彭艷紅，李嫦玲，劉新義

（1.益陽(yáng)市第一中醫(yī)醫(yī)院，湖南 益陽(yáng) 413000；2.中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院，湖南 長(zhǎng)沙 410011）

HPLC測(cè)定可達(dá)靈片中脫氫延胡索堿的含量

彭艷紅1，李嫦玲1，劉新義2

（1.益陽(yáng)市第一中醫(yī)醫(yī)院，湖南 益陽(yáng) 413000；2.中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院，湖南 長(zhǎng)沙 410011）

目的 建立高效液相色譜法測(cè)定可達(dá)靈片中脫氫延胡索堿含量的方法。方法 采用Aglient 1200高效液相色譜儀；Diamonsil C18柱 （250mm×4.6mm，5μm）； 流動(dòng)相為 0.05moL/L 磷酸鹽溶液-乙腈 （68∶32）， 流速為1.0 ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)為340 nm。結(jié)果 脫氫延胡索堿在0.1～1μg進(jìn)樣量?jī)?nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系(r=0.9997)，平均回收率為99.3%，RSD為1.0%。結(jié)論 本方法簡(jiǎn)便、可靠、重復(fù)性好，可用于可達(dá)靈片的質(zhì)量控制。

可達(dá)靈片；脫氫延胡索堿；高效液相色譜法

可達(dá)靈片為延胡索的中藥制劑，主要藥理成分為脫氫延胡索堿與延胡索乙素，臨床上用于冠心病、心絞痛和急性心肌梗死等疾病的治療[1]?，F(xiàn)代藥理研究結(jié)果表明脫氫延胡索堿可明顯擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈、增加冠脈血流，從而改善心肌缺血狀態(tài)；而延胡索乙素具有鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜作用[2-3]。目前報(bào)道可達(dá)靈片中脫氫延胡索堿的含量測(cè)定方法僅見(jiàn)紙色譜法，存在重復(fù)性差、精密度低等缺點(diǎn)[4]。為了更好的控制該制劑質(zhì)量，本文選擇脫氫延胡索堿為指標(biāo)，采用高效液相色譜法（HPLC）對(duì)其進(jìn)行含量測(cè)定。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Aglient 1200高效液相色譜儀 （美國(guó)安捷倫科技有限公司，配備G1313A自動(dòng)進(jìn)樣器和G1315B二極管陣列檢測(cè)器，G1311A四元梯度泵，G1316A柱溫箱，Aglient色譜工作站）；FC204型電子分析天平（西安精大檢測(cè)設(shè)備有限公司）；HH-24電熱恒溫水浴鍋（湖南東大科學(xué)儀器設(shè)備有限公司）。

1.2 試藥

可達(dá)靈片（浙江康恩貝制藥股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)：20111215，20111217，20111219，20111221，20111223）；脫氫延胡索堿對(duì)照品（中南大學(xué)藥學(xué)院天然藥化實(shí)驗(yàn)室自制，湖南省食品藥品檢驗(yàn)研究院標(biāo)化，純度99.2%)；甲醇、乙腈為色譜純，乙醇、磷酸二氫鉀、磷酸、三乙胺等試劑均為分析純，水為超純水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件[5-6]

色譜柱：Diamonsil C18柱 （250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：0.05moL/L 磷酸鹽溶液（0.05moL/L磷酸二氫鉀溶液用0.05moL/L磷酸調(diào)節(jié)pH 3.0）-乙腈（68∶32），流速：1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)：340 nm；柱溫：25 ℃；進(jìn)樣量：10 μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 供試品溶液的制備 取本品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取藥粉約1 g，置100 mL棕色量瓶中，加0.1moL/L鹽酸甲醇溶液至相應(yīng)刻度，稱重，回流提取1 h，取出，冷卻后稱重，再用0.1moL/L鹽酸甲醇溶液補(bǔ)足損失的溶劑，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取脫氫延胡索堿對(duì)照品10.2mg置100 mL棕色量瓶中，加甲醇溶解，定容至刻度，即得。

