[摘要] 目的 研究我院血流感染病原菌的分離情況以及對(duì)抗生素的耐藥情況，以指導(dǎo)臨床合理用藥。 方法 采用BACT/ALERT 3D60全自動(dòng)血培養(yǎng)儀進(jìn)行血培養(yǎng)，西門子MicroScan WalkAway 40全自動(dòng)細(xì)菌鑒定儀進(jìn)行細(xì)菌鑒定及藥敏試驗(yàn)。 結(jié)果 2009～2011兩年間共送檢血培養(yǎng)標(biāo)本3 031例，基本采用單側(cè)雙瓶采血，需氧培養(yǎng)1 531例，厭氧培養(yǎng)1 500例，共分離出病原菌268株，陽性率8.84%。其中G+菌152株，占56.7%；G—菌98株，占36.6%；真菌18株，占6.7%。最常見的分離病原菌是凝固酶陰性葡萄球菌、大腸埃希菌。儀器報(bào)警陽性在12 h之內(nèi)82株，12～24 h之間105株，24 h內(nèi)共有187株，占78.6%，且12 h內(nèi)同一株兼性厭氧菌培養(yǎng)比需氧培養(yǎng)陽性報(bào)告稍快。 結(jié)論 血流感染是臨床上最嚴(yán)重感染，快速準(zhǔn)確地培養(yǎng)出病原菌并進(jìn)行耐藥性分析是非常重要的，以便指導(dǎo)臨床合理用藥。另外，對(duì)于凝固酶陰性葡萄球菌（CNS），臨床醫(yī)生應(yīng)結(jié)合病史、癥狀及其他檢查來判斷是污染還是真正的病原菌。

[關(guān)鍵詞] 血流感染；病原菌；耐藥性

[中圖分類號(hào)] R446.5 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] B [文章編號(hào)] 1673—9701（2012）26—0090—02

Analysis of pathogen separation condition and their resistance to antimicrobials in 3031 blood culture samples

XIA Qingqing1 LOU Jiangtao1 WANG Weihua2 CHEN Jianwei1

1.Department of Clinical Laboratory，the Affiliated Ningbo TCM Hospital of Zhejiang Chinese Medical University，Ningbo 315012，China；2.Department of Clinical Laboratory，the Affiliated Hospital of School of Medicine of Ningbo University，Ningbo 315020，China

[Abstract] Objective To investigate the distribution of pathogenic bacteria in blood culture and to observe the drug resistance in our hospital to provide the basis for clinical antimicrobial therapy. Methods BACT/ALERT 3D60 automated blood culture system was applied for the blood culture. The microorganism identification and antimicrobial resistance tests were performed with the Siemens MicroScan Walkaway 40 automated bacterial identification system. Results Among 3031 blood culture samples， 268 cases were alarm positive with the positive rate of 8.84%. moreover， 152 strains were Gram—positive bacteria（56.7%）， 98 strains were Gram—negative bacteria（36.6） and 18 strains were fungi （6.7%）. The most common isolated pathogen bacteria were coagulase—negative staphylococci and Escherichia coli. In all sample， 82 were alarm positive in 12 h with facultative anaerobic culture positive report is slightly faster than the aerobic cultivation， 105 cases were alarm positive between 12—24 h. Conclusion bloodstream infection is the most serious clinical infections， quickly and accurately cultivate pathogens and drug resistance analysis is very important for clinical therapy. As for coagulase—negative staphylococci（cns）， clinicians should be combined with history， symptoms and other tests to determine whether contamination or the real pathogen.

[Key words] Blood stream infection；Pathogen；Drug resistance

血流感染是臨床上嚴(yán)重危及患者生命的感染性疾病，病情進(jìn)展迅速，死亡率高[1]。如今各種各樣治療手段的開展應(yīng)用以及抗生素的濫用，血流感染在各大醫(yī)院的發(fā)生率有了很大的上升趨勢(shì)，而快速準(zhǔn)確地從血液中培養(yǎng)出病原菌是臨床診斷菌血癥、敗血癥以及合理應(yīng)用抗菌藥物的重要手段。本文對(duì)我院2009～2011年兩年間共3 031份血培養(yǎng)標(biāo)本中分離出的268株病原菌進(jìn)行鑒定及耐藥性分析回顧，以指導(dǎo)臨床合理用藥。

