孫 麗，甘我挺，韓 欣，凌 霜，許錦文

(上海中醫(yī)藥大學(xué)穆拉德中藥現(xiàn)代化研究中心，上海 201203)

蛋白酪氨酸激酶(PTKs)是一組能催化底物蛋白酪氨酸殘基磷酸化的酶蛋白，參與許多信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。脾酪氨酸激酶(Syk)是一種非受體型蛋白酪氨酸激酶，在多種細(xì)胞中表達(dá)，主要是血液細(xì)胞、血小板，其他如血管內(nèi)皮細(xì)胞、血管平滑肌細(xì)胞、肝細(xì)胞等。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，Syk與血管內(nèi)皮功能之間有重要聯(lián)系，Syk對心血管疾病的發(fā)病及炎癥反應(yīng)過程具有重要意義，尤其與動(dòng)脈粥樣硬化(AS)的發(fā)病密切相關(guān)。同時(shí)，在研究中出現(xiàn)了越來越多的靶向于 Syk的藥物，對Syk的研究也越來越深入。Syk很可能是抗動(dòng)脈粥樣硬化潛在的靶點(diǎn)，針對Syk的藥物研發(fā)將是治療AS藥物發(fā)展的新方向之一。本文就Syk在動(dòng)脈粥樣硬化中的作用及其可能機(jī)制進(jìn)行探討，并對其相關(guān)藥物研究進(jìn)展進(jìn)行綜述。

1 Syk

Syk是一種非受體型蛋白酪氨酸激酶，在多種細(xì)胞中表達(dá)。Syk其編碼基因?yàn)閟yk，位于人類染色體9q22，Syk mRNA全長2672 bp，含1個(gè)內(nèi)含子和2個(gè)外顯子。syk基因由Taniguchi等于1991年從豬脾cDNA克隆出來，其編碼蛋白是一種非受體型酪氨酸激酶，故被命名為脾酪氨酸激酶。Syk包含629個(gè)氨基酸殘基，分子量為72 ku，含有2個(gè)串聯(lián)的SH2結(jié)構(gòu)域及1個(gè)酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域SH1。Syk通過SH2區(qū)域與依賴?yán)野彼岬拿庖呤荏w活化基序(ITAM)結(jié)合而活化。

Syk家族還有一種含量較少的、自然存在的亞型SykB，它比Syk少SH2結(jié)構(gòu)域和激酶結(jié)構(gòu)域之間的23個(gè)氨基酸殘基(Insert)。ZAP-70蛋白為Syk家族另一成員，僅表達(dá)于T細(xì)胞和自然殺傷細(xì)胞，其結(jié)構(gòu)中亦不含上述Insert。SykB在功能上更接近于ZAP-70。

Syk的細(xì)胞生物學(xué)功能主要包括:①抑制細(xì)胞的分裂與增殖;②對細(xì)胞遷移起重要作用;③影響某些細(xì)胞因子的分泌;④抑制腫瘤細(xì)胞的成瘤能力;⑤對細(xì)胞分化也有一定影響。Syk作為免疫受體的關(guān)鍵介質(zhì)在炎性細(xì)胞中表達(dá)，與過敏性和抗體介導(dǎo)的自身免疫性疾病密切相關(guān)，Syk現(xiàn)已被作為潛在的慢性炎癥性疾病如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、哮喘、B淋巴瘤的治療靶點(diǎn)，新近的研究表明Syk在動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)生、發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用，很可能是治療動(dòng)脈粥樣硬化的新靶點(diǎn)。

2 Syk與動(dòng)脈粥樣硬化

Hilgendorf等［1］的最新研究認(rèn)為抑制 Syk可降低AS的炎癥過程，并降低斑塊的發(fā)展。低密度脂蛋白受體缺陷小鼠進(jìn)食高膽固醇的飲食，輔以Syk抑制劑fostamatinib 16周，結(jié)果動(dòng)脈粥樣硬化病變的大小與各自的對照組相比呈劑量依賴性減少到(59±6)%，同時(shí)fostamatinib治療的動(dòng)物的病變中含較少的巨噬細(xì)胞，由此提示，Syk抑制將作為一個(gè)潛在的、卓有成效的抗動(dòng)脈粥樣硬化的治療策略。

