汪治宇 劉榮鳳 李 幸

1 河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院生物治療科；2 河北醫(yī)科大學(xué)第四醫(yī)院腫瘤內(nèi)科 河北省腫瘤內(nèi)科診療中心

肺癌的發(fā)病率高居惡性腫瘤之首，是惡性腫瘤病死率中增長(zhǎng)最快，危害最大的之一。盡管近年來(lái)的化療藥物層出不窮，但療效方面仍然處于難以突破的平臺(tái)期[1,2]。近年來(lái)腫瘤生物療法作為輔助療法，可消除患者體內(nèi)殘存的腫瘤細(xì)胞，針對(duì)肺癌發(fā)病機(jī)制的基因治療，有望改善患者的生存質(zhì)量和預(yù)后，為肺癌的臨床治療開(kāi)辟了新途徑。

1 過(guò)繼免疫治療

腫瘤過(guò)繼免疫治療(adoptivecelluarimmunotherapy，ACI) 是指通過(guò)向腫瘤患者輸注具有抗腫瘤活性的免疫細(xì)胞，直接殺傷或激發(fā)機(jī)體免疫反應(yīng)殺傷腫瘤細(xì)胞，達(dá)到治療腫瘤的目的[3]。

它包括非特異性激活和特異性激活的效應(yīng)細(xì)胞，前者是采用非特異性刺激因子(IL-2、干擾素)刺激前體效應(yīng)細(xì)胞，使其活化為具有抗腫瘤活性的效應(yīng)細(xì)胞，如淋巴因子激活殺傷細(xì)胞(LAK細(xì)胞)、腫瘤浸潤(rùn)性淋巴細(xì)胞(TIL)、細(xì)胞因子誘導(dǎo)的殺傷細(xì)胞(Cytokine-induced kill cells，CIK)；特異性激活的效應(yīng)細(xì)胞是指采用腫瘤抗原作刺激物所誘導(dǎo)的抗腫瘤效應(yīng)細(xì)胞，如樹(shù)突狀細(xì)胞(DC)，細(xì)胞毒T淋巴細(xì)胞(CD8細(xì)胞)等。其中CIK是應(yīng)用最廣的一種，它是非MHC限制細(xì)胞毒性淋巴細(xì)胞，主要效應(yīng)細(xì)胞是高度增生的CD3+和CD56+雙陽(yáng)性表型T細(xì)胞，兼具有T淋巴細(xì)胞強(qiáng)大的抗腫瘤活性和NK細(xì)胞的非限制性殺瘤優(yōu)點(diǎn)。CIK細(xì)胞是由多種細(xì)胞因子(IL-1、IL-2、IFN-γ和CD3單抗)與非貼壁外周血單個(gè)核細(xì)胞孵育產(chǎn)生，與LAK細(xì)胞等免疫效應(yīng)細(xì)胞相比，CIK細(xì)胞具有以下特點(diǎn)：①增殖速度快，可在體外大量培養(yǎng)；②殺瘤活性高，體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)證實(shí)，CIK細(xì)胞有更強(qiáng)大的殺瘤活性；③抑瘤譜廣；④對(duì)多重耐藥腫瘤細(xì)胞同樣敏感；⑤對(duì)正常骨髓造血前體細(xì)胞毒性很小。目前關(guān)于CIK細(xì)胞的殺傷原理尚未完全闡明，CIK對(duì)靶細(xì)胞的殺傷原理可能有兩條途徑：第一條，CIK細(xì)胞被淋巴細(xì)胞功能抗原-1有關(guān)識(shí)別結(jié)構(gòu)激活導(dǎo)致胞質(zhì)毒性顆粒依賴(lài)性的溶細(xì)胞作用，這條途徑與胞質(zhì)內(nèi)環(huán)磷酸腺苷(cAMP)濃度無(wú)關(guān)；第二條，CIK細(xì)胞表面的CD3樣受體被結(jié)合而激活CIK細(xì)胞產(chǎn)生胞質(zhì)毒性顆粒介導(dǎo)的溶細(xì)胞反應(yīng)。CIK細(xì)胞對(duì)腫瘤細(xì)胞的直接殺傷是依靠受敏感靶細(xì)胞刺激時(shí)釋放細(xì)胞毒性胞質(zhì)顆粒，其中CD3+、CD56+細(xì)胞的殺傷作用最強(qiáng)。活化的CIK細(xì)胞可產(chǎn)生大量細(xì)胞因子，不僅對(duì)腫瘤細(xì)胞直接殺傷，還可通過(guò)機(jī)體調(diào)節(jié)免疫系統(tǒng)間接殺傷腫瘤細(xì)胞。李文峰[4]觀(guān)察到肺癌化療組聯(lián)合CIK細(xì)胞治療組與單純化療組相比，完全緩解率和生活質(zhì)量有了很大提高，免疫情況得到改善，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。盛春華[5]等的研究也有類(lèi)似的結(jié)果，并且隨訪(fǎng)發(fā)現(xiàn)，聯(lián)合CIK組的3年生存率為 25.0% ，對(duì)照組為15.2%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 肺癌疫苗

