馬寧蔚，劉曉娟 （遼寧醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，遼寧 錦州121000）

脈沖式給藥系統(tǒng)（pulsatile drug delivery system，PDSS）是依據(jù)時辰藥理學(xué)并結(jié)合人體生理節(jié)律特點而設(shè)計，使脈沖制劑到達(dá)時滯后，迅速完全釋放藥物，有效減少用藥量及不良反應(yīng)，提高療效等。因人體血壓存在生物節(jié)律性，疾病的晝夜節(jié)律性易引起治療藥物體內(nèi)藥動學(xué)和藥效學(xué)的晝夜變化［1］。脈沖制劑可以根據(jù)疾病的晝夜節(jié)律特點釋放所需要的藥物治療量，提前預(yù)防或治療疾病。已上市的脈沖制劑如獲美國FDA批準(zhǔn)的首例擇時釋藥制劑，SEARLE公司的維拉帕米滲透泵片（COVERAHS）［2］。非洛地平（felodipine，F(xiàn)EL）為二氫吡啶衍生物家族中的新型鈣離子通道拮抗劑，可選擇性擴(kuò)張外周血管而降低動脈壓，口服藥物對各期高血壓均有效［3］。目前FEL緩釋片已有國家藥品標(biāo)準(zhǔn)品種，國外藥典僅美國藥典有收載，文獻(xiàn)報道FEL緩釋片較多，但FEL脈沖片國內(nèi)外報道較少。本實驗以FEL為模型藥物，結(jié)合時辰藥理學(xué)原理，采用薄膜包衣法研制爆破型脈沖釋放片，不但增加FEL的應(yīng)用劑型，而且提高療效，減少患者用藥不良反應(yīng)，具有重要的臨床應(yīng)用價值。

1 材料

1．1 儀器 ZRS－8G型智能溶出儀（天津大學(xué)無線電廠）；TDP－1．5型單沖壓片機(jī)（上海旺群制藥機(jī)械有限公司）；UV－2550紫外可見分光光度計（日本島津公司）。

1．2 試藥 FEL原料藥（湖北威德力化學(xué)科技有限公司，批號110906）；FEL對照品（南京易亨制藥有限公司，批號110122，含量99．9%）；乙基纖維素（EC，上海赫力思特化工有限公司）；羧甲基淀粉鈉（CMS－Na，煙臺永盛化工有限公司）；低取代羥丙基纖維（L－HPC，湖北海湖元化工有限公司）；聚乙二醇（PEG400、1500、6000，天津市東麗區(qū)天大化學(xué)試劑廠）；鄰苯二甲酸二丁酯 （DBP，天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司）；醋酸纖維素（CA，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司）；十二烷基硫酸鈉（SDS，沈陽天時興化工）；交聯(lián)羧甲基纖維素鈉（CCNa，安徽山河藥用輔料股份有限公司）；糊精（利達(dá)糊精有限公司）；乳糖（上海馳為實業(yè)有限公司）；微晶纖維素（MCC，曲阜市天利藥用輔料有限公司）；其余試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2．1 體外釋放度試驗方法建立

2．1．1 最大吸收波長的檢測 FEL在水中幾乎不溶，參照中國藥典2010年版，以0．3%SDS溶液為溶出介質(zhì)，水溶解性150 g·L－1（20℃），取FEL適量，加入0．3%SDS溶液定容，得到9．24μg·mL－1的FEL溶液；另取輔料按處方比例配制空白溶液。將兩種溶液在200～400 nm進(jìn)行紫外掃描。結(jié)果表明：FEL在362 nm處有最大吸收波長，見圖1。輔料在該波長附近無吸收，對FEL無干擾。