2.2.3 陰性樣品溶液的制備 按處方配比稱取除延胡索以外的藥用輔料，按制備工藝制成缺延胡索的陰性樣品，同法制備缺延胡索的陰性樣品溶液。

2.2.4 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 分別吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液、陰性對(duì)照溶液各10 μL，注入高效液相色譜儀，按“2.1色譜條件”進(jìn)行分析。按上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖，結(jié)果脫氫延胡索堿 (t=7.35min)與其他組分別達(dá)到了基線分離，峰形對(duì)稱，且陰性無(wú)干擾，專屬性良好，見(jiàn)圖1。

2.3 色譜條件[5-6]

色譜柱：Diamonsil C18柱 （250mm×4.6mm，5μm）；流動(dòng)相：0.05moL/L 磷酸鹽溶液（0.05moL/L磷酸二氫鉀溶液用0.05moL/L磷酸調(diào)節(jié)pH 3.0）-乙腈（68∶32），流速：1.0 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)：340 nm；柱溫：25 ℃；進(jìn)樣量：10 μL。在此色譜條件下，記錄供試品溶液和對(duì)照品溶液色譜圖（見(jiàn)圖1），以脫氫延胡索堿計(jì)算理論板數(shù)應(yīng)不低于3000，分離度大于1.5，峰形對(duì)稱。

圖1 脫氫延胡索堿對(duì)照品及可達(dá)靈片樣品HPLC圖譜

2.4 方法學(xué)考察

2.4.1 線性關(guān)系考察 精密吸取對(duì)照品溶液1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 mL，分別置 10 mL 棕色容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，進(jìn)樣10 μL，注入液相色譜儀，記錄脫氫延胡索堿峰面積。以進(jìn)樣量（X）對(duì)峰面積（Y）作圖，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線?；貧w方程為：

表明脫氫延胡索堿在進(jìn)樣量0.1～1 μg范圍內(nèi)的線性關(guān)系良好。

2.4.2 精密度試驗(yàn) 精密吸取稀釋2倍的對(duì)照品溶液10 μL，連續(xù)進(jìn)樣6次。結(jié)果脫氫延胡索堿峰面積的RSD為0.8%(n=6)，表明該儀器的精密度良好。

2.4.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一份供試品溶液，于室溫放置 2、4、8、12、16、18 h 后進(jìn)樣，測(cè)定脫氫延胡索堿峰面積，RSD為1.3%，結(jié)果表明供試品溶液在18 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.4.4 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)(20111219)可達(dá)靈片藥粉5份，按“2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，進(jìn)樣，測(cè)定脫氫延胡索堿峰面積，并計(jì)算樣品平均含量為4.82mg/g，RSD為1.7%(n=5)，表明該方法重復(fù)性較好。

2.4.5 回收率試驗(yàn) 取同一批號(hào)(20111219)已知含量的可達(dá)靈片(脫氫延胡索堿含量為4.82mg/g)粉末約0.25 g，精密稱定，平行5份，置50 mL棕色量瓶中，各份分別精密加入對(duì)照品溶液(脫氫延胡索堿濃度為0.102mg/mL)10 mL，繼續(xù)添加0.1moL/L鹽酸甲醇溶液至相應(yīng)刻度，其余同“2.2.1供試品溶液的制備”，進(jìn)樣，測(cè)定脫氫延胡索堿峰面積，計(jì)算回收率，結(jié)果如表1。脫氫延胡索堿平均回收率為99.3%和 RSD 為 1.0%(n=5)。

表1 加樣回收率試驗(yàn) （n=5）

2.5 樣品的含量測(cè)定

精密稱取5批可達(dá)靈片樣品粉末約1 g（每批平行兩份），按“2.2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液，以上述色譜條件進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表2，批間平均含量為2.45mg/片。

