曹 婕，高潤娣，李和權(quán)，周建英

(浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院呼吸內(nèi)科，浙江杭州 31003)

最近，我們建立了一種在頭戴式放大鏡直視下進(jìn)行的小鼠氣管插管的方法。本文擬簡要描述該方法的操作要點和過程，以期與廣大同道共同學(xué)習(xí)、分享和探討。

1 材料與方法

1.1 動物 NIH小鼠30只，♂，年齡6～8周，體質(zhì)量(23±2)g，購自浙江大學(xué)動物中心，本院實驗動物中心飼養(yǎng)，環(huán)境溫度25℃，濕度70%。

1.2 材料 0.04 mol·L－1戊巴比妥鈉溶液、美藍(lán)、頭戴式放大鏡、冷光源射燈、24號靜脈留置針(BD公司)以及自行制作的小鼠固定及口腔撐開裝置。如Fig 1所示。

1.3 方法

1.3.1 小鼠氣管插管的制作 取24號靜脈留置針，用銼刀磨掉金屬針芯的針頭(以免插管時損傷氣管)并將其適當(dāng)彎曲，即可用作小鼠氣管插管。

1.3.2 在頭戴式放大鏡下施行小鼠氣管插管 按50 mg·kg－1的劑量腹腔注射0.04 mol·L－1戊巴比妥鈉溶液，5～7 min后觀察夾趾反射，如陽性則追加10% ～20%初始劑量。如Fig 2所示，仰臥位固定小鼠并使其頸部盡量后仰伸展，依靠鉤住小鼠門齒的橡皮筋打開上、下頜，并以帶橡皮筋的小鐵鉤將小鼠口腔左右兩側(cè)拉開。操作者佩戴頭戴式放大鏡，左手持直頭鑷牽拉小鼠舌頭，右手按壓小鼠胸廓以充分暴露聲門(Fig 3)。透過頭戴式放大鏡，操作者可清晰地觀察到小鼠的聲門隨呼吸而開啟、閉合。在小鼠吸氣的瞬間，操作者迅速將自制的氣管插管插入氣道約3 cm，之后，退出針芯并用膠帶將套管固定。

Fig 1 The main instruments used for endotracheal intubation of mice

Fig 2 The body position and the oral distraction method of mouse during endotracheal intubation

Fig 3 Intubating the trachea of mouse under direct vision through head-wearing kind magnifying glass

2 結(jié)果

2.1 氣管插管成功率

2.1.1 插管成功的標(biāo)準(zhǔn) 若插管成功:可見置于氣管插管管口的細(xì)棉絲可受小鼠呼吸氣流的影響而飄動;封堵管口30 s左右小鼠即出現(xiàn)躁動、口唇紫紺等缺氧表現(xiàn);將0.5 ml美藍(lán)經(jīng)套管注射，處死小鼠后解剖可見藍(lán)色物質(zhì)浸染氣管和肺部。

2.1.2 結(jié)果 根據(jù)上述方法判斷，所有小鼠插管均成功;小鼠處死后解剖可見氣管下端至肺部均有藍(lán)色物質(zhì)均勻浸染，見Fig 4。

Fig 4 The picture of trachea and lungs after injection with methylene blue through catheter

2.2 并發(fā)癥的發(fā)生情況 所有小鼠在插管過程中均未出現(xiàn)呼吸急促、口唇紫紺等征象，解剖后檢查也未見氣管損傷、肺部出血等情況。B組小鼠經(jīng)多次插管操作仍能健康生長，與C組比較未發(fā)現(xiàn)生長遲緩、體重明顯減低等情況。

3 討論

在開展肺部疾病藥理學(xué)研究時，常常因為制備動物模型、測定氣道壓力以及氣道給藥等各種需要而施行氣管插管術(shù)。小鼠是最常用的醫(yī)學(xué)實驗動物，但很難通過口腔直視氣管的開口［1］，而盲插法易誤入食管。因此，大部分研究者采用手術(shù)暴露頸部氣管的方式［1－2］。這種方法雖然直觀、易操作，但損傷較大，難以重復(fù)。

近年來，國內(nèi)外均有非手術(shù)小鼠氣管插管方法的報道，如自制喉鏡檢查片引導(dǎo)下氣管插管法［3－4］以及關(guān)節(jié)鏡下氣管插管法等［5－6］。我們也曾報道在體視顯微鏡下施行小鼠氣管插管［7］，該方法成功率高，重復(fù)性好，但其操作費時(約15 min)、需要較長時間(2～3周)的技能學(xué)習(xí)。因此，我們對該法進(jìn)行了改良，主要包括:(1)術(shù)時小鼠采用仰臥位更易于固定以及小鼠聲門的觀察。(2)利用橡皮筋的彈性從上、下、左、右4個方向撐開小鼠的口腔以充分暴露聲門。(3)改用頭戴式放大鏡，術(shù)者在操作過程中能自行調(diào)整其附帶光源的照射角度，利于充分、快速地看清聲門位置和運動。

綜上所述，在頭戴式放大鏡直視下進(jìn)行的小鼠氣管插管的方法操作簡單、易學(xué)、可重復(fù)性強，值得推廣應(yīng)用。

［1］劉利輝，葉玲玉，譚淵明，等.一種簡捷可靠的小鼠氣管插管新方法［J］.中國醫(yī)師雜志，2006，8(8):1019－20.

［1］Liu L H，Ye L Y，Tan Y M，et al.A novel method for easy and reliable endotracheal intubation in the mouse［J］.J Chin Physician，2006，8(8):1019－20.

［2］趙曉輝，吳 楠，周 健，等.PTCA導(dǎo)絲逆行引導(dǎo)小鼠氣管插管術(shù)［J］.中國比較學(xué)雜志，2006，16(6):365－6.

［2］Zhao X H，Wu N，Zhou J，et al.PTCA wire-assisted retrograde endotracheal intubation in mice［J］.Chin J Comparative Med，2006，16(6):365－6.

［3］Brown R H，Walters D M，Greenberg R S，Mitzner W.A method of endotracheal intubation and pulmonary functional assessment for repeated studies in mice［J］.J Appl Physiol，1999，87(6):2362－5.

［4］Spoelstra E N，Ince C，Koeman A，et al.A novel and simple method for endotracheal intubation of mice［J］.Lab Anim，2007，41(1):128－35.

［5］Vergari A，Polito A，Musumeci M，et al.Video-assisted orotracheal intubation in mice［J］.Lab Anim，2003，37(3):204－6.

［6］Vergari A，Gunnella B，Rodolà F，et al.A new method of orotraeheal intubation in mice［J］.Eur Rev Med Pharrnacol Sci，2004，8(3):103－6.

［7］吳 月，王 碩，王 晴，等.在體視鏡下施行無創(chuàng)傷性小鼠氣管插管方法的建立［J］.中國病理生理雜志，2009，25(8):1662－4.

［7］Wu Y，Wang S，Wang Q，et al.A stereoscopic non-invasive method for endotracheal intubation of mice［J］.Chin J Pathophysiol，2009，25(8):1662－4.