高放 何靜華 張鳳梅 張秀彬 許華 李勝水

(1.黃驊開發(fā)區(qū)博愛醫(yī)院病理科 河北黃驊 061100; 2.河北省滄州中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院病理科 河北滄州 061000;3.南大港醫(yī)院病理科 河北港州 061103)

膀胱癌是國內(nèi)泌尿外科中最常見的惡性腫瘤,浸潤和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移是其死亡的最主要原因。加強(qiáng)對(duì)膀胱癌浸潤及轉(zhuǎn)移的分子機(jī)制的研究尤為迫切。我們采用免疫組化S-P法檢測(cè)nm23、COX-2與MMP-9在膀胱癌中的表達(dá)情況,分析其在不同類型膀胱癌的表達(dá)情況,探討其與膀胱癌浸潤及轉(zhuǎn)移的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

標(biāo)本均取自1995年至2010年河北省滄州中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院病理科存檔的經(jīng)10%中性福爾馬林固定,石蠟包埋的原發(fā)性膀胱癌標(biāo)本76例,其中膀胱尿路上皮癌65例,膀胱腺癌5例,鱗狀細(xì)胞癌6例;臨床分期按UICC-TNM標(biāo)準(zhǔn):淺表性癌(Tis～T1)35例,浸潤性癌(T2～T4)41例。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者28例,無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者48例。其中男52例,女24例,平均年齡53歲;正常膀胱黏膜標(biāo)本12例作對(duì)照。所有病例均為首發(fā)病例,經(jīng)過病理復(fù)查,術(shù)前均未放療或化療。

1.2 檢測(cè)方法

采用免疫組化SP法,主要試劑鼠抗人nm23、COX-2與MMP-9單克隆抗體及SP試劑盒等均購自福州邁新公司(即用型)。染色過程嚴(yán)格按說明書進(jìn)行,分別用已知陽性切片作陽性對(duì)照,用PBS(pH=7.4)代替一抗作空白對(duì)照,染色步驟嚴(yán)格按照試劑說明書進(jìn)行。

1.3 陽性結(jié)果判斷

COX-2、MMP-9染色陽性表達(dá)以細(xì)胞漿內(nèi)和(或)細(xì)胞膜出現(xiàn)棕黃色顆粒,nm23染色陽性表達(dá)以細(xì)胞漿出現(xiàn)棕黃色顆粒。采用半定量分析方法(AB值法),每張切片隨機(jī)選擇5個(gè)高倍視野,每視野計(jì)數(shù)200個(gè)細(xì)胞(癌組織計(jì)數(shù)癌細(xì)胞,正常膀胱黏膜組織計(jì)數(shù)上皮細(xì)胞)。A:以染色強(qiáng)度評(píng)分,0分為細(xì)胞無著色,1分為細(xì)胞著淺黃色,2分為細(xì)胞著棕黃色,3分為細(xì)胞著棕褐色;B:以陽性細(xì)胞比例評(píng)分,無陽性細(xì)胞數(shù)為0分,<25%為1分,25%～50%為2分,>50%為3分。A+B之和為最后得分,得分<3分為陰性,3～6分為陽性[1]。

表1 nm23、COX-2與MMP-9蛋白在正常膀胱黏膜及膀胱癌組織中的表達(dá)

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

應(yīng)用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件,采用χ2檢驗(yàn)及Spearman相關(guān)分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。

2 結(jié)果

2.1 nm23、COX-2與MMP-9蛋白在不同膀胱組織中的表達(dá)

nm23在正常膀胱黏膜中陽性表達(dá)率為91.7%,COX-2與MMP-9在正常膀胱黏膜中無陽性表達(dá),而在膀胱尿路上皮癌組織中的陽性表達(dá)率分別為nm23 44.6%、COX-2 84.6%、MMP-9 83.1%;在膀胱腺癌組織中的陽性表達(dá)率分別為nm23 40%、COX-2 80%、MMP-9 80%;在膀胱鱗狀細(xì)胞癌組織中的陽性表達(dá)率分別為nm23 50%、COX-2 83.3%、MMP-9 83.3%。經(jīng)比較,3種標(biāo)志物在膀胱癌組織與正常膀胱黏膜組織的表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),而與膀胱癌組織學(xué)類型無關(guān),見表1。