圖1 紫外光譜掃描圖Fig 1 UV－spectrum of blank

2．1．2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與穩(wěn)定性考察 取FEL貯備液，精確吸取0．5，1．0，1．5，2．0，2．5，3．0mL于25 mL的量瓶中，0．3%SDS溶液定容，在362 nm處測定吸光度值。以吸光度（A）為縱坐標(biāo)，以各溶液濃度（C：μg·mL－1）為橫坐標(biāo)，進(jìn)行回歸。回歸方程為：A＝0．023 94C＋0．045 62，相關(guān)系數(shù)為：r＝0．999 5（n＝6），線性范 圍為：2．31～13．86μg·mL－1。取質(zhì)量濃度為4．62μg·mL－1的貯備液，室溫放置48 h，分別于0，2，4，6，8，10，12，24，48 h在362 nm波長處測定吸光度值。計算得RSD為0．766%，實驗表明溶液在48 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2．1．3 回收率與精密度試驗 分別精密稱取FEL對照品14．2，31．1，46．8 mg各3份，分別按處方比例加入輔料，置于250 mL量瓶中，加0．3%SDS溶液定容。分別取續(xù)濾液1．5 mL至25 mL量瓶中，加0．3%SDS溶液定容。在362 nm處測吸光度，按上述標(biāo)準(zhǔn)曲線計算各溶液藥物濃度，計算回收率，平均回收率分別為101．54%，100．40%，99．63%。另取質(zhì)量濃度為4．62，9．24，13．86μg·mL－1的FEL溶液分別在1日內(nèi)每隔2 h內(nèi)測吸光度值，測6次，連續(xù)測6 d，測得吸光度代入標(biāo)準(zhǔn)曲線。平均日內(nèi)精密度分別為0．43%，0．18%，0．15%；平均日間精密度分別為0．40%，0．16%，0．15%，精密度良好，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于2%。

2．1．4 釋放度測定方法 避光操作。取本品，參照溶出度測定法（中國藥典2010年版二部附錄XC第二法），以0．3%SDS溶液溶液1 000 mL為溶出介質(zhì)，轉(zhuǎn)速50 r·min－1，依法操作，在預(yù)設(shè)時間點進(jìn)行取樣5 mL，并向各操作容器內(nèi)補(bǔ)加等溫同體積的溶出介質(zhì)，將續(xù)濾液在362 nm的波長處分別測定吸光度（A），按照標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣本濃度（C），計算每片在不同時間的累積釋放百分率（R%）。

2．2 脈沖片制備

2．2．1 制備片芯 經(jīng)過篩選，選取填充效果較好的糊精、乳糖、MCC按處方比例與FEL、L－HPC、硬脂酸鎂等混合均勻，濕法制粒并壓片，片芯重170 mg，含F(xiàn)EL5 mg。

2．2．2 FEL脈沖片制備 取適量CA、DBP、PEG、滑石粉加入至一定量的EC乙醇溶液中。在薄膜包衣試驗前，對制粒壓片等工序的技術(shù)指標(biāo)做了調(diào)整，提高顆粒的均勻度和細(xì)度，在壓片前加入適量高濃度乙醇和硬脂酸鎂，分別作為濕潤劑［4］和潤滑劑［5］，將片芯置于包衣鍋中，片床總重120 g。包衣鍋轉(zhuǎn)速60 r·min－1，調(diào)好包衣鍋角度，包衣槍噴速2 mL·min－1，間歇噴液，熱風(fēng)吹干。包衣完成風(fēng)干8 h。

2．3 FEL脈沖片釋藥影響因素

2．3．1 崩解劑種類對藥物釋放的影響 制備4種片芯，將 PVPP、CCNa、CMS－Na、L－HPC作為崩解劑，用量為8%。片芯其他組分不變。將片芯包衣，包衣液組分為7%EC乙醇溶液，8%PEG6000（占EC量），12%DBP（占EC量）、適量CA、滑石粉，包衣增重8%。考察崩解劑種類對FEL脈沖片釋藥的影響。結(jié)果見圖2。

