王涵，趙雨，張梅，楊士慧，張鑫

（長春中醫(yī)藥大學中醫(yī)藥與生物工程研發(fā)中心，吉林 長春 130117）

哈蟆油降血脂、耐缺氧和抗疲勞的功能研究

王涵，趙雨*，張梅，楊士慧，張鑫

（長春中醫(yī)藥大學中醫(yī)藥與生物工程研發(fā)中心，吉林 長春 130117）

研究哈蟆油降血脂、耐缺氧和抗疲勞功能。運用酶法測大鼠血清總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）含量；觀察小鼠常壓耐缺氧存活時間及負重游泳時間，測定小鼠血乳酸含量。結(jié)果顯示哈蟆油能顯著降低大鼠TC和TG的含量；顯著延長小鼠常壓缺氧存活時間及負重游泳時間，顯著降低其血乳酸含量。說明哈蟆油具有輔助降血脂、抗疲勞和耐缺氧功能。

哈蟆油；降血脂；耐缺氧；抗疲勞

中國林蛙（Rana temporaria chensinensis David），又稱哈什蟆，屬兩棲綱無尾目蛙科蛙屬，為國家二級保護動物，主要分布于我國東北地區(qū)。其雌性的輸卵管被稱為哈蟆油（Oviductus Ranae），俗稱哈什蟆油[1-2]。據(jù)《中國藥典》（2005年版）Ⅰ部收載，具有補腎益精、潤肺養(yǎng)陰的功效，用于治療陰虛體弱、神疲乏力、心悸失眠、盜汗不止、癆嗽咳血等癥[3]。高血脂患者往往從血液中總膽固醇、甘油三酯及高密度脂蛋白膽固醇含量來判斷：缺氧對機體是一種緊張性刺激，影響機體各種代謝，特別是影響機體的氧化供能，最終會導致機體的心、腦等重要器官缺氧或損傷，引起氧供應(yīng)能力不足而導致死亡[4]；通常運動引起肌肉及體液內(nèi)乳酸的增加是肌肉產(chǎn)生疲勞的主要原因，也是影響肌肉活動能力的重要因素[5]，本文從以上三個方面對哈蟆油降血脂、耐缺氧及抗疲勞的功能進行了研究。目前的研究[6-7]主要是針對哈蟆油的復(fù)方及不同劑型的產(chǎn)品。為更好地開發(fā)和利用哈蟆油，使之更有效地應(yīng)用于臨床，本研究為哈蟆油藥理作用研究及產(chǎn)品開發(fā)提供了理論參考。

1 材料

1.1 藥材與試劑

哈蟆油購自于吉林省白山市北亞藥業(yè)，經(jīng)長春中醫(yī)藥大學中藥鑒定教研室姜大成教授鑒定為中國林蛙（Rana temporaria chensinensis David）雌蛙的干燥輸卵管；血清總膽固醇（TC）試劑盒、甘油三酯（TG）試劑盒、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）試劑盒：上海科欣生物技術(shù)研究所。

1.2 試驗動物

SPF級BALB/C種雄性小鼠120只，體重為（20±2）g，Wistar雄性大鼠 60 只，體重為（180±20）g，購于吉林大學實驗動物中心。

2 方法

2.1 哈蟆油輔助降血脂試驗

2.1.1 大鼠分組與給藥

大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)觀察5 d，取尾靜脈血測定TC、TG和HDL-C等各項血脂指標。根據(jù)TC水平，采用隨機抽樣方法將大鼠分為5組，每組12只，并適當調(diào)整使各組大鼠的TG、HDL-C及初始體重盡可能均衡。設(shè)低、中、高3個劑量的試驗組，劑量分別為0.05、0.1、0.2 g/kg，另設(shè)一個基礎(chǔ)飼料對照組（基礎(chǔ)對照）和一個高脂模型對照組（高脂對照）。開始試驗后，基礎(chǔ)飼料對照組給予合成鼠料，高脂組給予高脂飼料，各劑量組在給予高脂飼料的同時給予受試藥物。每周稱重一次，并根據(jù)體重調(diào)整給藥量。灌胃給藥，每天1次，連續(xù)給藥30 d。

2.1.2 測定指標

依據(jù)衛(wèi)生部《保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范》2003版[6]，采用脂代謝紊亂模型法－預(yù)防性給受試樣品，試驗至第30天摘眼球取血，采用酶聯(lián)法測定血清總膽固醇（TC）、甘油三酯（TG）和高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）含量，采血前動物禁食16 h，記錄試驗數(shù)據(jù)并進行方差分析。

