羅亞

(湘潭職業(yè)技術(shù)學(xué)院 湖南湘潭 411101)

小兒麻甘泡騰片由小兒麻甘顆粒改劑型而來(lái),由麻黃、黃芩、紫蘇子、甘草、桑白皮、苦杏仁、地骨皮、石膏8位中藥及乳糖、甜菊苷、酒石酸、碳酸氫鈉等輔料加工制成,具有平喘止咳、利咽祛痰。用于小兒肺炎喘咳,咽喉炎癥。方中各藥都采用水提醇沉工藝,為了有效控制小兒麻甘泡騰片的質(zhì)量,保證臨床療效,作者參照《中國(guó)藥典》2005年版一部黃芩項(xiàng)下,采用HPLC法對(duì)小兒麻甘泡騰片中黃芩的主要成份黃芩苷進(jìn)行含量測(cè)定研究,本方法簡(jiǎn)便,快捷、準(zhǔn)確、重復(fù)性好,能有效控制小兒麻甘泡騰片的質(zhì)量。

1 儀器與試藥

島津LC-10A型高效液相色譜儀(SPD-10AVP檢測(cè)器LC-10AVP泵);C18色譜柱(Polaris 250×4.6mm,5μm,瓦里安公司);甲醇為色譜純,水為重蒸水,其它試劑均為分析純;黃芩苷對(duì)照品(中國(guó)藥品生物制品檢定所,供含量測(cè)定用,批號(hào)為110715-200514),小兒麻甘泡騰片自制。

圖1 小兒麻甘泡騰片HPLC圖

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

Polaris C18色譜柱(4.6×250mm,5μm),流動(dòng)相甲醇－水－磷 酸(47∶53∶0.2),流 速1.0mL·min-1,柱溫為室溫,檢測(cè)波長(zhǎng)280nm,進(jìn)樣量10L。在上述色譜條件下,黃芩苷峰和樣品中其它組的峰可達(dá)基線分離,且與其它相鄰峰分離度>1.5,按黃芩苷峰計(jì)算,理論板數(shù)在2500以上,陰性對(duì)照無(wú)干擾,對(duì)照品、供試品、陰性樣品、黃芩苷色譜圖見(jiàn)圖1。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取黃芩苷對(duì)照品適量,加甲醇制成每1毫升含15μg的溶液,即得。

2.3 線性關(guān)系考察

精密吸取濃度為14.8μg/mL的黃芩苷對(duì)照品溶液2.5、5、10、15、20μL注入液相色譜儀,測(cè)定其峰面積積分值,以進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo),峰面積積分值為縱坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,其回歸方程為:y=45871x-23921,r＝0.9995。結(jié)果表明,黃芩苷在0.037～0.296μg范圍內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

2.4 供試品溶液的制備

取本品10片,研細(xì),取約0.25g,精密稱定,加70%乙醇40mL,加熱回流1h,放冷,濾過(guò),濾液置100mL量瓶中,用少量70%乙醇分次洗滌容器和殘?jiān)?洗液濾入同一量瓶中,加70%乙醇至刻度,搖勻。精密量取1mL,置10mL量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,用微孔濾膜(0.45μm)濾過(guò),取續(xù)濾液,即得。

2.5 陰性溶液的制備

取除黃芩外的其余處方量藥物,按制備工藝方法制備缺黃芩的陰性樣品,按上述供試品溶液制備方法制成缺黃芩苷的陰性溶液。

表1 黃芩苷加樣回收率

2.6 精密度試驗(yàn)

精密吸取同一供試品溶液10μL,重復(fù)進(jìn)樣5次,測(cè)定黃芩苷峰面積,RSD1.4%。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

分別精密吸取同一供試品溶液10μL,于0、4、8、12、16、20h進(jìn)樣,RSD1.6%。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批號(hào)樣品5份,按上述含量測(cè)定項(xiàng)下的條件,依法測(cè)定,計(jì)算,結(jié)果RSD0.4%。

2.9 加樣回收率試驗(yàn)

取已知含量為0.60%(批號(hào):100301)的樣品約0.12g,共5份,精密稱定,分別精密加入黃芩苷對(duì)照品溶液(0.0148μg/mL)50mL,即0.74mg,按上述含量測(cè)定項(xiàng)下的方法測(cè)定含量,計(jì)算回收率,結(jié)果表明,本方法加樣回收率好。結(jié)果見(jiàn)表1。

2.10 樣品測(cè)定

取3批樣品(100301,100302,100303),按供試品溶液的制備方法制成供試品溶液,按2.1色譜條件進(jìn)行含量測(cè)定,計(jì)算含量,結(jié)果3批小兒麻甘泡騰片黃芩苷的含量分別為每片6.01,6.15,5.98mg,RSD分別為0.57%,0.74%,0.45%。

3 討論

3.1 供試品溶液的制備

參照《中國(guó)藥典》2005年版一部藥材黃芩中黃芩苷含量測(cè)定的方法,對(duì)樣品提取方法進(jìn)行了考察,方法1:樣品加70%乙醇40mL超聲提取40min;方法2:樣品加70%乙醇40mL加熱回流提取30min;方法3:樣品加70%乙醇40mL加熱回流提取60min。試驗(yàn)結(jié)果表明,3種方法制成的供試品溶液進(jìn)樣,均基線平穩(wěn),分離度好。但方法3黃芩苷提取較完全,故選擇方法3進(jìn)行供試品溶液的制備。

3.2 樣品中黃芩苷含量限度的確定

小兒麻甘泡騰片樣品中黃芩苷含量測(cè)定結(jié)果平均為6.05mg/片,每片含生藥2.28g.根據(jù)中國(guó)藥典2005年版一部黃芩藥材中黃芩苷含量限度(9.0%),黃芩水提醇沉后入藥,轉(zhuǎn)移率約為40%,成品轉(zhuǎn)移率,按70%計(jì)算,制定每片含黃芩以黃芩苷(C21H18O11)計(jì),不得少于4.0mg。

[1] 中國(guó)藥典.一部.2005:211.