彭艷紅,李嫦玲,劉新義
(1.益陽(yáng)市第一中醫(yī)醫(yī)院,湖南 益陽(yáng) 413000;2.中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院,湖南 長(zhǎng)沙 410011)
HPLC測(cè)定可達(dá)靈片中脫氫延胡索堿的含量
彭艷紅1,李嫦玲1,劉新義2
(1.益陽(yáng)市第一中醫(yī)醫(yī)院,湖南 益陽(yáng) 413000;2.中南大學(xué)湘雅二醫(yī)院,湖南 長(zhǎng)沙 410011)
目的 建立高效液相色譜法測(cè)定可達(dá)靈片中脫氫延胡索堿含量的方法。方法 采用Aglient 1200高效液相色譜儀;Diamonsil C18柱 (250mm×4.6mm,5μm); 流動(dòng)相為 0.05moL/L 磷酸鹽溶液-乙腈 (68∶32), 流速為1.0 ml/min;檢測(cè)波長(zhǎng)為340 nm。結(jié)果 脫氫延胡索堿在0.1~1μg進(jìn)樣量?jī)?nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系(r=0.9997),平均回收率為99.3%,RSD為1.0%。結(jié)論 本方法簡(jiǎn)便、可靠、重復(fù)性好,可用于可達(dá)靈片的質(zhì)量控制。
可達(dá)靈片;脫氫延胡索堿;高效液相色譜法
可達(dá)靈片為延胡索的中藥制劑,主要藥理成分為脫氫延胡索堿與延胡索乙素,臨床上用于冠心病、心絞痛和急性心肌梗死等疾病的治療[1]?,F(xiàn)代藥理研究結(jié)果表明脫氫延胡索堿可明顯擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈、增加冠脈血流,從而改善心肌缺血狀態(tài);而延胡索乙素具有鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜作用[2-3]。目前報(bào)道可達(dá)靈片中脫氫延胡索堿的含量測(cè)定方法僅見(jiàn)紙色譜法,存在重復(fù)性差、精密度低等缺點(diǎn)[4]。為了更好的控制該制劑質(zhì)量,本文選擇脫氫延胡索堿為指標(biāo),采用高效液相色譜法(HPLC)對(duì)其進(jìn)行含量測(cè)定。
Aglient 1200高效液相色譜儀 (美國(guó)安捷倫科技有限公司,配備G1313A自動(dòng)進(jìn)樣器和G1315B二極管陣列檢測(cè)器,G1311A四元梯度泵,G1316A柱溫箱,Aglient色譜工作站);FC204型電子分析天平(西安精大檢測(cè)設(shè)備有限公司);HH-24電熱恒溫水浴鍋(湖南東大科學(xué)儀器設(shè)備有限公司)。
可達(dá)靈片(浙江康恩貝制藥股份有限公司生產(chǎn),批號(hào):20111215,20111217,20111219,20111221,20111223);脫氫延胡索堿對(duì)照品(中南大學(xué)藥學(xué)院天然藥化實(shí)驗(yàn)室自制,湖南省食品藥品檢驗(yàn)研究院標(biāo)化,純度99.2%);甲醇、乙腈為色譜純,乙醇、磷酸二氫鉀、磷酸、三乙胺等試劑均為分析純,水為超純水。
色譜柱:Diamonsil C18柱 (250mm×4.6mm,5μm);流動(dòng)相:0.05moL/L 磷酸鹽溶液(0.05moL/L磷酸二氫鉀溶液用0.05moL/L磷酸調(diào)節(jié)pH 3.0)-乙腈(68∶32),流速:1.0 mL/min,檢測(cè)波長(zhǎng):340 nm;柱溫:25 ℃;進(jìn)樣量:10 μL。
2.2.1 供試品溶液的制備 取本品20片,精密稱定,研細(xì),精密稱取藥粉約1 g,置100 mL棕色量瓶中,加0.1moL/L鹽酸甲醇溶液至相應(yīng)刻度,稱重,回流提取1 h,取出,冷卻后稱重,再用0.1moL/L鹽酸甲醇溶液補(bǔ)足損失的溶劑,搖勻,用0.45μm微孔濾膜濾過(guò),取續(xù)濾液,即得。
2.2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取脫氫延胡索堿對(duì)照品10.2mg置100 mL棕色量瓶中,加甲醇溶解,定容至刻度,即得。
2.2.3 陰性樣品溶液的制備 按處方配比稱取除延胡索以外的藥用輔料,按制備工藝制成缺延胡索的陰性樣品,同法制備缺延胡索的陰性樣品溶液。
2.2.4 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 分別吸取供試品溶液、對(duì)照品溶液、陰性對(duì)照溶液各10 μL,注入高效液相色譜儀,按“2.1色譜條件”進(jìn)行分析。按上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)定,記錄色譜圖,結(jié)果脫氫延胡索堿 (t=7.35min)與其他組分別達(dá)到了基線分離,峰形對(duì)稱,且陰性無(wú)干擾,專屬性良好,見(jiàn)圖1。
色譜柱:Diamonsil C18柱 (250mm×4.6mm,5μm);流動(dòng)相:0.05moL/L 磷酸鹽溶液(0.05moL/L磷酸二氫鉀溶液用0.05moL/L磷酸調(diào)節(jié)pH 3.0)-乙腈(68∶32),流速:1.0 mL/min,檢測(cè)波長(zhǎng):340 nm;柱溫:25 ℃;進(jìn)樣量:10 μL。在此色譜條件下,記錄供試品溶液和對(duì)照品溶液色譜圖(見(jiàn)圖1),以脫氫延胡索堿計(jì)算理論板數(shù)應(yīng)不低于3000,分離度大于1.5,峰形對(duì)稱。
圖1 脫氫延胡索堿對(duì)照品及可達(dá)靈片樣品HPLC圖譜
2.4.1 線性關(guān)系考察 精密吸取對(duì)照品溶液1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 mL,分別置 10 mL 棕色容量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,進(jìn)樣10 μL,注入液相色譜儀,記錄脫氫延胡索堿峰面積。以進(jìn)樣量(X)對(duì)峰面積(Y)作圖,得到標(biāo)準(zhǔn)曲線?;貧w方程為:
表明脫氫延胡索堿在進(jìn)樣量0.1~1 μg范圍內(nèi)的線性關(guān)系良好。
2.4.2 精密度試驗(yàn) 精密吸取稀釋2倍的對(duì)照品溶液10 μL,連續(xù)進(jìn)樣6次。結(jié)果脫氫延胡索堿峰面積的RSD為0.8%(n=6),表明該儀器的精密度良好。
2.4.3 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一份供試品溶液,于室溫放置 2、4、8、12、16、18 h 后進(jìn)樣,測(cè)定脫氫延胡索堿峰面積,RSD為1.3%,結(jié)果表明供試品溶液在18 h內(nèi)基本穩(wěn)定。
2.4.4 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)(20111219)可達(dá)靈片藥粉5份,按“2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,進(jìn)樣,測(cè)定脫氫延胡索堿峰面積,并計(jì)算樣品平均含量為4.82mg/g,RSD為1.7%(n=5),表明該方法重復(fù)性較好。
2.4.5 回收率試驗(yàn) 取同一批號(hào)(20111219)已知含量的可達(dá)靈片(脫氫延胡索堿含量為4.82mg/g)粉末約0.25 g,精密稱定,平行5份,置50 mL棕色量瓶中,各份分別精密加入對(duì)照品溶液(脫氫延胡索堿濃度為0.102mg/mL)10 mL,繼續(xù)添加0.1moL/L鹽酸甲醇溶液至相應(yīng)刻度,其余同“2.2.1供試品溶液的制備”,進(jìn)樣,測(cè)定脫氫延胡索堿峰面積,計(jì)算回收率,結(jié)果如表1。脫氫延胡索堿平均回收率為99.3%和 RSD 為 1.0%(n=5)。
表1 加樣回收率試驗(yàn) (n=5)
精密稱取5批可達(dá)靈片樣品粉末約1 g(每批平行兩份),按“2.2.1”項(xiàng)下方法制備供試品溶液,以上述色譜條件進(jìn)行含量測(cè)定,結(jié)果見(jiàn)表2,批間平均含量為2.45mg/片。
表2 樣品含量測(cè)定 (n=5)
在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中,筆者曾比較過(guò)用乙醇、50%乙醇、甲醇、50%甲醇和0.1moL/L鹽酸甲醇溶液等5種溶劑進(jìn)行樣品的回流提取,結(jié)果發(fā)現(xiàn)以0.1mol/L鹽酸甲醇溶液提取脫氫延胡索堿的含量最高,故選擇該溶液作為提取溶劑。
脫氫延胡索堿為生物堿成分,筆者曾采用不同比例的甲醇-水、乙腈-水-三乙胺、甲醇-乙腈-磷酸水系列流動(dòng)相,結(jié)果該成分均存在嚴(yán)重的拖尾現(xiàn)象。本研究參照文獻(xiàn)報(bào)道[5,7],采用乙腈-0.05moL/L磷酸鹽溶液 (0.05moL/L磷酸二氫鉀溶液用0.05moL/L磷酸調(diào)節(jié) pH 3.0)(32∶68)作為流動(dòng)相,結(jié)果脫氫延胡索堿峰型對(duì)稱,分離度高,保留時(shí)間短,且樣品也比較穩(wěn)定,因此被采用。
試驗(yàn)結(jié)果表明,本研究建立的HPLC測(cè)定脫氫延胡索堿含量,具有樣品處理簡(jiǎn)單,測(cè)定結(jié)果可靠,可用于可達(dá)靈片的質(zhì)量控制。
[1]王五保,吉信賓,徐玉欣,等.可達(dá)靈片治療不穩(wěn)定性心絞痛42例臨床觀察[J].河南職工醫(yī)學(xué)晚學(xué)報(bào),2011,23(4):417-418.
[2]劉駿鴻.可達(dá)靈片治療冠心病心絞痛療效觀察[J].現(xiàn)代中西醫(yī)結(jié)合雜志,2005,14(24):3246.
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Determination of dehydrocorydaline content in Kedaling Tablets by HPLC
PENG Yan-hong1,LI Chang-ling1,LIU Xin-yi2
(1.First Traditional Chinese Medicine Hospital of Yiyang,Hunan 413000,China;2.Second Xiangya Hospital of Central South University,Changsha,Hunan 410013,China)
Kedaling Tablets; dehydrocorydaline;HPLC
R284.2
B
10.3969/j.issn.1674-070X.2012.09.009.037.03
〔Absrract〕Objective To establish a method for the determination of dehydrocorydaline content in Kedaling Tablets by HPLC.Methods Aglient 1200 HPLC with Diamonsil C18column(4.6mm×250mm, 5μm)was used,the mobile phase was 0.05moL/L phosphates-acetonitrile(68:32)(v/v),the flow rate was 1.0 mL/min and the detection wavelength was 340 nm.Results Dehydrocorydaline showed a good linear relationship with peak area integral value within 0.1~1.0 μg(r=0.9997).The average recovery was 99.3%,and RSD was 1.0%.Conclusion The method was simple, reliable and reproducible for the quality control of Kedaling Tablets.
2012-06-12
彭艷紅(1970-),女,湖南益陽(yáng)人,副主任藥師,主要從事藥事管理與中藥的研究與檢驗(yàn)。
(本文編輯 楊 瑛)