2.2 哈蟆油常壓耐缺氧和抗疲勞試驗

2.2.1 小鼠分組與給藥

小鼠120只，隨機分為3大組，分別用于耐缺氧試驗和負重游泳試驗及血乳酸試驗。每大組分為4小組（n=10），即低劑量組（0.25 g/kg）、中劑量組（0.50 g/kg）、高劑量組（1.0 g/kg）和空白對照組，空白對照組給予等體積蒸餾水。灌胃給藥，每天1次，連續(xù)給藥30 d。每6天稱體重1次，根據(jù)體重調(diào)整給藥量。

2.2.2 哈蟆油常壓耐缺氧試驗

末次給藥1 h后，將各組小鼠逐只放入盛有5 g鈉石灰的250 mL磨口瓶內(nèi)，每瓶1只，加蓋，以凡士林密封瓶口，旋緊密封，立即計時，以呼吸停止時間為指標，觀察小鼠因缺氧而死亡時間，記錄試驗數(shù)據(jù)并進行方差分析。

2.2.3 哈蟆油對小鼠抗疲勞試驗

2.2.3.1 負重游泳試驗

末次灌胃給藥30 min后開始試驗，于小鼠尾部加上相當于5%體重的鉛絲，放在水溫（25±1）℃，水深30 cm，池壁光滑的水池中。計錄小鼠自游泳開始至死亡的時間，即小鼠負重游泳時間，記錄試驗數(shù)據(jù)并進行方差分析。

2.2.3.2 小鼠運動后血液疲勞代謝血乳酸指標的測定

末次灌胃給藥30min后，放入游泳箱中游泳10min后取出，休息20 min，從內(nèi)眥靜脈叢采血20 μL，測定血清中血乳酸（BLA）指標[6]，記錄試驗數(shù)據(jù)并進行方差分析。

3 結(jié)果

3.1 哈蟆油對大鼠體重及TC、TG、HDL-C含量的影響

哈蟆油對大鼠體重及TC、TG、HDL-C含量的影響，見表1。由表1可見，大鼠在試驗前的體重和血脂相關(guān)的各項指標基本平衡，在統(tǒng)計學上沒有顯著性差異（P<0.05）。試驗至第30天，高脂對照組TC、TG含量均高于基礎(chǔ)對照組，且差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），表明高脂模型建模成功。

表1 哈蟆油對大鼠體重及TC、TG、HDL-C含量的影響（n=12Table 1 Effects of Oviductus Ranae on mice body weight TC,TG,HDL-C content（n=12,

表1 哈蟆油對大鼠體重及TC、TG、HDL-C含量的影響（n=12Table 1 Effects of Oviductus Ranae on mice body weight TC,TG,HDL-C content（n=12,

注：*與高脂模型組相比P<0.05；#與基礎(chǔ)對照組相比P<0.05；表示差異顯著。

大鼠體重在試驗后與高脂組比較無顯著性差異。各劑量組實驗后TC、TG含量與高脂組比較均明顯降低，且具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。表明哈蟆油具有輔助降血脂的作用。

3.2 哈蟆油對小鼠常壓耐缺氧存活時間的影響

哈蟆油對小鼠常壓耐缺氧存活時間的影響，見表2。

表2 哈蟆油對小鼠常壓耐缺氧存活時間的影響（x±s）Table 2 Effects of Oviductus Ranae on mice atmospheric antianoxia survival time

表2 哈蟆油對小鼠常壓耐缺氧存活時間的影響（x±s）Table 2 Effects of Oviductus Ranae on mice atmospheric antianoxia survival time

注：*與對照組相比P＜0.05，表示差異顯著；**與對照組相比P<0.01，表示差異非常著性。

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由表2可見，哈蟆油各劑量組小鼠常壓耐缺氧存活時間比對照組明顯延長，且低劑量組差異顯著（P＜0.05），中、高劑量組差異非常顯著（P<0.01）。表明哈蟆油具有提高小鼠心腦耐缺氧能力。

3.3 哈蟆油對小鼠負重游泳時間及血乳酸含量的影響

哈蟆油對小鼠負重游泳時間及血乳酸含量的影響，見表3。

表3 哈蟆油對小鼠負重游泳時間及血乳酸含量的影響（n=10Table 3 Effect of Oviductus Ranae on swimming time on burdened mice,and the content of blood lactate of the mice(n=15

表3 哈蟆油對小鼠負重游泳時間及血乳酸含量的影響（n=10Table 3 Effect of Oviductus Ranae on swimming time on burdened mice,and the content of blood lactate of the mice(n=15