由圖2所示，PVPP釋放較快，釋放時間為2 h；CCNa與CMS－Na釋放時間較接近為3 h；L－HPC釋放時間為4 h，在達(dá)到時滯的2 h內(nèi)累積釋放度達(dá)到95%以上。選用L－HPC為脈沖片崩解劑。

圖2 崩解劑種類對藥物釋放的影響（xˉ±s，n＝6）Fig 2 Influence of the types of disintegrating agent on the drug release（±s，n＝6）

2．3．2 增塑劑種類對藥物釋放的影響 以L－HPC為片芯的崩解劑，制備片芯然后包衣。包衣液組分：7%EC乙醇溶液，8%PEG6000（占EC量），適量CA、滑石粉，其中選用DBP、PEG400為增塑劑，用量12%（占EC量）；包衣增重8%?？疾煸鏊軇┓N類對FEL脈沖片釋藥的影響。結(jié)果見圖3。

圖3 增塑劑種類對藥物釋放的影響（±s，n＝6）Fig 3 Influence of the types of plasticizer on the drug release（±s，n＝6）

如圖所示，脂溶性DBP較難溶于溶出介質(zhì)，釋放藥物較慢，約4 h時開始釋放藥物，水溶性PEG400較易溶于溶出介質(zhì)，釋放藥物較快，約1．5 h時開始釋藥，故選用DBP為增塑劑。

2．3．3 致孔劑種類對藥物釋放的影響 以L－HPC為崩解劑，制備片芯然后包衣，包衣液組分7%EC乙醇溶液，12%DBP（占EC量）、適量CA、滑石粉；其中選用PEG400、PEG1500、PEG6000為致孔劑，用量8%（占EC量），包衣增重8%?？疾毂澜鈩┓N類對FEL脈沖片釋藥的影響。

如圖4所示，釋藥因致孔劑的不同而變化。PEG400約1 h開始釋藥；PEG1500約2 h；PEG6000約4 h左右。PEG400釋放較快，并且衣膜不透明；PEG1500釋放曲線較好，但時滯未達(dá)到設(shè)計要求；PEG6000成膜及釋放曲線均較好，釋藥時間達(dá)到設(shè)計要求，故選用PEG6000作為致孔劑。

圖4 致孔劑種類對藥物釋放的影響（±s，n＝6）Fig 4 Influence of the types of pore forming agent on the drug release（±s，n＝6）

2．4 均勻設(shè)計優(yōu)化處方 均勻設(shè)計是廣泛用于制劑處方篩選和優(yōu)化的方法［6－7］。預(yù)試驗結(jié)果：LHPC、DBP、PEG6000分別作為崩解劑、增塑劑、致孔劑。同時包衣層的增重對藥物釋放也有影響，現(xiàn)將崩解劑、增塑劑和致孔劑的用量、包衣層增重作為FEL爆破型脈沖片時滯的影響因素按四因素六水平優(yōu)化處方，以脈沖片藥物釋放10%所需時間為指標(biāo)（單位：min），見表1；釋放曲線見圖5。

表1 試驗方案及測試結(jié)果Tab 1 Results of the tests and experiment scheme

圖5 均勻設(shè)計處方釋放曲線（±s，n＝6）Fig 5 The release curve of the uniform design prescription（±s，n＝6）

經(jīng)擬合Y＝－209．778＋40．278X1－8．5X2＋12．5X3＋11．4X4；r＝0．932；P＜0．01，檢驗方程具有顯著性。驗證本回歸方程的準(zhǔn)確性，選取4個處方進(jìn)行驗證，并測釋放時間，見表2。根據(jù)實驗結(jié)果，回歸方程預(yù)測的釋藥時間與實測時間基本一致，本回歸方程具有可行性。