2.1 Syk與氧化低密度脂蛋白 氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)是動(dòng)脈粥樣硬化病變炎癥反應(yīng)中的重要決定因素，ox-LDL促使巨噬細(xì)胞吞噬大量脂質(zhì)而成為泡沫細(xì)胞，并且由泡沫細(xì)胞累積而成的脂質(zhì)核心認(rèn)為是粥樣斑塊的主要成分［2］。Bae等［3］研究發(fā)現(xiàn)弱氧化修飾低密度脂蛋白(mmLDL)可誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)活性氧的產(chǎn)生，此過程是通過 TLR4、Syk、PKC及gp91phox/Nox2等通路實(shí)現(xiàn)的，并誘導(dǎo)促炎細(xì)胞因子的表達(dá)。Miller［4］等認(rèn)為mmLDL參與TLR4的激活，導(dǎo)致Syk的募集反應(yīng)和下游信號的激活，造成細(xì)胞骨架的重排和巨胞飲，而Syk依賴性的巨胞飲會導(dǎo)致過多的脂質(zhì)沉積即泡沫細(xì)胞形成。由此可得出，Syk與泡沫細(xì)胞的形成密切相關(guān)，參與動(dòng)脈粥樣硬化的形成。

2.2 Syk與C-反應(yīng)蛋白 C-反應(yīng)蛋白(CRP)是動(dòng)脈粥樣硬化中炎癥的敏感指標(biāo)之一，近年發(fā)現(xiàn) CRP自身直接參與動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)展過程，CRP刺激HUVEC和HCAEC的細(xì)胞間黏附分子-l(ICAM-l)、血管細(xì)胞黏附分子-l(VCAM-l)和 E-選擇素(E-selectin)的表達(dá)［5］。另外，Xu 等［6］研究發(fā)現(xiàn)，重組CRP經(jīng)由其受體CD64激活Syk，減弱胰島素在血管內(nèi)皮中的信號傳遞作用，抑制eNOS活性，從而抑制胰島素誘導(dǎo)產(chǎn)生的NO，成為影響血管穩(wěn)態(tài)的重要因素之一。CRP與血管內(nèi)皮細(xì)胞上的受體FcγRI(CD64)和FcγRⅡa(CD32)結(jié)合，激活受體上的ITAM上的酪氨酸磷酸化，進(jìn)而激活Syk和其他下游信號傳導(dǎo)，上調(diào)IL-8的釋放以及促使內(nèi)皮細(xì)胞分泌多種炎癥因子等［7］。

2.3 Syk與NF-κB的激活 在動(dòng)脈粥樣硬化形成過程中，血管壁的炎癥為其主要特征，而NF-κB參與炎癥過程中的多種信號傳導(dǎo)途徑，并且在動(dòng)脈粥樣硬化晚期參與平滑肌細(xì)胞增殖的生長因子亦可有NF-κB調(diào)控，因而認(rèn)為NF-κB的激活是動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展的始動(dòng)機(jī)制之一［8］。Brand利用新型的鼠抗體α-p65mAb首次證實(shí)了人動(dòng)脈粥樣硬化組織中有NF-κB的激活，并提出動(dòng)脈粥樣硬化可能是NF-κB介導(dǎo)的慢性炎癥過程。Bijlik等［9］研究認(rèn)為凝血酶作用血管內(nèi)皮細(xì)胞后PKCδ激活Syk，再活化下游的NF-κB，并上調(diào)內(nèi)皮細(xì)胞ICAM-1的表達(dá)。這提示Syk作為NF-κB的上游信號，對動(dòng)脈粥樣硬化的發(fā)展過程具有重要作用。

2.4 Syk與血小板活化及炎癥小體的激活 血小板在止血和血栓形成中發(fā)揮重要作用，血小板活化與粥樣硬化形成、血栓形成、心肌梗死和中風(fēng)有著密切的聯(lián)系。膠原的血小板結(jié)合會導(dǎo)致GPVI的聚集，促成Syk的磷酸化和被激活，繼而發(fā)生跨膜銜接蛋白LAT的磷酸化，引發(fā)許多信號蛋白的聚集［10］。

