紀(jì) 鵬，華永麗，薛文新，吳海燕，郭延生，魏彥明

甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，蘭州730070

當(dāng)歸為傘形科植物當(dāng)歸(Angelica sinensis (Oliv.)Diels)的干燥根［1］，主產(chǎn)于甘肅岷縣、漳縣等。有關(guān)當(dāng)歸揮發(fā)油分析的文章已屢見(jiàn)不鮮［2］，但對(duì)其不同炮制品的揮發(fā)油的比較研究報(bào)道較少。從文獻(xiàn)得知，生當(dāng)歸偏于活血化瘀、補(bǔ)血止痛［3］;油當(dāng)歸偏于潤(rùn)腸通便的作;酒當(dāng)歸偏于活血通經(jīng)［4，5］;土炒當(dāng)歸偏于補(bǔ)血;當(dāng)歸炭則偏于止血。本研究采用藥典規(guī)定的提取方法提取生當(dāng)歸及其炮制品的揮發(fā)油，采用GC-MS對(duì)其揮發(fā)油成分進(jìn)行分析，為研究不同當(dāng)歸炮制品的藥理作用與其所含揮發(fā)油的化學(xué)成分之間的相關(guān)性提供一定的參考。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

美國(guó)Agilent 6890N/5973N型氣相-質(zhì)譜聯(lián)用色譜儀;DM型內(nèi)熱式玻璃纖維電熱套:山東省鄄城永興儀器廠;F120型粉碎機(jī):北京市永光明醫(yī)療儀器廠;YP1102H型分析天平:上海精密科學(xué)有限公司;冷凝管;揮發(fā)油提取器3000 mL圓底燒瓶;2 mL EP管;無(wú)水硫酸鈉(Na2SO4);5 mL容量瓶;乙醚(分析純)。

1.2 試藥

當(dāng)歸樣品采自甘肅岷縣，由甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院中獸醫(yī)教研室魏彥明教授鑒定為A.sinensis。生當(dāng)歸:取當(dāng)歸原藥材，除去雜質(zhì)，洗凈，潤(rùn)透，切成薄片，干燥。酒當(dāng)歸:取當(dāng)歸片，加黃酒拌勻，稍悶，待酒被吸盡后，用文火炒至深黃色，微具酒香氣時(shí)，取出放涼。每100 kg當(dāng)歸，用黃酒10 kg。油當(dāng)歸:取凈當(dāng)歸片，加入3%的香油拌勻，悶潤(rùn)，文火炒至色澤加深，微顯焦斑，待顯油潤(rùn)有香氣時(shí)出鍋，晾涼。土當(dāng)歸:將土粉置鍋內(nèi)炒熱，倒入當(dāng)歸片，微炒至當(dāng)歸片粘滿細(xì)土?xí)r(稱(chēng)為掛土)取出，篩去土粉，放涼即可，每100 kg當(dāng)歸，用土粉30 kg。當(dāng)歸炭:取當(dāng)歸片，置鍋內(nèi)，用中火炒至當(dāng)歸外表焦黑色，內(nèi)部棕褐色，略具焦氣，質(zhì)枯脆時(shí)，取出放涼［6-8］。

2 方法

2.1 氣相色譜條件

色譜柱:30 m×0.2 mm×0.25 μm OV1701柱。載氣:氦氣。柱溫:程序升溫，40→150℃，升溫速率8℃/min，恒溫10 min;再?gòu)?50℃→220℃升溫，速度4℃/min，恒溫10 min;再?gòu)?20℃→250℃，升溫速度2℃/min，恒溫10 min;氣化溫度280℃，尾吹40 mL/min［9］。

2.2 質(zhì)譜條件

進(jìn)樣口溫度250℃，電離方式EI，發(fā)射電流150 μA，檢測(cè)器電壓350 V，離子源溫度200℃，電子能量70 eV，掃描范圍:33～550 amu［10］。