腫瘤疫苗是腫瘤生物治療的重要組成部分，近年來(lái)發(fā)展十分迅速，為腫瘤的預(yù)防和治療開(kāi)避了新的途徑[6]。腫瘤疫苗可通過(guò)主動(dòng)免疫方式誘導(dǎo)全身性的特異抗瘤效應(yīng)，與手術(shù)治療，放射治療相比，作用范圍更廣泛，特別適用于多發(fā)病灶性腫瘤，廣泛轉(zhuǎn)移性腫瘤。目前應(yīng)用的肺癌疫苗有腫瘤細(xì)胞疫苗，病毒疫苗，癌基因產(chǎn)物疫苗，人工合成多肽疫苗，抗獨(dú)特型疫苗和樹(shù)突狀細(xì)胞疫苗等，其中尤以樹(shù)突狀細(xì)胞疫苗的進(jìn)展最為矚目。

2.1 樹(shù)突狀細(xì)胞(dendritic cell，DC)疫苗

DCs是細(xì)胞膜表面高表達(dá)MHCⅠ類(lèi)和Ⅱ類(lèi)分子，能移行至淋巴器官并刺激初始型T細(xì)胞增殖活化，具有一些相對(duì)特異性表面標(biāo)志的一類(lèi)細(xì)胞。它有效的遞呈腫瘤抗原，誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生殺傷細(xì)胞，抑制腫瘤生長(zhǎng)并殺傷腫瘤細(xì)胞，消滅術(shù)后殘存的腫瘤細(xì)胞，減少?gòu)?fù)發(fā)可能性。DCs在組織中含量極微，因此，必須進(jìn)行DCs的體外人工誘導(dǎo)以滿(mǎn)足對(duì)DCs基礎(chǔ)和臨床研究的需要。通過(guò)將DC細(xì)胞與腫瘤細(xì)胞裂解物或腫瘤抗原蛋白或多肽孵育沖擊致敏DC細(xì)胞，或采用細(xì)胞融合技術(shù)或基因轉(zhuǎn)染轉(zhuǎn)導(dǎo)方法導(dǎo)入腫瘤相關(guān)抗原(TAA)或多肽基因或細(xì)胞因子基因，使DC同時(shí)持久表達(dá)免疫原及其協(xié)同因子，使腫瘤抗原能直接提呈給T細(xì)胞，進(jìn)而激發(fā)有效的抗腫瘤免疫。DC一旦進(jìn)入腫瘤組織，便在趨化因子及敏感的化學(xué)因子的濃度下定向遷徙，浸入腫瘤組織中發(fā)揮作用。DC疫苗在肺癌治療方面有許多令人興奮的發(fā)現(xiàn)，Edward等[7]采用不同抗原負(fù)載的自體DC疫苗，用于16例(ⅠA-ⅢB期)經(jīng)臨床手術(shù)或放化療后的患者后發(fā)現(xiàn)5例患者出現(xiàn)腫瘤特異性免疫應(yīng)答的增強(qiáng)，全部患者均未出現(xiàn)疫苗相關(guān)性不良反應(yīng)。晚期肺癌患者中同樣可出現(xiàn)較強(qiáng)的腫瘤特異性免疫應(yīng)答的現(xiàn)象，應(yīng)答強(qiáng)度與其接受的治療方式無(wú)關(guān)。Aki[8]應(yīng)用經(jīng)過(guò)半乳糖基神經(jīng)酞胺負(fù)載的DC治療晚期及復(fù)發(fā)性肺癌時(shí)發(fā)現(xiàn)患者體內(nèi)自然殺傷細(xì)胞的活性得到了明顯提高。Uede等[9]采用HLA-A24限制性的癌胚抗原(CEA652)免疫負(fù)載的自體DC疫苗，治療表達(dá)CEA的轉(zhuǎn)移性肺腺癌患者取得了令人滿(mǎn)意的前期效果。

