焦淑潔 滕軍放 盧 宏

鄭州大學(xué)第一附屬醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科 鄭州 450052

多發(fā)性硬化（multiple sclerosis，MS）是一種以多發(fā)性病灶及緩解復(fù)發(fā)的病程為臨床特征的脫髓鞘疾病，病理改變主要累及白質(zhì)，造成軸索變性［1］。近年來(lái)研究表明自身免疫是其主要發(fā)病機(jī)制。tau蛋白是含量最高的微管相關(guān)蛋白，目前認(rèn)為tau蛋白是神經(jīng)元損傷的標(biāo)記，已在各種神經(jīng)系統(tǒng)疾病中展開(kāi)臨床研究。然而tau蛋白與多發(fā)性硬化之間的關(guān)系，仍存在爭(zhēng)議［2－3］。本研究通過(guò)檢測(cè)復(fù)發(fā)－緩解型 （relapsing－remitting，RR）和繼發(fā)進(jìn)展型（secondary progressive，SP）MS患者腦脊液和血清tau蛋白濃度及MSSS量表評(píng)價(jià)疾病嚴(yán)重程度［4］和EDSS量表評(píng)價(jià)其致殘狀況［5］，來(lái)探討二者的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象 選擇2010－01—2011－06于我院神經(jīng)內(nèi)科就診的多發(fā)性硬化患者48例，均符合2001年McDonald標(biāo)準(zhǔn)［6］，年齡21～62歲，平均（36.2±11.4）歲；男女比例為27∶21，其中34例（71%）RR型，年齡21～52歲，平均（32.8±9.1）歲，男∶女＝12∶22，14例SP型（29%），年齡21～62歲，平均（44.5±12.2）歲，男∶女＝9∶5。各組間性別構(gòu)成和年齡差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。均取得全部受試對(duì)象知情同意。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本的采集：采集 MS患者清晨空腹靜脈血3mL，同時(shí)留取患者腦脊液標(biāo)本5mL，－80℃保存。

1.2.2 擴(kuò)展殘疾狀況評(píng)分量表（expanded disability status scale，EDSS）和多發(fā)性硬化嚴(yán)重程度量表（multiple sclerosis severity score，MSSS）：MSSS量表評(píng)價(jià)疾病嚴(yán)重程度；EDSS是目前評(píng)價(jià)多發(fā)性硬化患者功能障礙的金標(biāo)準(zhǔn)。采用MSSS量表和EDSS評(píng)分量表對(duì)MS患者疾病的嚴(yán)重程度和采集血標(biāo)本時(shí)的致殘狀況進(jìn)行評(píng)價(jià)。

1.2.3 檢測(cè)方法：以2 000r／min轉(zhuǎn)速離心血標(biāo)本10min，收集上層血清，分裝入EP管中，－80℃保存，避免反復(fù)凍溶。血清及腦脊液的總tau蛋白（total－tau，T－tau）和磷酸化tau蛋白（phospho－tau，P－tau）水平測(cè)定分別嚴(yán)格按照Innogenetics公司提供的ELISA試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行。對(duì)計(jì)量數(shù)據(jù)進(jìn)行方差齊性和正態(tài)性檢驗(yàn)，符合正態(tài)分布和方差齊的計(jì)量數(shù)據(jù)以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)表示，2組間均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，tau蛋白水平與EDSS評(píng)分之間相關(guān)性分析采用Spearman相關(guān)分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2組患者血清和腦脊液中tau蛋白檢出率及濃度比較腦脊液中 T－tau蛋白檢出率為64.6%（31／48例），P－tau蛋白檢出率為100%（48／48例）。血清中T－tau蛋白檢出率為33%（16／48例），P－tau蛋白為85%（41／48例）。由于血清中T－tau蛋白的低檢測(cè)率，未對(duì)其進(jìn)一步分析。2組間比較，RR組患者腦脊液中T－tau蛋白濃度明顯高于SP組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＝0.01），而腦脊液和血清中P－tau蛋白在RR和SP組之間差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。詳見(jiàn)表1。

表1 RR組和SP組血清和腦脊液中tau蛋白濃度比較 （pg／mL）

表2 RR組和SP組患者M(jìn)SSS和EDSS評(píng)分比較 （BZ_15_1694_320_1782_360）

2.2 2組患者M(jìn)SSS和EDSS評(píng)分比較 RR組患者EDSS評(píng)分2.7±1.0顯著低于SP組患者6.0±1.2，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；RR組患者 MSSS評(píng)分5.3±1.8亦顯著低于SP組患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），如表2所示。2.3 MS患者tau蛋白濃度與EDSS評(píng)分的相關(guān)性 MS患者腦脊液中T－tau蛋白與EDSS評(píng)分呈負(fù)相關(guān)（r＝－0.58，P＝0.0006）