Tab 1 Small molecule inhibitors of Spleen tyrosine kinase

炎癥小體(inflammasome)是細(xì)胞內(nèi)由多種蛋白寡聚形成的一個(gè)能激活半胱氨酸蛋白酶caspase-1的多分子復(fù)合物。當(dāng)炎癥小體形成時(shí)，招募并活化caspase-1，促使對IL-1β、IL-18等細(xì)胞因子的加工與成熟化。研究表明，多種病原體，比如白色念珠菌，通過Syk激活NLRP3(NOD-like receptor containing pyrin domain 3 ，NLRP3)炎癥小體［11］。Duewell等［12］對喂養(yǎng)高膽固醇飼料、易患動(dòng)脈粥樣硬化癥的ApoE-/-小鼠所做一項(xiàng)研究表明，膽固醇晶體會出現(xiàn)在動(dòng)脈粥樣硬化的最早階段，而且這些晶體能激發(fā)吞噬細(xì)胞的NLRP3炎癥小體。這表明以Syk為靶點(diǎn)阻斷炎癥小體途徑的策略可能是一個(gè)抗動(dòng)脈粥樣硬化治療的新方法。

3 小分子Syk抑制劑

Syk是一種非受體型酪氨酸激酶，存在于許多細(xì)胞中，主要與炎癥過程有關(guān)。近年來研究開發(fā)了許多 Syk抑制劑，部分已進(jìn)入臨床試驗(yàn)研究，但大多是用于治療哮喘、風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等免疫性疾病，用于心血管疾病治療的還較少。Tab 1的幾個(gè)化合物顯示了作用于Syk的基本骨架結(jié)構(gòu)。

3.1 Rigel公司的系列化合物 R112、R406、R788 美國 Rigel公司新發(fā)現(xiàn)一類口服靶向Syk激酶抑制劑，對淋巴瘤、白血病及炎癥性疾病如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)等具有潛在的作用。Weinblatt等［13］報(bào)道了針對Syk的新型激酶抑制劑治療RA的療效和副作用。在嚙齒類膠原誘發(fā)性關(guān)節(jié)炎模型中，R788(fostamatinib disodium)，一種口服前藥，迅速轉(zhuǎn)化為一種有效的、選擇性強(qiáng)的Syk抑制劑(R406)有較強(qiáng)抗炎活性。另外，Rigel公司新的鼻內(nèi)Syk抑制劑R112是一種有效的過敏性鼻炎替代治療藥。R112通過抑制Syk激酶阻斷了肥大細(xì)胞對過敏性刺激原的反應(yīng)［14］。

3.2 伊馬替尼(格列衛(wèi)) 這是新的一系列化合物中的第1個(gè)通過抑制Syk而不是非特異性抑制快速分化細(xì)胞發(fā)揮作用的化合物。伊馬替尼是一種新型的抗慢性粒細(xì)胞白血病(CML)藥物，此外，伊馬替尼也用于治療不能切除和(或)發(fā)生轉(zhuǎn)移的惡性胃腸道間質(zhì)瘤(GIST)的患者，成為公認(rèn)的GISTs一線治療藥物。

3.3 Bayer 公司的 BAY61-3606 BAY61-3606［15］是 ATP 競爭性抑制劑，通過阻斷Syk的催化活性起作用。開始用于治療哮喘，現(xiàn)在正在開展治療慢性白血病的研究［16］。

4 中藥有效成分中Syk激酶抑制劑的篩選

心血管疾病的主要病理基礎(chǔ)是動(dòng)脈粥樣硬化(AS)，從中草藥中尋找防治AS的有效藥物一直是人們關(guān)注的課題。研究發(fā)現(xiàn)，中藥中的一些白藜蘆醇類似物如Piceatannol、紫檀茋等可發(fā)揮針對Syk的抑制作用，具有抗炎、保護(hù)心血管的作用，其他的一些中藥成分也具有類似作用，這為抗AS藥物的開發(fā)提供了新的方向。

