摘要：采用正交試驗篩選山豆根多糖的最佳提取工藝。結(jié)果表明，山豆根多糖的最佳提取工藝為料液比1∶10（m/V，g∶mL），提取2次，提取時間90 min，此條件下山豆根多糖提取率為3.62%。該方法簡便、準(zhǔn)確、靈敏度高，適用于山豆根多糖的提取。

關(guān)鍵詞：山豆根；多糖提取；正交試驗

中圖分類號：R284.2 文獻標(biāo)識碼：A 文章編號：0439-8114（2013）04-0898-02

Optimization of the Microwave-assisted Extraction Technology of Polysaccharides

from Sophora tonkinensis

PENG Xiang-jun1，2，LI Yin-bao1，LI Qing-song1

（1. College of Pharmacy， Gannan Medical University， Ganzhou 341000， Jiangxi， China；

2. College of Chemistry and Chemical Engineering， Gannan Normal University， Ganzhou 341000， Jiangxi， China）

Abstract： Orthogonal experimental design was used to optimize the extraction technology of polysaccharides from Sophora tonkinensis Gapnep.. The content of total polysaccharides was determined by phenol-vitriolic colorimetry. The optimum extraction technology of polysaccharide was as followed， solid to liquid ratio， 1∶10（m/V，g∶mL）； extraction time， 90 min； extracting twice. The content of polysaccharide was 3.62%. The method was simple， accurate， sensitive and suitable for extraction polysaccharide from S. tonkinensis.

Key words： Sophora tonkinensis Gapnep.； polysaccharides extraction； orthogonal experiment

山豆根為豆科植物越南槐（Sophora tonkinensis Gapnep.）的干燥根及根莖，別名山大豆根、苦豆根，其有效化學(xué)成分有黃酮、生物堿、皂苷、酚類、木質(zhì)素及多糖類，在臨床上，山豆根具有抗心率失常、抗肝炎、消炎等藥理作用。據(jù)記載，山豆根在傳統(tǒng)中藥中用于清熱解毒、消腫止痛[1]?！吨腥A人民共和國藥典2005版》記載其主治功能有清熱解毒、消腫利咽，用于治療火毒蘊結(jié)、咽喉腫痛、齒齦腫痛等[2]。

多糖是存在于自然界的醛糖或酮糖通過糖苷鍵連接在一起的聚合物[3]。它是由10個以上單糖聚合而成，在自然界分布極廣，其來源有動物、植物、微生物等。多糖是一切生命有機體必不可少的成分，具有能量儲存、結(jié)構(gòu)支持、防御和抗原決定性等多方面的生物功能，多糖及其衍生物還有多種藥理活性。多糖的提取方法有溶劑提取法、酸提法、堿提法、酶提法、超濾法、超聲波輔助提取法和微波輔助提取法[4，5]。純化的方法主要有醇沉法、色譜法、電泳法和超濾法。

該研究以微波輔助提取法提取山豆根粗多糖，采用正交試驗優(yōu)化山豆根多糖的提取工藝。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥材與試劑 山豆根購自贛州市青年路華爾康大藥房，于80 ℃烘至恒重，粉碎并過40目篩，于干燥處保存?zhèn)溆肹6]。葡萄糖對照品購自中國藥品生物制品檢定所，無水乙醇、濃硫酸等試劑均為分析純，試驗用水為去離子水。