2.3 揮發(fā)油的提取

采取藥典規(guī)定的水蒸氣蒸餾法對(duì)不同當(dāng)歸飲片進(jìn)行揮發(fā)油的提取［11］。

3 結(jié)果

3.1 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

當(dāng)歸不同炮制品的揮發(fā)油的性狀、得率等見(jiàn)表1。對(duì)生當(dāng)歸，酒當(dāng)歸，油當(dāng)歸，土當(dāng)歸和當(dāng)歸炭分別進(jìn)行氣相色譜-質(zhì)譜分析，得它們的總離子流圖，見(jiàn)圖1～5。以面積歸一化法測(cè)得揮發(fā)油各成分相對(duì)含量，經(jīng)過(guò)計(jì)算機(jī)系統(tǒng)內(nèi)NIST標(biāo)準(zhǔn)檢索庫(kù)檢索，結(jié)果見(jiàn)表2。

表1 生當(dāng)歸、酒當(dāng)歸、油當(dāng)歸、土當(dāng)歸和當(dāng)歸炭揮發(fā)油的物理性狀比較Table 1 Comparison of physics properties of naphtha from raw Angelica，wine-baked Angelica，oil Angelica，soil Angelica and Angelica carbon

圖2 水蒸氣蒸餾法制取酒當(dāng)歸揮發(fā)油總離子流圖譜Fig.2 Total ion flow atlas of wine-baked Angelica naphtha made up by Steam distillation

圖4 水蒸氣蒸餾法制取土當(dāng)歸揮發(fā)油總離子流圖譜Fig.4 Total ion flow atlas of soil Angelica naphtha made up by Steam distillation

圖5 水蒸氣蒸餾法制取當(dāng)歸炭揮發(fā)油總離子流圖譜Fig.5 Total ion flow atlas of Angelica carbon naphtha made up by Steam distillation

表2 生當(dāng)歸、酒當(dāng)歸、油當(dāng)歸、土當(dāng)歸、當(dāng)歸炭揮發(fā)油分析結(jié)果Table 2 Analysis Result of naphtha from raw Angelica，wine-baked Angelica，oil Angelica，soil Angelica and Angelica carbon

30 33.916 π-欖香烯π-Elemene C15H24 0.10% 0.06% 0.09% － 0.07% 31 34.184 (+)-δ-長(zhǎng)葉蒎烯(+)-δ-Longipinene C15H24 0.52% 0.44% 0.90% 0.55% 0.51% 32 34.543 β-雪松烯β-Cedrene C15H24 0.19% 0.10% － － 0.02% 33 34.957 (+)-花側(cè)柏烯(+)-Cuparene C15H22 0.29% 0.20% 0.26% 0.19% 0.32% 34 35.237 (+)-α-長(zhǎng)葉蒎烯(+)-α-Longipinene C15H24 0.31% 0.19% 0.26% 0.14% 0.24% 35 36.772 1，4-環(huán)己二烯-1，2-羧酸酐1，4-Cyclohexadiene-1，2-carboxylic acid C8H6O3 0.09% 0.16% 1.49% 0.14% 0.16% 36 39.037 － － 0.04% 0.03% － － －37 39.713 (-)-匙葉桉油烯醇(-)-Spainulenol C15H24O 1.10% 1.03% － 0.89% 0.98% 38 40.851 － － － － － － 0.22% 39 41.558 匙葉桉油烯醇Spainulenol C15H24O 0.18% 0.13% 0.16% 0.16% 40 43.573 － － 0.07% － － － －41 45.875 Z-丁烯基酞內(nèi)酯Z-Butylidenephthalide C12H12O2 7.99% 9.81% 7.02% 7.02% 13.24% 42 46.264 3，4-二甲基-環(huán)氧苯基丁酸3，4-Dimethylepoxyphenylbutyrate C12H14O3 0.74% 0.82% 0.65% 1.01% 0.89% 43 48.669 － － － － － － 0.42% 44 48.98 E-丁烯基酞內(nèi)酯E-Butylidenephthalide C12H12O2 1.29% 1.43% 0.89% 0.70% 1.40% 45 49.4 Z-藳本內(nèi)酯Z-Ligustilide C12H14O2 78.61% 79.24% 76.56% 76.02% 75.54% 46 54.405 E-藳本內(nèi)酯E-Ligustilide C12H14O2 1.66% 1.72% 1.01% － 1.11%總計(jì)Total 99.09% 99.47% 98.89% 98.42% 99.46%