表2 樣品含量測(cè)定 （n=5）

3 討論

在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，筆者曾比較過(guò)用乙醇、50%乙醇、甲醇、50%甲醇和0.1moL/L鹽酸甲醇溶液等5種溶劑進(jìn)行樣品的回流提取，結(jié)果發(fā)現(xiàn)以0.1mol/L鹽酸甲醇溶液提取脫氫延胡索堿的含量最高，故選擇該溶液作為提取溶劑。

脫氫延胡索堿為生物堿成分，筆者曾采用不同比例的甲醇-水、乙腈-水-三乙胺、甲醇-乙腈-磷酸水系列流動(dòng)相，結(jié)果該成分均存在嚴(yán)重的拖尾現(xiàn)象。本研究參照文獻(xiàn)報(bào)道[5，7]，采用乙腈-0.05moL/L磷酸鹽溶液 （0.05moL/L磷酸二氫鉀溶液用0.05moL/L磷酸調(diào)節(jié) pH 3.0）（32∶68）作為流動(dòng)相，結(jié)果脫氫延胡索堿峰型對(duì)稱，分離度高，保留時(shí)間短，且樣品也比較穩(wěn)定，因此被采用。

試驗(yàn)結(jié)果表明，本研究建立的HPLC測(cè)定脫氫延胡索堿含量，具有樣品處理簡(jiǎn)單，測(cè)定結(jié)果可靠，可用于可達(dá)靈片的質(zhì)量控制。

[1]王五保，吉信賓，徐玉欣，等.可達(dá)靈片治療不穩(wěn)定性心絞痛42例臨床觀察[J].河南職工醫(yī)學(xué)晚學(xué)報(bào)，2011，23(4):417-418.

[2]劉駿鴻.可達(dá)靈片治療冠心病心絞痛療效觀察[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志，2005，14(24):3246.

[3]李紹敏.可達(dá)靈片治療冠心病心絞痛療效分析[J].浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志，2001，11(4):226-227.

[4]包麗霞，包家范.紙色譜法測(cè)定可達(dá)靈片脫氫延胡索堿含量[J].實(shí)用中醫(yī)藥雜志，1999，15(12):64.

[5]姜舜堯.高效液相色譜法測(cè)定元胡止痛片中脫氫延胡索堿的含量[J].中國(guó)中藥雜志，2000，25(8):479-481.

[6]商小金，錢(qián)俊青，郭 輝.響應(yīng)面法優(yōu)化延胡索生物堿乙醇提取工藝研究[J].林業(yè)化學(xué)與工業(yè)，2010，30(2):32-36.

[7]陳峰陽(yáng)，葉益萍，李曉譽(yù)，等.HPLC測(cè)定元胡藥材中脫氫延胡索堿的含量[J].中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)雜志，2009，26(1):58-60.

Determination of dehydrocorydaline content in Kedaling Tablets by HPLC

PENG Yan-hong1,LI Chang-ling1,LIU Xin-yi2
(1.First Traditional Chinese Medicine Hospital of Yiyang,Hunan 413000,China;2.Second Xiangya Hospital of Central South University,Changsha,Hunan 410013,China)

Kedaling Tablets； dehydrocorydaline；HPLC

R284.2

B

10.3969/j.issn.1674－070X.2012.09.009.037.03

〔Absrract〕Objective To establish a method for the determination of dehydrocorydaline content in Kedaling Tablets by HPLC.Methods Aglient 1200 HPLC with Diamonsil C18column(4.6mm×250mm， 5μm)was used,the mobile phase was 0.05moL/L phosphates-acetonitrile(68:32)(v/v)，the flow rate was 1.0 mL/min and the detection wavelength was 340 nm.Results Dehydrocorydaline showed a good linear relationship with peak area integral value within 0.1～1.0 μg(r=0.9997).The average recovery was 99.3%，and RSD was 1.0%.Conclusion The method was simple， reliable and reproducible for the quality control of Kedaling Tablets.

2012－06－12

彭艷紅（1970-），女，湖南益陽(yáng)人，副主任藥師，主要從事藥事管理與中藥的研究與檢驗(yàn)。

（本文編輯 楊 瑛）