2.2 膀胱癌nm23、COX-2與MMP-9蛋白表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

在淺表性膀胱癌中的陽性表達(dá)率分別為nm23 54.2%、COX-2 68.6%、MMP-9 68.6%;在浸潤性膀胱癌組織中的陽性表達(dá)率分別為nm23 36.5%、COX-2 97.6%、MMP-9 95.1%;無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者陽性表達(dá)率分別為nm23 62.5%、COX-2 79.2%、MMP-9 72.9%;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者陽性表達(dá)率分別為nm23 14.3%、COX-2 92.9%、MMP-9 100%。本研究發(fā)現(xiàn)nm23、COX-2與MMP-9蛋白陽性表達(dá)率與膀胱癌的浸潤深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān),浸潤越深及淋巴結(jié)有轉(zhuǎn)移,其表達(dá)陽性率越高(P<0.05),見表1。

2.3 膀胱癌nm23表達(dá)與COX-2、MMP-9蛋白表達(dá)的關(guān)系

本研究發(fā)現(xiàn)nm23在膀胱癌中的低表達(dá)與COX-2、MMP-9蛋白在膀胱癌中的高表達(dá)呈正相關(guān)(P<0.05)。

3 討論

3.1 nm23的表達(dá)與膀胱癌浸潤及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系

nm23是一種腫瘤轉(zhuǎn)移抑制基因,與腫瘤轉(zhuǎn)移潛能相關(guān),對(duì)腫瘤侵襲起負(fù)作用。許多研究表明,nm23的表達(dá)水平與腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān),它與胃癌[2]、肺癌[3]、結(jié)腸癌[4]等多種人類腫瘤的轉(zhuǎn)移預(yù)后相關(guān),可以作為評(píng)估腫瘤的轉(zhuǎn)移和患者預(yù)后的指標(biāo)。本研究結(jié)果也顯示,膀胱癌組織中的nm23的陽性表達(dá)率顯著低于正常膀胱黏膜組織(P<0.05)。本研究還發(fā)現(xiàn),膀胱癌中nm23的表達(dá)陽性率與腫瘤的浸潤深度及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān),nm23的表達(dá),深層浸潤顯著高于淺層浸潤,有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的顯著高于無轉(zhuǎn)移者,提示nm23基因在膀胱癌的發(fā)生發(fā)展過程中是由強(qiáng)轉(zhuǎn)弱到缺失的一個(gè)生物學(xué)轉(zhuǎn)變過程。本研究提示膀胱癌中nm23的表達(dá)與膀胱癌的浸潤深度及是否轉(zhuǎn)移呈負(fù)相關(guān),與鐘偉等[5]報(bào)告的觀點(diǎn)一致。提示nm23可作為膀胱癌患者預(yù)測(cè)轉(zhuǎn)移和預(yù)后的指標(biāo)。在nm23陰性的膀胱癌患者預(yù)示遠(yuǎn)期效果不佳,要特別注意患者的轉(zhuǎn)移和復(fù)發(fā)。

3.2 COX-2的表達(dá)與膀胱癌浸潤及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系

COX-2是一種可誘導(dǎo)型酶,靜息時(shí)不表達(dá),只有在炎癥因子、腫瘤誘導(dǎo)劑等誘導(dǎo)下才迅速合成,參與炎癥過程及腫瘤的發(fā)生、發(fā)展過程。COX-2主要的誘導(dǎo)因素有生長因子、細(xì)胞內(nèi)癌基因、熱休克蛋白、脂多糖內(nèi)皮素、胃泌素、突觸活動(dòng)、白介素-10(IL-10)、高滲狀態(tài)等。近年來,大量研究表明COX-2與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān),并參與實(shí)體腫瘤的血管生成[6～7]。不論食管鱗狀細(xì)胞癌[8]、尤文肉瘤[9]、基底細(xì)胞癌、子宮內(nèi)膜癌[10]等原發(fā)性腫瘤組織,還是腫瘤轉(zhuǎn)移灶組織,COX-2在腫瘤組織中均有高表達(dá)。本組研究表明正常膀胱組織中無COX-2陽性表達(dá),而在膀胱癌中COX-2陽性表達(dá)率達(dá)84.2%(64/76),且隨病理浸潤深度增加而升高,有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者陽性率高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者,表明其在膀胱癌發(fā)生發(fā)展中可能起重要作用,陽性表達(dá)率高的腫瘤惡性程度高,參與腫瘤的浸潤及轉(zhuǎn)移過程,與馬俊兵等[11]報(bào)告的觀點(diǎn)一致。