3.2 結(jié)果分析

本實(shí)驗(yàn)通過(guò)水蒸氣蒸餾法對(duì)生當(dāng)歸及其炮制品進(jìn)行揮發(fā)油的提取，并采用氣譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)測(cè)定和分析其化學(xué)組分。其中，從生當(dāng)歸中共分離出42種化合物，鑒定出 36種化合物，占百分含量的99.09%;酒當(dāng)歸中共分離出41種化合物，鑒定出36種化合物，占百分含量的99.47%;油當(dāng)歸中共分離出37個(gè)化合物，鑒定出34種化合物，占百分含量的98.89%;土當(dāng)歸中共分離出32種化合物，鑒定出30種化合物，占百分含量的98.42%;當(dāng)歸炭中共分離出38種化合物，鑒定出32種化合物，占百分含量的99.46%。

從表2中可以看出，生當(dāng)歸中相對(duì)百分含量的前4位分別為Z-藳本內(nèi)酯78.61%、Z-丁烯基酞內(nèi)酯7.99%、E-藳本內(nèi)酯1.66%和E-丁烯基酞內(nèi)酯1.29%;酒當(dāng)歸中相對(duì)百分含量前4位的分別為Z-藳本內(nèi)酯79.24%、Z-丁烯基酞內(nèi)酯9.81%、E-藳本內(nèi)酯1.72%和E-丁烯基酞內(nèi)酯1.43%;油當(dāng)歸中相對(duì)百分含量前4位的分別為Z-藳本內(nèi)酯76.56%、Z-丁烯基酞內(nèi)酯7.02%、2-甲氧基苯酚2.68%和1，4-環(huán)己二烯-1，2-羧酸酐1.49%;土當(dāng)歸中前4位的分別為Z-藳本內(nèi)酯76.02%、Z-丁烯基酞內(nèi)酯7.02%、2-甲氧基苯酚3.17%和(+)-香橙烯1.15%;當(dāng)歸炭中前4位的分別為Z-藳本內(nèi)酯75.54%、Z-丁烯基酞內(nèi)酯13.24%、E-丁烯基酞內(nèi)酯1.40%和 E-藳本內(nèi)酯1.11%。

1，4-環(huán)己二烯-1，2-羧酸酐、(+)-δ-長(zhǎng)葉蒎和1S-α-蒎烯3個(gè)化合物在油當(dāng)歸中含量最高。3，4-二甲基-環(huán)氧苯基丁酸、(+)-香橙烯、2-甲氧基苯酚、2，6-二甲基苯蒽、丁醛，1-乙氧基丙烷和甲酸等在土當(dāng)歸中含量較高。Z-丁烯基酞內(nèi)酯和(+)-花側(cè)柏烯2個(gè)化合物在當(dāng)歸炭中含量最高。匙葉桉油烯醇、(-)-匙葉桉油烯醇、(+)-α-長(zhǎng)葉蒎烯、雪松烯、α-(甜)沒(méi)藥烯和花柏烯6個(gè)化合物在生當(dāng)歸中含量最高。

為了進(jìn)一步分析生當(dāng)歸及不同炮制品中揮發(fā)油的化學(xué)成分差異性，再考慮到分析結(jié)果的客觀性，從表2中選取20種代表性化合物進(jìn)行分析比較，見(jiàn)圖6。從圖6可以看出:①當(dāng)歸炭中新增了2種未知化合物;②甲酸、1-乙氧基丙烷和乙酸3種化合物在土當(dāng)歸中相對(duì)百分比最高;③油當(dāng)歸中含的1，4-環(huán)己二烯-1，2-羧酸酐明顯高于其他炮制品;④油當(dāng)歸與土當(dāng)歸中不含雪松烯，生當(dāng)歸中雪松烯相對(duì)其他炮制品含量最高;⑤1S-α-蒎烯，辛醛，6-丁基-1，4環(huán)庚二烯，2-甲氧基-苯酚4種化合物在當(dāng)歸炭中相對(duì)比例幾乎為零。

圖6 生當(dāng)歸及當(dāng)歸不同炮制品揮發(fā)油化學(xué)成分比較圖Fig.6 Comparison chart of chemical composition analysis of essential oil from raw A.sinensis and different processed products

