摘要：通過(guò)正交試驗(yàn)分析了續(xù)隨子（Euphorbia lathylris Linn.）中2種大環(huán)二萜類化合物（Euphorbia factor L1和Euphorbia factor L2）的最佳提取工藝，并通過(guò)紫外-可見(jiàn)分光光度法對(duì)這兩類大環(huán)二萜類物質(zhì)的含量進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果表明，樣品的最佳提取條件為無(wú)水乙醇提取，料液質(zhì)量比為1∶20，40 ℃下超聲提取50 min。大戟因子L1在9.6～48.0 mg/L，大戟因子L2在5.9～29.5 mg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系較好，在續(xù)隨子種子中的含量分別為0.995%和0.538%。該法簡(jiǎn)便可行，重現(xiàn)性好，可用于續(xù)隨子種子中的大環(huán)二萜類化合物的測(cè)定。

關(guān)鍵詞：續(xù)隨子（Euphorbia lathylris Linn.）；大環(huán)二萜；紫外-可見(jiàn)分光光度法

中圖分類號(hào)：O657.32 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2013）04-0927-02

Determination of Two Macrocyclic Deterpenes in the Seeds of Euphorbia lathylris Linn. by UV-Vis Spectroscopy

CHENG Ying，HU Jian-ping

（Center for Functional Molecular Design， College of Chemistry and Life Science， Leshan Normal University， Leshan 614004， Sichuan，China）

Abstract：The extraction techniques of two macrocyclic diterpenoids （Euphorbia factor L1 and L2） in the seeds of Euphorbia lathylris Linn. were optimized by the the orthogonal experiment and detected UV-Vis Spectroscopy. The result showed that the optimized extration process was using enthanol as extractant with was ratio of solid to liquid at 1∶20， extract at 40 ℃ for 50 min. The liner range of L1 and L2 were 9.6～48.0 mg/L and 5.9～29.5 mg/L respectively. The content of L1 and L2 were 0.995% and 0.538% respectively. In conclusion， it was a simple， convenient， stable， repeatable method for analyzing L1 and L2 in the seeds of E. lathylris Linn.

Key words： Euphorbia lathylris Linn； macrocyclic diterpenoids； UV-Vis spectroscopy

續(xù)隨子（Euphorbiae Lathyridis L.）又名千金子，為大戟科大戟屬1～2年生草本油料及藥用植物，其植株種含有多種二萜類化合物[1]。這類物質(zhì)不僅骨架特殊，而且還具有較強(qiáng)的細(xì)胞毒性和抗腫瘤活性[2]，是一種尚待開(kāi)發(fā)、有望成為治療人類重大疾病的新藥源植物。目前國(guó)內(nèi)外學(xué)者對(duì)續(xù)隨子種子的各種生理活性以及大環(huán)二萜類物質(zhì)性質(zhì)研究較多[3-6]，本試驗(yàn)主要是針對(duì)續(xù)隨子種子中的兩種大環(huán)類物質(zhì)（Euphorbia factor L1和Euphorbia factor L2，圖1），以紫外-可見(jiàn)分光光度法分析，建立L1和L2的最佳提取工藝[5-7]和測(cè)定方法，以期為后續(xù)續(xù)隨子開(kāi)發(fā)提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

續(xù)隨子種子，購(gòu)于成都五塊石藥材市場(chǎng)，經(jīng)四川大學(xué)植物系統(tǒng)與分子進(jìn)化實(shí)驗(yàn)室鑒定為大戟科（Euphorbiaceae）大戟屬（Euphorbia）植物續(xù)隨子（Euphorbia lathylris Linn.）；標(biāo)準(zhǔn)品由本實(shí)驗(yàn)室從續(xù)隨子種子中提取，經(jīng)1H-NMR、13C-NMR、四原單晶等鑒定為Euphorbia L1和Euphorbia L2。無(wú)水乙醇（分析純），購(gòu)于國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

1.2 儀器

TU1901-紫外可見(jiàn)雙光束分光光度計(jì)（北京普析通用儀器有限責(zé)任公司）、KQ3200型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.3 方法

按照藥典中對(duì)紫外-可見(jiàn)分光光度法定量分析的要求[8]，從樣品的最大吸收波長(zhǎng)、線性關(guān)系、儀器的精密度、重現(xiàn)性、穩(wěn)定性等進(jìn)行分析，對(duì)L1和L2的含量進(jìn)行測(cè)定。

1.3.1 樣品制備 稱取續(xù)隨子種子粗粉，針對(duì)乙醇濃度、料液比、提取時(shí)間以及提取溫度等條件進(jìn)行單因素分析和正交試驗(yàn)，建立續(xù)隨子種子中L1和L2的最佳提取工藝[5]。將提取液靜置過(guò)夜，取上清液于272 nm測(cè)定其吸光度。