由回歸方程求得崩解劑為10%；增塑劑8．5%（占EC的量）；致孔劑7%（占EC的量）；包衣層增重10%，釋放時間越接近4 h。

表2 試驗方案及測試結(jié)果Tab 2 Results of the tests and experiment scheme

最佳處方片芯170 mg，F(xiàn)EL 5 mg，10%LHPC，26%糊精，56%乳糖，5%MCC。包衣液：7%EC乙醇溶液、DBP8．5%（占EC量），PEG6000 7%（占EC量）、適量CA、滑石粉；包衣增重10%。按此處方制備3批樣品，進(jìn)行體外釋放度考察，釋藥曲線見圖6。實驗結(jié)果表明脈沖片在（4．1±0．2）h左右釋放藥物，在時滯后（1．5±0．2）h內(nèi)，藥物釋放累積釋藥達(dá)到90%以上。

圖6 FEL爆破型脈沖釋放片最佳處方釋藥曲線（±s，n＝6）Fig 6 The best prescription drug release curve of FEL blasting type pulsed－release tablet（±s，n＝6）

3 討論

高血壓屬于夜發(fā)性和晨發(fā)性疾病，人體血壓在凌晨1至2時最低，然后緩慢升高。治療高血壓的普通制劑、緩釋或控釋制劑，通常在服藥后藥物就開始釋放。如晚間22時服藥，藥物即刻開始釋放，在不易發(fā)病的時間內(nèi)藥物維持了一定的濃度，到易發(fā)病的時間內(nèi)體內(nèi)藥物濃度不高卻又達(dá)不到所要求的水平，藥物就起不到預(yù)防和治療的作用。本實驗設(shè)計的非洛地平爆破型脈沖釋放片是根據(jù)人體生物時間節(jié)律特點設(shè)計，即患者在睡前服藥，藥物時滯約4 h，在時滯后（1．5±0．2）h內(nèi)開始釋藥，患者凌晨易發(fā)病時間內(nèi)有效釋放藥物，起到預(yù)防和治療的作用，同時可以避免胃內(nèi)容物對釋藥的影響。

采用紫外分光光度法，F(xiàn)EL于362 nm處有最大吸收波長，計算其回收率與精密度高，溶液穩(wěn)定性好，輔料對主藥不產(chǎn)生干擾。該法靈敏、簡便。文獻(xiàn)［8－9］制備爆破型脈沖制劑，以EC和丙烯酸樹脂為包衣材料，其中丙烯酸樹脂在包衣膜中起到致孔劑作用。本實驗根據(jù)爆破時間選用L－HPC為崩解劑。以EC為包衣材料，PEG6000為致孔劑，DBP為增塑劑，使脈沖制劑具有明顯時滯，藥物在預(yù)定時間內(nèi)有效快速釋放，達(dá)到設(shè)計要求。包衣液中使用DBP作為增塑劑可以使片劑的衣膜外觀較好；PEG6000作為致孔劑可提高片劑釋放藥物的能力。同時包衣層增重也是決定脈沖片時滯的主要因素，包衣液中加入適量滑石粉，可以幫助脈沖片更好地成膜，而少量CA在藥物的釋放過程中起到半滲透的作用。

本實驗采用均勻設(shè)計優(yōu)化處方。因試驗次數(shù)僅與需要考察的因素個數(shù)有關(guān)，相比傳統(tǒng)的正交設(shè)計法，均勻設(shè)計在條件范圍變化大而需要進(jìn)行多水平試驗的情況下，可減少試驗次數(shù)，只需要與因素水平數(shù)相等次數(shù)的試驗，即可達(dá)到正交設(shè)計的試驗效果［10－12］。本試驗按四因素六水平進(jìn)行優(yōu)化，對數(shù)據(jù)進(jìn)行線性回歸，求得最佳處方量，調(diào)整處方量使處方達(dá)到預(yù)設(shè)爆破時間，迅速釋藥。本試驗中，崩解劑的種類與用量、包衣層增重對脈沖片時滯有顯著的影響。調(diào)節(jié)以上兩者比例，對脈沖片的時滯將會有影響，F(xiàn)EL爆破型脈沖片的質(zhì)量評價和體內(nèi)藥動學(xué)有待實驗與考察。

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