2.2 肺癌細(xì)胞疫苗

肺癌的抗原性弱，如果將MHC分子共刺激信號(hào)B7分子細(xì)胞因子導(dǎo)入腫瘤細(xì)胞，這種基因修飾的腫瘤細(xì)胞疫苗則可增強(qiáng)腫瘤細(xì)胞的免疫原性及其與效應(yīng)細(xì)胞的相互作用。將TAP-1基因轉(zhuǎn)入小細(xì)胞癌，可恢復(fù)肺癌細(xì)胞HLA-I類(lèi)分子的表達(dá)，使其在小鼠體內(nèi)的生長(zhǎng)減慢，轉(zhuǎn)移率顯著降低；將B7-1導(dǎo)入肺癌細(xì)胞系中，結(jié)果自體淋巴細(xì)胞增殖能力提高，且轉(zhuǎn)染了B7-1的腫瘤細(xì)胞可引出特異性CTL克隆。轉(zhuǎn)染B7-2同樣也能有效誘發(fā)抗腫瘤免疫反應(yīng)。將細(xì)胞因子IL-2等因子轉(zhuǎn)入腫瘤細(xì)胞，也取得了一定的治療效果。喻憬瑞等[10]應(yīng)用腺病毒為載體構(gòu)建DC-Ad-KiRas肺癌疫苗，能明顯刺激T細(xì)胞增殖及提示CTL的殺傷作用。

2.3 抗體疫苗

用針對(duì)CD3的單克隆抗體R24免疫同系小鼠而獲得的抗獨(dú)特型單克隆抗體BEG-2，能在人體中誘導(dǎo)產(chǎn)生抗CD3的抗體。Grant等報(bào)告15例接受了標(biāo)準(zhǔn)治療的SCLC患者聯(lián)合應(yīng)用BEC-2和BCG皮內(nèi)注射，極大地提高了中位無(wú)復(fù)發(fā)生存期(廣泛期11個(gè)月，局限期47個(gè)月)。副作用僅包括發(fā)熱及不適等輕度毒性。

3 基因治療

目前主要的研究熱點(diǎn)為應(yīng)用新的目的基因修飾DC，構(gòu)建靶向性轉(zhuǎn)染DC的新型載體，基因修飾結(jié)合其他方法以提高DC疫苗激活的效率，增強(qiáng)機(jī)體的抗腫瘤免疫反應(yīng)。將腫瘤相關(guān)抗原基因TAA導(dǎo)入DC內(nèi)，使DC持續(xù)表達(dá)TAA并將TAA與MHC分子結(jié)合表達(dá)于細(xì)胞表面，從而有效激活T細(xì)胞，提高DC的抗腫瘤能力。另外將細(xì)胞因子導(dǎo)入DC，如將IL-12，IL-7，IFN-γ等細(xì)胞因子導(dǎo)入DC，結(jié)果表明經(jīng)修飾后的DC增殖能力明顯增強(qiáng)，并可產(chǎn)生更強(qiáng)烈免疫反應(yīng)[11]。

以p53為靶點(diǎn)的腫瘤基因治療臨床前研究表明，腺病毒轉(zhuǎn)染p53基因，能抑制小鼠腫瘤生長(zhǎng)，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡，與化療藥物順鉑合用能增加療效，而且不影響成纖維細(xì)胞的生長(zhǎng)。在肺癌和頭頸部腫瘤有抗瘤活性。Weill[12]對(duì)12例氣道堵塞而無(wú)法手術(shù)的肺癌患者，進(jìn)行支氣管鏡下瘤內(nèi)注射rAd-p53，每次劑量為1×106～1×109pfu，28天注射1次，6例患者氣道堵塞的癥狀緩解，3例患者的腫瘤達(dá)到部分緩解。但rAd-p53，也存在一些療效欠佳的報(bào)道，臨床實(shí)驗(yàn)結(jié)果難以令人滿(mǎn)意[13]，究其原因可能與p53基因不能在靶細(xì)胞內(nèi)足量表達(dá)有關(guān)[14]。在癌細(xì)胞內(nèi)選擇性復(fù)制的溶瘤病毒可能是解決上述問(wèn)題的途徑之一。H101是重組人類(lèi)-5型腺病毒，2006年獲SFDA批準(zhǔn)在我國(guó)上市，其選擇性地在p53功能缺失的細(xì)胞內(nèi)復(fù)制，從而發(fā)揮溶瘤作用。

4 結(jié)語(yǔ)

腫瘤的生物治療雖然才經(jīng)過(guò)短短30 年的發(fā)展，但是已經(jīng)取得了矚目的成就，由于其具有傳統(tǒng)的治療方式如手術(shù)和放化療所無(wú)法比擬的優(yōu)越性，隨著分子生物學(xué)、生物工程、免疫學(xué)等基礎(chǔ)理論的發(fā)展，生物治療終將成為腫瘤治療的主要手段，為肺癌乃至其他所有腫瘤患者帶來(lái)福音。

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