1材料與方法

1.1 菌株來源

我院2009年8月～2011年7月住院門診患者采集的血培養(yǎng)標(biāo)本3 031例，其中需氧培養(yǎng)1 531例，厭氧培養(yǎng)1 500例。

1.2 儀器與試劑

血培養(yǎng)瓶、BACT/ALERT 3D60全自動(dòng)血培養(yǎng)儀及真菌鑒定藥敏API條由法國生物梅里埃公司提供。西門子MicroScan WalkAway40全自動(dòng)細(xì)菌鑒定儀進(jìn)行一般細(xì)菌鑒定及藥敏分析，藥敏紙片為英國Oxoid公司產(chǎn)品。念珠菌顯色培養(yǎng)基為鄭州博賽生物有限公司產(chǎn)品。質(zhì)控菌株為大腸埃希菌ATCC25922，金黃色葡萄球菌ATCC25923，銅綠假單胞菌ATCC27853。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)本采集 患者在高熱、寒戰(zhàn)時(shí)或抗菌藥物使用前采集血液8～10 mL，注入血培養(yǎng)專用瓶，混勻后立即送檢?；静捎脝蝹?cè)雙瓶采集。

1.3.2 細(xì)菌分離及鑒定藥敏 自動(dòng)血培養(yǎng)儀報(bào)警提示陽性時(shí)移種至血平板、巧克力平板、麥康凱平板，必要時(shí)移種至真菌顯色培養(yǎng)基中進(jìn)行細(xì)菌分離，并同時(shí)進(jìn)行革蘭染色鏡檢，將鏡檢結(jié)果初報(bào)給臨床醫(yī)生。若培養(yǎng)5 d未報(bào)警則報(bào)告“經(jīng)5天培養(yǎng)無細(xì)菌及真菌生長”。分離到單個(gè)菌落采用西門子MicroScan WalkAway40全自動(dòng)細(xì)菌鑒定藥敏儀進(jìn)行細(xì)菌鑒定及藥敏。K—B法藥敏試驗(yàn)按照NCCLS進(jìn)行操作和結(jié)果判斷。真菌鑒定用20C AUX API條，藥敏試驗(yàn)用ATB—fungus3藥敏API條。

1.3.3 耐甲氧西林葡萄球菌檢測(cè) 應(yīng)用30 μg頭孢西丁藥敏紙片替代1 μg苯唑西林，按NCCLS標(biāo)準(zhǔn)判定。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

以WHO NET 5.4進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，同一患者的相同菌株以首次分離菌進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

2 結(jié)果

2.1 病原菌分布及構(gòu)成比

從3 031份血培養(yǎng)標(biāo)本中分離出病原菌268株，陽性率8.84%，其中G+菌152株，占56.7%，其中凝固酶陰性葡萄球菌（CNS）88株，占32.8%（主要為表皮葡萄球菌32株，占CNS36.4%；人葡萄球菌人亞種30株，占CNS 34.1%）；金黃色葡萄球菌15株，腸球菌16株，鏈球菌4株，構(gòu)成比分別為5.6%、6.0%、1.5%。G—菌98株，占36.6%，其中大腸埃希菌40株，鮑曼不動(dòng)桿菌14株，肺炎克雷伯菌10株，構(gòu)成比分別為15.0%、5.2%、3.7%。真菌18株，占6.7%，其中熱帶念珠菌7株，乳酒假絲酵母4株，光滑球擬酵母3株，構(gòu)成比分別為2.6%、1.5%、1.1%。