4 討論

目前有關(guān)當(dāng)歸揮發(fā)油成分分析的研究報(bào)道較多［12-18］，但是有關(guān)當(dāng)歸不同炮制品揮發(fā)油成分差異的分析報(bào)道較少。本研究結(jié)果顯示生當(dāng)歸經(jīng)過(guò)不同方法炮制后，其所含揮發(fā)油的主要化學(xué)成分與含量均發(fā)生了不同程度的變化。E-藳本內(nèi)酯、Z-藳本內(nèi)酯和E-丁烯基酞內(nèi)酯等化合物在酒當(dāng)歸中的含量明顯高于生當(dāng)歸及其他炮制品，但是這三種化合物在油當(dāng)歸、土當(dāng)歸中的含量又明顯低于生當(dāng)歸;另外研究發(fā)現(xiàn)在土當(dāng)歸中檢測(cè)不到E-藳本內(nèi)酯，當(dāng)歸炭中Z-丁烯基酞內(nèi)酯含量顯著高于生當(dāng)歸及其他炮制品。該結(jié)果與以往文獻(xiàn)報(bào)道的數(shù)據(jù)不同，其可能的原因是由于實(shí)驗(yàn)對(duì)象及條件的差異所引起［12］。

根據(jù)生當(dāng)歸及其不同炮制品的揮發(fā)油測(cè)定結(jié)果，認(rèn)為當(dāng)歸飲片中揮發(fā)油的主要成分是Z-藳本內(nèi)酯與E-藳本內(nèi)酯，這2種成分均屬苯酞類(lèi)化合物，是當(dāng)歸揮發(fā)油的主要活性成分，該結(jié)果與之前研究結(jié)果一致［19］。當(dāng)歸經(jīng)不同炮制處理后揮發(fā)油成分發(fā)生了一定的變化，其中Z-藳本內(nèi)酯在酒當(dāng)歸中含量達(dá)79.24%，顯著高于生當(dāng)歸和其他炮制品中的含量;而文獻(xiàn)曾報(bào)道藳本內(nèi)酯能對(duì)抗組織胺所引起的支氣管收縮，具有平喘及中樞抑制與鎮(zhèn)痛作用，也具有抗心肌缺血、降體溫、降壓及抑制血小板聚集等作用［7］，所以可推斷酒當(dāng)歸的平喘和活血化瘀作用強(qiáng)于生當(dāng)歸及其它炮制品。而土當(dāng)歸中揮發(fā)油總含量最低，這與中藥傳統(tǒng)炮制理論認(rèn)為的土炒可以增強(qiáng)當(dāng)歸補(bǔ)脾止瀉的功能，緩和當(dāng)歸的刺激性，降低其毒副作用不謀而合［7］。研究發(fā)現(xiàn)當(dāng)歸炭中出現(xiàn)三種新的揮發(fā)油成分，保留時(shí)間分別為 31.115、40.851、48.669 min，且Z-丁烯基酞內(nèi)酯含量顯著升高，中醫(yī)傳統(tǒng)認(rèn)為當(dāng)歸炒炭則緩其辛烈之性專(zhuān)于止血［7］，因此，我們推測(cè)當(dāng)歸炭的止血的作用很可能與揮發(fā)油中新增3種化合物以及Z-丁烯基酞內(nèi)酯含量的升高有一定相關(guān)性。油炒當(dāng)歸可以增強(qiáng)當(dāng)歸的潤(rùn)腸通便的作用，可以用于治療血虛腸燥便秘等癥，這一方面與當(dāng)歸油炒，增加了其潤(rùn)腸通便作用外，也可能與當(dāng)歸油炒后其揮發(fā)油中的1，4-環(huán)己二烯-1，2-羧酸酐成分含量較高有一定的關(guān)系。

眾所周知，當(dāng)歸不同炮制品的藥理作用差異明顯，而生當(dāng)歸經(jīng)不同炮制方法炮制后，揮發(fā)油的組成和含量等方面出現(xiàn)了不同程度的變化，表明炮制方式和當(dāng)歸藥理作用有一定的聯(lián)系。本研究從當(dāng)歸及其不同炮制品中揮發(fā)油組成及其含量變化進(jìn)行了研究，尚不能全面概括當(dāng)歸及其不同炮制品作用改變的物質(zhì)基礎(chǔ)，但可以為生當(dāng)歸及其他不同炮制品的藥理研究提供一些參考依據(jù)。

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