3 討論

tau蛋白屬于神經(jīng)元衍生蛋白，從神經(jīng)元胞漿釋放，繼而進(jìn)入細(xì)胞外液及腦脊液，在健康人腦脊液和血清均可以檢測(cè)到 。本研究中，T－tau蛋白（腦脊液和血清中分別為64.6%和33%）與其磷酸化成分P－tau蛋白（血清和腦脊液中分別100%和85%）相比，檢測(cè)率較低。考慮原因?yàn)槟壳皺z測(cè)方法中檢測(cè)閾值的差異，未能精確測(cè)量。

在中樞神經(jīng)系統(tǒng)，不同的病理機(jī)制可能導(dǎo)致不同的T－tau蛋白滲漏模式。在急性疾病，如腦卒中，頭部外傷，病毒性腦炎等［7］，反映神經(jīng)元損傷的T－tau蛋白迅速進(jìn)入腦脊液，繼而快速清除。因此發(fā)病不久即可以檢測(cè)到T－tau蛋白，并且只有代表神經(jīng)元直接損害的T－tau蛋白濃度增加，P－tau蛋白濃度并不增加。而在慢性疾病中，如阿爾茨海默病和克雅氏病，T－tau蛋白不斷釋放進(jìn)入腦脊液，因此可以在多個(gè)時(shí)間段持續(xù)檢測(cè)。在廣泛神經(jīng)元損傷的克雅氏病中，腦脊液中T－tau蛋白濃度顯著較高，不伴隨P－tau蛋白濃度的可比增長(zhǎng)。而阿爾茨海默病，磷酸化tau蛋白形成神經(jīng)元纖維纏結(jié)，可能是P－tau蛋白在腦脊液中濃度增加的原因［8］。

MS是一種自身免疫性炎癥性疾病，病理過(guò)程的產(chǎn)生是由于淋巴細(xì)胞攻擊中樞神經(jīng)系統(tǒng)少突膠質(zhì)細(xì)胞的髓磷脂鞘所致，脫髓鞘軸突相對(duì)保存。隨著MS病程進(jìn)展，炎癥過(guò)程逐漸被神經(jīng)退行性病變所替代［9－10］。我們研究發(fā)現(xiàn)RR組患者腦脊液T－tau蛋白濃度明顯高于SP組患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。分析原因可能為SP型患者處于神經(jīng)退行性病變階段，神經(jīng)元密度不斷下降導(dǎo)致tau蛋白減少，故而CSF中T－tau蛋白濃度較低。并且在SP患者中，表示殘疾程度EDSS評(píng)分和疾病嚴(yán)重程度的MSSS均明顯高于RR患者，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)MS患者腦脊液T－tau蛋白與EDSS評(píng)分殘疾程度呈負(fù)相關(guān)。因此可以認(rèn)為T－tau蛋白濃度間接反映腦神經(jīng)元的損傷程度，有助于判斷 MS的預(yù)后。也有研究［3］認(rèn)為MS組和對(duì)照組腦脊液T－tau蛋白的濃度無(wú)明顯差異。原因可能為在MS急性階段，tau蛋白從受損軸突釋放擴(kuò)散入腦脊液，隨著病變軸突修復(fù)，tau蛋白濃度逐漸恢復(fù)正常，提示病變有可能恢復(fù)或中樞神經(jīng)系統(tǒng)的損害有限。這說(shuō)明腦脊液T－tau蛋白濃度在MS患者中的多樣性，不同類型患者可能得出不同的結(jié)論。

總之，我們的研究表明，MS患者腦脊液中T－tau蛋白的濃度變化，間接反映了腦實(shí)質(zhì)的損傷程度。腦脊液中T－tau蛋白濃度對(duì)MS疾病亞型的影響，主要取決于不同的病理生理過(guò)程（SP以神經(jīng)退行性變?yōu)橹?，而RR則以炎癥為主）。但是本研究的樣本量較小，需要進(jìn)一步的研究以確定tau蛋白能否單獨(dú)作為MS的生物標(biāo)志物，從而明確 MS的病因，繼而提出有效的治療方法。

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