2.2 病原菌的耐藥情況

革蘭陽性球菌及革蘭陰性桿菌對(duì)常用抗菌藥物的耐藥率見表1、2。

3討論

我院2009年8月～2011年7月住院和門診患者共送檢3 031份血培養(yǎng)標(biāo)本，分離出268株病原菌，陽性率為8.84%，與郭燕[2]報(bào)道10.43%的陽性率基本一致，而比張淑青等[3]報(bào)道的16.3%低，可能與地域不同或臨床用藥差異有關(guān)，前兩者為浙江地區(qū)，而后者則為華北地區(qū)。本資料中革蘭陽性球菌分離率要高于革蘭陰性桿菌分離率，而且革蘭陽性球菌中又以凝固酶陰性葡萄球菌（CNS）高居首位，占32.8%，而且絕大部分是耐甲氧西林的CNS。凝固酶陰性葡萄球菌分離率占首位可能因?yàn)榕R床上各種免疫抑制劑和廣譜抗菌藥物的廣泛應(yīng)用，使各種條件致病菌成為血行感染的重要致病菌[4]。CNS中居前兩位的是表皮葡萄球菌，占CNS 36.4%，人葡人亞種占CNS 34.1%。表葡已成為臨床重要機(jī)會(huì)致病菌和院內(nèi)感染的重要致病菌，這已是不爭(zhēng)的事實(shí)；而人葡萄球菌近年來也已成為臨床常見致病菌，特別是長期臥床免疫力低下的患者更容易發(fā)生感染。故對(duì)從血培養(yǎng)中分離出的凝固酶陰性葡萄球菌，應(yīng)鑒別到種的水平，并同時(shí)進(jìn)行抗菌藥物敏感性試驗(yàn)，為臨床感染治療提供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)[5]。本資料顯示，耐甲氧西林的金葡菌（MRSA）檢出率60%，與陳堅(jiān)等[6]報(bào)道的MRSA檢出率64%基本一致；耐甲氧西林的凝固酶陰性葡萄球菌（MRSN）檢出率80%以上。對(duì)現(xiàn)在的臨床用藥帶來很大困難。且許多研究證明，CNS有比較高的污染率，因此，臨床醫(yī)生應(yīng)結(jié)合多方面因素如體溫、白細(xì)胞計(jì)數(shù)、病史以及抽血時(shí)的皮膚消毒效果等等來考慮此細(xì)菌是否為真正的病原菌。檢出的葡萄球菌對(duì)奎奴普丁/達(dá)福普丁、萬古霉素、利奈唑胺的敏感性為100%，但也應(yīng)注意合理使用與監(jiān)測(cè).腸球菌的耐藥情況還不算太嚴(yán)重。

本次資料中，革蘭陰性桿菌檢出主要以大腸埃希菌為主，占G—桿菌的五成左右，其次是鮑曼不動(dòng)桿菌和肺炎克雷伯菌，與國內(nèi)許多報(bào)道基本一致。大腸埃希菌和肺炎克雷伯菌對(duì)β—內(nèi)酰胺類藥物耐藥率較高，可能與其產(chǎn)ESBLs有密切關(guān)系；其次對(duì)喹諾酮類抗生素也有60%以上的耐藥率，與醫(yī)院長期濫用這類藥物有一定關(guān)系；對(duì)碳青霉烯類藥物及阿米卡星敏感性最高，可作為首選藥物。真菌檢出率不高，占6.7%，盡管檢出率不高，但主要分布在ICU和呼吸內(nèi)科等重點(diǎn)科室，應(yīng)引起臨床醫(yī)生足夠重視。

血培養(yǎng)儀陽性報(bào)警時(shí)間的早晚對(duì)臨床治療有非常重要的影響。本資料顯示儀器陽性報(bào)警在12h之內(nèi)的有82株細(xì)菌，12～24 h有105株細(xì)菌，24 h之內(nèi)報(bào)警陽性187株，占78.6%，且12h內(nèi)同一株兼性厭氧菌厭氧培養(yǎng)比需氧培養(yǎng)陽性報(bào)警稍早，說明血培養(yǎng)一次抽兩瓶是非常有必要的，至少可以快速預(yù)報(bào)陽性及提高陽性檢出率。 血培養(yǎng)細(xì)菌陽性報(bào)警時(shí)間與總體細(xì)菌濃度有關(guān)，而后者又與接種菌量相關(guān)。而在實(shí)際操作中，所有研究對(duì)象的血培養(yǎng)接種量不可能完全一致，故對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果有一定影響[7]。因此，若有條件，臨床抽取血培養(yǎng)最好是雙側(cè)多套，且增加抽血次數(shù)，這樣對(duì)提高陽性率，減少污染率有很大幫助。總之，我們要積極配合臨床治療，減少敗血癥的發(fā)生。

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（收稿日期：2012—04—20）