4.1 Syk 的特異性抑制劑-Piceatannol 3，3'，4，5'-四羥基反式二苯乙烯(Piceatannol)是Syk的特異性抑制劑，Piceatannol又被稱為白皮杉醇、云杉鞣酚、3'-羥基白藜蘆醇等，是一種在葡萄、大黃蘚、大黃和甘蔗等中發(fā)現(xiàn)的多酚物質(zhì)，該多酚化合物最早從大戟屬植物L(fēng)agascae種子中分離得到。研究證實(shí)白皮杉醇具有多種生物活性，是一種具有抗白血病活性的植物代謝藥，并可抑制非受體激活酶、脾酪氨酸激酶以及淋巴細(xì)胞特異性蛋白質(zhì)酪氨酸激酶。

白皮杉醇是白藜蘆醇的3'羥基化類似物。白皮杉醇除了作為潛在的SIRTl激動(dòng)劑［17］，也具有抗癌、防癌、抗細(xì)胞增殖、抗炎、免疫調(diào)節(jié)、抗脂質(zhì)氧化、抗菌和抑制胃中H+-K+-ATP酶等［18-20］多種藥理活性。

4.2 紫檀茋 紫檀茋(pterostilhene)和白藜蘆醇同屬芪類化合物，是白藜蘆醇的3，5-二甲基衍生物。它廣泛存在于廣西血竭、葡萄和蜂膠中，具有抗氧化、抗癌、降血糖、降血脂、中等強(qiáng)度抑制 COX-1和COX-2和抗真菌等作用。Mizuno等［21］報(bào)道其對PPARa有激動(dòng)作用，并能降低動(dòng)物的膽固醇含量。

4.3 其他 近年來的研究顯示，發(fā)現(xiàn)多種中藥成分對Syk具有抑制作用。Chiou等［22］發(fā)現(xiàn)補(bǔ)骨脂定(Psoralidin)通過抑制Syk從而抑制LPS誘導(dǎo)的iNOS的表達(dá)。槲皮素下調(diào)Syk的活性［23］，大黃素抑制 Syk 的磷酸化［24］，魚腥草水提物［25］及番石榴的乙酸乙酯提取物［26］可抑制抗原誘導(dǎo)的Syk的磷酸化，赤豆(Phaseolvs angularis)的乙醇提取物阻斷上游信號分子Syk的活性發(fā)揮抗炎作用［27］，花楸屬植物Sorbus commixta的水提物抑制 Src和Syk的活性及其磷酸化水平［28］。

中藥中篩選出的Syk抑制劑在抗血栓、抗動(dòng)脈粥樣硬化、抗炎等方面發(fā)揮重要作用，盡管這些Syk的抑制劑尚缺乏確切的臨床證據(jù)，但作為有抗動(dòng)脈粥樣硬化及抗腫瘤作用的天然活性物質(zhì)，仍具有重要的研究價(jià)值和廣泛的應(yīng)用前景。

5 問題與展望

綜上所述，Syk在動(dòng)脈粥樣硬化的炎癥反應(yīng)過程中起著重要的調(diào)節(jié)作用。由于Syk在血液細(xì)胞和其他細(xì)胞內(nèi)的廣泛表達(dá)，以及它在細(xì)胞信號傳導(dǎo)中的重要作用，尤其是在免疫受體信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，故Syk涉及到人類許多疾病，它的活性高低直接影響疾病的發(fā)生發(fā)展。因此利用分子生物學(xué)技術(shù)把Syk作為干預(yù)治療靶點(diǎn)，將為動(dòng)脈粥樣硬化性疾病的治療提供新策略和新方法。目前，中藥已經(jīng)在開展酪氨酸激酶抑制劑的篩選，但是對酪氨酸激酶抑制劑的篩選并沒有區(qū)分受體型和非受體型;國內(nèi)酪氨酸激酶抑制劑的篩選主要停留在抗腫瘤方面，將酪氨酸激酶引入心血管系統(tǒng)研究，將會為心血管系統(tǒng)疾病的研究提供新的靶點(diǎn)，從中藥中篩選Syk抑制劑，進(jìn)行系統(tǒng)、深入的研究，開發(fā)新一代抗AS藥物將具有廣闊的應(yīng)用前景。

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