摘要：目的:建立高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定飲料中苯甲酸、山梨酸、對(duì)羥基苯甲酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸乙酯、對(duì)羥基苯甲酸丙酯、對(duì)羥基苯甲酸丁酯等6種防腐劑的分析方法。方法：樣品用水溶解，去除蛋白后過(guò)濾待測(cè)。檢測(cè)時(shí)以甲醇-乙酸銨（0.02M）為流動(dòng)相，經(jīng)梯度洗脫，在238nm波長(zhǎng)處進(jìn)行檢測(cè)，以外標(biāo)法定量。結(jié)果：6種防腐劑的加標(biāo)回收率在93.2%～103.8%，相關(guān)系數(shù)0.9996～0.9999，檢出限0.01～0.03g/kg。結(jié)論：本方法簡(jiǎn)單，快速，靈敏度高，重現(xiàn)性好，可以滿足飲料中防腐劑的檢測(cè)要求。
　　關(guān)鍵詞：高效液相色譜法防腐劑 飲料
　　中圖分類(lèi)號(hào)：TQ文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A文章編號(hào)：1672-3791(2012)03(a)-0000-00
　　防腐劑是用于保持食品原有品質(zhì)和營(yíng)養(yǎng)價(jià)值為目的的食品添加劑，但是有研究表明，食用含過(guò)量防腐劑的食品有可能對(duì)人體健康產(chǎn)生不利影響。目前，在飲料中常見(jiàn)的添加劑有苯甲酸、山梨酸、對(duì)羥基苯甲酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸乙酯、對(duì)羥基苯甲酸丙酯、對(duì)羥基苯甲酸丁酯等，這六種防腐劑均有相應(yīng)的國(guó)標(biāo)檢測(cè)方法，但并無(wú)同時(shí)測(cè)定方法。本文利用高效液相色譜對(duì)其進(jìn)行了同時(shí)測(cè)定，且處理方法簡(jiǎn)單快速，分析時(shí)間短，靈敏度高。
　　1 材料和方法
　　1.1 分析方法
　　1.1.1樣品前處理
　　乳飲料和果汁飲料：稱(chēng)取5.00g（精確到0.01g）樣品于50ml比色管中，加少量水后分別加入5ml亞鐵氰化鉀溶液和5ml乙酸鋅溶液，再用水定容至刻度，搖勻后離心，取上清液過(guò)0.22μm濾膜，待測(cè)。
　　 碳酸飲料：稱(chēng)取5.00g（精確到0.01g）樣品于50ml比色管中，超聲脫氣后用水定容至刻度，搖勻后過(guò)0.22μm濾膜，待測(cè)。
　　1.1.2檢測(cè)條件
　　檢測(cè)波長(zhǎng)：238nm、柱溫：30℃、進(jìn)樣量：10μl、流速：0.7ml/min、采用甲醇和0.02M乙酸銨溶液進(jìn)行梯度洗脫，洗脫程序?yàn)椋?~6min，甲醇10%；7~11min，甲醇70%；12~15min，甲醇10%；
　　2 結(jié)果
　　2．1．1 檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇 由苯甲酸、山梨酸、對(duì)羥基苯甲酸酯類(lèi)的紫外吸收光譜圖可知，它們的最大吸收波長(zhǎng)分別為223.3、254.0、256.4。本方法選定238nm為最測(cè)定波長(zhǎng)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在此波長(zhǎng)下，各組分分離良好，均可獲得較為滿意的吸光強(qiáng)度，且加標(biāo)樣品中，樣品的溶劑峰和雜質(zhì)峰對(duì)所測(cè)定組分不產(chǎn)生干擾。
　　2．1．2 流動(dòng)相的選擇
　　由于苯甲酸、山梨酸與對(duì)羥基苯甲酸酯類(lèi)的極性差異較大，因此無(wú)法采用等度洗脫在合適的時(shí)間將其全部洗脫，本方法用甲醇和0.02M乙酸銨溶液進(jìn)行梯度洗脫，可以獲得滿意的分離度，而且檢測(cè)時(shí)間較短，可以在15min內(nèi)同時(shí)檢測(cè)六種防腐劑。標(biāo)準(zhǔn)品譜圖見(jiàn)圖1
　　2．1．3 方法的線性
　　用超純水分別配制濃度為0.01mg/ml、0.02 mg/ml 、0.03 mg/ml 、0.05 mg/ml 、0.1 mg/ml的6種防腐劑混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，測(cè)定峰面積，以峰面積Y和溶液濃度X（mg/ml）作標(biāo)準(zhǔn)曲線，得線性回歸方程及相關(guān)系數(shù)R。（見(jiàn)表1）
　　
　　2．1．4 方法的靈敏度和檢出限
　　在以上方法條件下，以3倍基線噪音確定方法的檢出限，得出苯甲酸、山梨酸、對(duì)羥基苯甲酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸乙酯、對(duì)羥基苯甲酸丙酯、對(duì)羥基苯甲酸丁酯的檢出限分別為0.01g/Kg、0.003g/Kg、0.01g/Kg、0.01g/Kg、0.01g/Kg、0.01g/Kg。
　　2．1．5回收率和精密度
　　在空白樣品中分別添加三個(gè)不同濃度的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，各平行測(cè)定六次，計(jì)算回收率和精密度。測(cè)得苯甲酸、山梨酸、對(duì)羥基苯甲酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸乙酯、對(duì)羥基苯甲酸丙酯、對(duì)羥基苯甲酸丁酯的回收率范圍分別為93.5%~102.9%、94.1%~101.5%、95.3%~101.2%、94.8%~103.8%、95.7%~100.6%、93.2%~99.3%。精密度分別是1.03%、1.22%、0.92%、
　　0.64%、1.35%、0.86%。
　　2．2樣品分析
　　應(yīng)用本方法對(duì)市場(chǎng)采集的各種飲料樣本共30個(gè)進(jìn)行檢測(cè)，其中碳酸飲料部分檢測(cè)出含苯甲酸，果汁飲料中部分檢出含山梨酸，對(duì)羥基苯甲酸酯類(lèi)均未檢出。
　　3 小結(jié)
　　本方法能同時(shí)測(cè)定飲料中可能添加的6種防腐劑，縮短了工作時(shí)間，且靈敏度高，分離度好，適合于日常檢驗(yàn)。