王 鑫，黃韜睿

（1.四川省食品藥品檢驗所，成都610097，2.四川烹飪高等專科學(xué)校，成都610100）

1 引言

為減低成本、賦予食品誘人的外觀、穩(wěn)定的色澤，某些生產(chǎn)者為追求經(jīng)濟利益，在食品生產(chǎn)過程中超范圍或超量使用合成著色劑。為此，衛(wèi)生部印發(fā)了“食品中可能違法添加的非食用物質(zhì)名單”的通知，可加強對超范使用合成著色劑檢測是十分必要的。

在國家標準GB/T 5009.35-2003《食品中合成著色劑的測定》中對桔子汁、果味水、果子露汽水類，配制酒類，硬糖、蜜餞類，淀粉軟糖等食品的試樣前處理進行了規(guī)定，但沒有非發(fā)酵豆制品的前處理方法，且也沒有此類食品合適的色素提取方法。為此，筆者研究了樣品超聲處理時間，前處理溫度，梯度洗脫條件對樣品中合成著色劑提取率的影響，并對GB/T 5009.35-2003進行了改進，旨在建立適用于非發(fā)酵豆制品樣品合成著色劑檢測的HPLC法。

2 實驗部分

2.1 材料與試劑

非發(fā)酵豆制品20批，市售。

檸檬黃，日落黃標準儲備液（質(zhì)量濃度均為0.50mg/ml）,中國計量科學(xué)研究院；甲醇，fisher公司，色譜純；乙酸銨，天津市光復(fù)科技發(fā)展有限公司，優(yōu)級純；無水乙醇、氨水，均為市售分析純；微孔濾膜（有機相，0.45 m）。

2.2 儀器

高效液相色譜儀（美國Agilent公司），配Agilent 1100紫外檢測器；超聲波清洗器；超純水機。

2.3 分析方法

2.3.1 色譜條件

色譜柱：Agilent Eclipse XDB-C18（4.6mm×150mm，5μm）；流動相：甲醇-0.02mol/L乙酸銨，梯度洗脫程序見表1；流速：1.0ml/min；柱溫：35℃；檢測波長：254nm。

表1 梯度μ洗脫程序

2.3.2 標準溶液的配制

精密量取檸檬黃、日落黃標準物質(zhì)溶液各200μl，置5ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，得混合標準溶液（各含20μg/ml）。

2.4 試樣處理

取均質(zhì)過的樣品約5g，精密稱定，置具塞離心管中，加無水乙醇-氨水（2ml濃氨水稀釋至100ml）-水（70:20:10）20ml，超聲處理10分鐘，離心，分取上清液，再重復(fù)提取3次，每次10ml，合并上清液，蒸至約10ml，加聚酰胺粉（100-200目）0.7g，攪拌片刻，用20%檸檬酸調(diào)整pH值至4,60℃加熱攪拌至充分吸附，G3垂熔漏斗抽濾，用60℃pH=4的水洗滌5次，每次10ml，用甲醇-甲酸混合溶液（6:4）洗滌5次，每次5ml，水洗至中性，用無水乙醇-氨水-水混合溶液解析5次，每次5ml，收集解析液，加乙酸中和，蒸發(fā)至近干，加水溶解，置5ml量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液作為供試品溶液，供HPLC分析。測得合成著色劑額標準圖譜如圖1所示。

3 結(jié)果與討論

3.1 流動相中乙酸銨濃度及pH值的影響

為了得到更好的峰形，對流動相中乙酸銨的濃度及pH值進行了優(yōu)化。分別選用0.02mol/L，0.05mol/L和0.1mol/L乙酸銨溶液作為流動相，結(jié)果表明濃度為0.02mol/L時，各物質(zhì)的響應(yīng)值最高。

比較了0.02mol/L乙酸銨在不調(diào)pH值和pH值分別為3.5，4，4.5（用乙酸調(diào)節(jié)）的情況。結(jié)果表明，0.02mol/L乙酸銨不調(diào)pH值，各物質(zhì)峰形最好。

3.2 樣品前處理方法的優(yōu)化

一般用來提取合成著色劑的溶劑有乙腈、甲醇、堿性甲醇和乙醇。本研究發(fā)現(xiàn)，使用無水乙醇-氨水-水（70:20:10）作為提取溶劑效果很好，回收率也高。試樣溶液加檸檬酸溶液調(diào)pH值到4，加入聚酰胺粉才能很好的吸附合成著色劑。

3.3 加標回收率及最低檢出限

在5.0g空白豆制品樣品中添加適量合成著色劑標準混合溶液，平行添加3份，進行加標回收率試驗，結(jié)果表明，3份平行樣中，合成著色劑的平均回收率均大于90%；以信噪比S/N=3計算，日落黃、檸檬黃的最低檢出限均為：0.02mg/kg。

3.4 實際樣品分析

采用本方法對20批市售豆制品(包括豆腐、豆干、豆?jié){)中非食用色素進行了檢測，結(jié)果均為陰性。

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