1.1.2 儀器 FA2104型電子分析天平購自上海良平儀器儀表有限公司，WX-4000微波萃取反應(yīng)系統(tǒng)購自上海屹堯科技發(fā)展有限公司，SHB-3型循環(huán)水式真空泵購自鄭州杜甫儀器廠，RE-2000型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀購自上海亞榮生化儀器廠，UV-1900PPC型紫外-可見分光光度計購自上海亞研電子科技有限公司，LXJ-Ⅱ型離心沉淀機購自上海醫(yī)用分析儀器廠。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備 精密稱取于105 ℃干燥至恒重的葡萄糖100 mg，用去離子水準(zhǔn)確定容至100 mL，制備成1 mg/mL的葡萄糖溶液，混合均勻后吸取10 mL該溶液，稀釋至100 μg/mL。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液0、0.10、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00 mL分別置于7支干凈的具塞試管中，加去離子水至1.00 mL，加入50 g/L新蒸餾的苯酚溶液2.00 mL，搖勻后迅速加入7.00 mL濃硫酸，搖勻后靜置10 min，置于沸水浴中加熱15 min，取出置于冷水浴，迅速冷卻至室溫，在490 nm[7]處測定吸光度。以空白溶液為對照，以葡萄糖濃度（單位為μg/mL）為橫坐標(biāo)、吸光度為縱坐標(biāo)進行線性回歸。

1.2.3 精密度試驗 精密吸取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液0.8 mL共5份，同1.2.2的條件操作，于同波長測定吸光度。

1.2.4 穩(wěn)定性試驗 取葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)溶液1.0 mL，按1.2.2的條件操作，分別在靜置20、40、60、80 min后測定。

1.2.5 提取和測定的方法 取山豆根粉末，用無水乙醇回流3 h去脂性成分，晾干。稱取5 g山豆根粉末，設(shè)定最高溫度為100 ℃，加水回流提取，多次提取均按上述方法重復(fù)幾次，提取液趁熱過濾后減壓蒸餾部分溶劑，然后加無水乙醇至乙醇體積分?jǐn)?shù)為85%，將多糖沉淀后離心，去除上清液，將沉淀溶于去離子水后定容至一定體積，測定時取一定體積的溶液，按照1.2.2的方法加入顯色劑后測定其吸光度，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計算山豆根多糖的提取率。

1.2.6 正交試驗 選取影響山豆根多糖提取率的主要因素提取時間、提取次數(shù)和料液比為考察因素，分別設(shè)置3個水平，以L9（34）正交試驗優(yōu)化提取方案（表1）。

2 結(jié)果與分析

2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線方程的建立

標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為■=0.037 9x+0.002 8（r=0.998 3）。表明葡萄糖濃度在1～10 μg/mL范圍內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)曲線線性良好，符合檢測的要求。

2.2 精密度和穩(wěn)定性試驗結(jié)果

精密度試驗的變異系數(shù)為0.65%，表明儀器的精密度良好；穩(wěn)定性試驗的變異系數(shù)為0.41%，表明在80 min內(nèi)結(jié)果穩(wěn)定。

2.3 正交試驗結(jié)果與分析

正交試驗結(jié)果見表2。由表2可知，最優(yōu)提取條件組合為A3B2C2，即最佳提取條件為提取時間90 min，提取2次，料液比1∶10。在此條件下，山豆根多糖提取率為3.62%。與文獻[8]相比，此次研究的最佳提取率較低，可能是由于提取方法和比色試劑不同所造成的。

3 小結(jié)與討論

使用SPSS軟件輔助正交試驗提取山豆根多糖，避免了正交試驗人工計算的麻煩，使試驗結(jié)果處理更加簡單。比色法測定多糖含量時選擇合適的單糖標(biāo)準(zhǔn)是關(guān)鍵，選擇不合適會對結(jié)果產(chǎn)生較大的影響。山豆根多糖中葡萄糖結(jié)構(gòu)通過化學(xué)鍵結(jié)合而成[9-11]，所以可以選擇葡萄糖為標(biāo)準(zhǔn)品。

試驗對提取時間、提取次數(shù)、料液比3個因素進行了考察，發(fā)現(xiàn)在提取時間90 min、提取2次、料液比1∶10時提取率最高，為3.62%，可能是因為提取次數(shù)增加會增加其他物質(zhì)的溶出而影響吸光度，料液比太小可能會干擾多糖的提取。

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