注：*與對照組相比P<0.05，表示差異顯著。

組別劑量/（g/kg）負重游泳時間/min全血LAC含量/(mmol/L)對照組 — 5.30±1.2 1.25±0.37低劑量組 0.25 29.8±2.3* 0.93±0.28*中劑量組 0.5 9.8±2.8 0.86±0.39*高劑量組 1.0 9.8±2.6 0.85±0.31*

由表3可見，各劑量組與對照組比較均能延長小鼠負重游泳時間，且低劑量組具有顯著性差異（P＜0.05）。各劑量組比對照組比較均能降低小鼠血乳酸含量，且具有顯著性差異（P＜0.05）。表明哈蟆油具有提高機體耐受能力及抗疲勞作用。

4 結(jié)論與討論

本研究表明哈蟆油能量顯著降低大鼠TC和TG的含量；各劑量組均能顯著延長小鼠常所壓缺氧存活時間；低劑量組可延長小鼠負重游泳時間；各劑量組均能降低其血乳酸含量。

實驗結(jié)果表明了哈蟆油可以降低由于高脂膳食所致的血清總膽固醇和甘油三酯含量升高，證明哈蟆油具有輔助降血脂功能。常壓耐缺氧實驗表明哈蟆油能顯著延長小鼠在密閉缺氧條件下的存活時間，這說明哈蟆油能增強小鼠心肌功能和氧得用率，增強機體在缺氧條件下的應(yīng)激能力。負重游泳實驗表明低劑量組哈蟆油的小鼠能顯著延長游泳時間。各劑量組小鼠游泳后20 min其血液中乳酸含量均比對照組降低，證明哈蟆油能提高機體抗疲勞能力。綜上所述，本研究表明哈蟆油具有輔助降血脂、抗疲勞及提高機體耐缺氧能力作用，本實驗結(jié)果為進一步深入開發(fā)哈蟆油保健品提供了理論依據(jù)。

[1]張穎才.哈什蟆油[J].中藥通報,1956,2(5):205-207

[2]中國醫(yī)學科學院藥物研究所.中藥志[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1961:513

[3]國家藥典委員會.中國藥典,Ⅰ部[S].北京:化學工業(yè)出版社,2005:179

[4]毛煥新,尤秀新,程光惠,等.林蛙油軟膠囊抗疲勞作用的試驗研究[J].華南預(yù)防醫(yī)學,2005,31(6):40-41

[5]王高學,姚嘉斌.哈士蟆油復(fù)方抗疲勞作用研究[J].中草藥,2008,30(1):120-122

[6]中華人民共和國衛(wèi)生部.保健食品檢驗與評價技術(shù)規(guī)范[S].2003:36-39

[7]程敏,葉小弟,繆云萍,等.注射用舒血寧對小鼠耐缺氧能力的影響[J].中國實驗方劑學雜志,2009(6):89-90

[8]孫冬菊,黃德苓,張兆強,等.無花果水提取物對小鼠抗疲勞、耐缺氧作用的實驗研究[J].職業(yè)與健康,2007,23(13):1105-1106

[9]李軍,金圣煊,雷榮劍,等.今幸膠囊抗疲勞作用的實驗研究[J].中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學雜志,2009,26(4):273-276

Effect of Oviductus Ranae on Reducing Serum Lipid and Ability of Anti-Anoxia and Anti-Fatigue

WANG Han,ZHAOYu*,ZHANG Mei,YANG Shi-hui,ZHANG Xin
（Center for New Medicine Research of Changchun University of Traditional Chinese Medicine,Changchun 130117,Jilin,China）

Study the effect of Oviductus Ranae on reducing serum lipid and ability of anti-anoxia and antifatigue.Enzymatic detection of serum total cholesterol(TC),triglyceride(TG),high density lipoprotein cholesterol(HDL-C).The mice in each group was observed atmospheric anti-anoxia survival time and loaded swimming time,determined blood lactic acid.Oviductus Ranae can significantly reduce TC and TG levels in rats,and significantly increase in mice atmospheric anti-anoxia survival time and loaded swimming time and significantly decrease the increase in serum lactate.Oviductus Ranae have the function of reducing serum lipid and antianoxia and anti-fatigue.

Oviductus Ranae;reducing serum lipid;anti-anoxia;anti-fatigue

*通信作者：趙雨，研究員，從事蛋白組學研究工作。

國家“十一五”科技支撐項目（2007BAI38B06）

王涵（1985—），女（漢），碩士研究生，主要從事中藥有效成分與應(yīng)用開發(fā)研究的工作。

2011-12-06