1.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 稱取L1和L2，分別以無(wú)水乙醇配制濃度為1.92 g/L和1.18 g/L的標(biāo)準(zhǔn)母液，將標(biāo)準(zhǔn)母液稀釋10倍，從稀釋液中準(zhǔn)確量取0.5、1.0、1.5、2.0、2.5 mL于各比色管中，以無(wú)水乙醇定容至10 mL，以對(duì)照品濃度為橫坐標(biāo)，吸光度值為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3.3 含量分析 利用回歸方程計(jì)算樣品提取液濃度c（g/L），并通過(guò)下式計(jì)算百分含量ρ（%），ρ=cV/m×100%其中V（L）為續(xù)隨子提取液的體積，m（g）為續(xù)隨子種子粗粉質(zhì)量。

2 結(jié)果

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線

將L1和L2工作溶液于272 nm處測(cè)定，其中L1的線性方程為y=0.016 3x+0.029 1，r=0.999 5，線性范圍為9.6～48.0 mg/L；L2的線性方程為y=0.026 5x+0.044 5，r=0.999 5，線性范圍為5.9～29.5 mg/L。

2.2 提取工藝探討

通過(guò)單因素分析和正交試驗(yàn)選擇續(xù)隨子種子中L1和L2的最佳提取工藝[5]。結(jié)果表明，最佳提取試劑為無(wú)水乙醇，料液比為1∶20，提取溫度40 ℃，超聲提取50 min。

2.3 精密度試驗(yàn)

將濃度分別為28.8 mg/L和17.7 mg/L對(duì)照品溶液，在272 nm處連續(xù)測(cè)定3次，其吸光度平均值分別為0.510 3和0.521 8，RSD分別為0.89%和0.77%（n=3），表明方法精密度良好。

2.4 重現(xiàn)性試驗(yàn)

精確稱取4份續(xù)隨子種子粗粉，每份2.0 g，按照上述方法進(jìn)行分析，L1和L2的平均含量分別為0.995%和0.538%，RSD為1.74%和1.78%。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一份續(xù)隨子種子樣品溶液，在室溫下放置0～9 h后測(cè)定，其RSD分別為1.02%和0.99%，表明這2種大環(huán)二萜類物質(zhì)在9 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.6 樣品含量的測(cè)定

準(zhǔn)確稱取續(xù)隨子種子2.0 g，按照上述方法進(jìn)行分析，取提取液0.50 mL于10 mL比色管中，無(wú)水乙醇定容，在272 nm處測(cè)定吸光度，計(jì)算樣品中這兩類大環(huán)二萜類物質(zhì)的含量，結(jié)果見(jiàn)表1，其中L1和L2含量分別為0.995%和0.538%。

2.7 加標(biāo)回收試驗(yàn)

準(zhǔn)確稱取續(xù)隨子種子粗粉2.0 g，在最佳提取條件下提取，離心，取提取液0.5 mL分別加入不同體積（0.2～1.0 mL）的L1和L2標(biāo)準(zhǔn)液（0.192 g/L和0.118 g/L），以無(wú)水乙醇定容至10.0 mL，測(cè)定272 nm處吸光度值，計(jì)算出L1和L2的回收率，結(jié)果如表3、表4所示。

3 結(jié)論

本試驗(yàn)采用紫外-可見(jiàn)分光光度法測(cè)定了續(xù)隨子種子中2類大環(huán)二萜類物質(zhì)的含量，其中Euphorbia factor L1在9.6～48.0 mg/L，Euphorbia factor L2 在5.9～29.5 mg/L范圍內(nèi)線性關(guān)系較好，在續(xù)隨子種子中的含量分別為0.995%和0.538%，與采用HPLC法初步測(cè)定的結(jié)果[5]基本一致。本方法操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)成本低，快速，重現(xiàn)性好、精密度高，回收率和線性關(guān)系符合分析要求，可用于續(xù)隨子中的L1和L2快速分析。

參考文獻(xiàn)：

[1] 徐任生.天然產(chǎn)物化學(xué)[M].第二版.北京：科學(xué)出版社，2004.361.

[2] 孫洪峰.千金子化學(xué)成分的研究[D].長(zhǎng)春：吉林大學(xué)，2009.

[3] 焦 威，魯 璐，鄧美彩，等.千金子化學(xué)成分的研究[J].中草藥，2010（2）：181-187.

[4] 王思明，王 溪，蘇曉會(huì)，等.續(xù)隨子中千金二萜烷化合物抑制人婦科腫瘤細(xì)胞增殖活性的研究[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2011，27（6）：774-776.

[5] 成 英，何興金.續(xù)隨子種子中兩種大環(huán)二萜類物質(zhì)的提取工藝[J]. 時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2011，22（5）：1267-1269.

[6] CARLO B， GIOVANNI A， CORDERO C， et.al. HPLC-UV and HPLC-positive-ESI-MS analysis of the diterpenoid fraction from caper spurge（Euphorbia lathyris） seed oil[J]. Phytochemical Analysis，2001，12（4）：255-262.

[7] 李秋紅. 花生紅衣中總黃酮的提取工藝[J].食品研究與開(kāi)發(fā)，2009，30（11）：93-96.

[8] 國(guó)家藥典委員會(huì). 中華人民共和國(guó)藥典[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010.