］．2011，31（4）：261．

［5］謝秀瓊主編．中藥新藥制劑開發(fā)與應(yīng)用［M］．2版．北京：人民衛(wèi)生出版社，2000：315－316．

［6］魯漢蘭，徐雅敏，張亞金，等．疏肝舒乳顆粒穩(wěn)定性考察［J］．中藥材，2003，26（5）：367．