3.3 MMP-9的表達(dá)與膀胱癌浸潤及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系

MMP-9是金屬蛋白酶家族中分子質(zhì)量最大的酶(92kD),研究證實(shí)MMP-9能降解多種包括基底膜Ⅳ型膠原在內(nèi)的細(xì)胞外成分,使癌細(xì)胞向深層間質(zhì)浸潤的同時(shí)也突破淋巴管和血管的基底膜而向脈管浸潤,最終發(fā)生轉(zhuǎn)移［12］。在胃癌、乳腺癌、前列腺癌等多種惡性腫瘤中高表達(dá),與腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。本次研究將收集到的76例膀胱癌標(biāo)本進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色分析,比較了正常膀胱黏膜與癌組織中MMP-9表達(dá)程度以及癌組織中MMP-9表達(dá)程度與癌組織的分類、浸潤及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。初步的結(jié)果顯示正常膀胱黏膜幾乎沒有MMP-9的表達(dá),而癌組織中MMP-9表達(dá)程度較高,尤其是浸潤肌層的癌組織中MMP-9表達(dá)程度明顯高于局限在黏膜內(nèi)的癌組織(P<0.05),這個(gè)結(jié)果與其他惡性腫瘤的結(jié)果相吻合。本研究又比較了膀胱癌有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移與MMP-9表達(dá)的關(guān)系,結(jié)果顯示有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的膀胱癌MMP-9的表達(dá)量顯著升高,與黃杰雄[13]的研究結(jié)果相一致。這提示MMP-9在膀胱癌的浸潤及轉(zhuǎn)移過程中發(fā)揮了重要作用。

3.4 膀胱癌nm23的表達(dá)與COX-2、MMP-9蛋白表達(dá)的關(guān)系

多數(shù)研究認(rèn)為腫瘤的發(fā)生、浸潤和轉(zhuǎn)移至少涉及3個(gè)以上癌基因。在膀胱癌發(fā)生發(fā)展、浸潤及轉(zhuǎn)移的不同階段,多種癌基因、抑癌基因和其他因素發(fā)揮著不同的作用。本研究結(jié)果顯示,nm23的低表達(dá)與COX-2、MMP-9的高表達(dá)與膀胱癌的浸潤及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移明顯呈正相關(guān),與膀胱癌組織學(xué)類型無關(guān)。這顯示,在膀胱癌浸潤轉(zhuǎn)移過程中,nm23表達(dá)與COX-2、MMP-9蛋白具有協(xié)同作用,其機(jī)理有待進(jìn)一步探討。本研究發(fā)現(xiàn)nm23低表達(dá)伴COX-2、MMP-9高表達(dá)的膀胱癌患者易發(fā)生浸潤和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移,多數(shù)預(yù)后不良。提示對(duì)膀胱癌標(biāo)本進(jìn)行nm23、COX-2與MMP-9蛋白的聯(lián)合檢測(cè)具有綜合判斷腫瘤浸潤轉(zhuǎn)移、指導(dǎo)臨床治療及觀察膀胱癌預(yù)后的實(shí)際價(jià)值。COX-2、MMP-9的聯(lián)合檢測(cè)可以更準(zhǔn)確的把握膀胱癌的惡性程度,可作為手術(shù)治療方案的參考指標(biāo);nm23作為腫瘤抑制基因?qū)︻A(yù)測(cè)膀胱癌浸潤及轉(zhuǎn)移有重要參考價(jià)值。

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