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        黑花生色素抗氧化性研究

        2012-12-03 05:44:18李楠
        食品研究與開發(fā) 2012年3期
        關(guān)鍵詞:超氧水浴陰離子

        李楠

        (天津渤海職業(yè)技術(shù)學(xué)院,天津 300402)

        黑花生衣色素中花色苷類色素含量豐富。研究發(fā)現(xiàn),花色苷類色素具有抗氧化、清除自由基等作用。自由基學(xué)說認(rèn)為,自由基是引起機(jī)體衰老的根本原因,消除體內(nèi)多余自由基具有延長壽命的功效。本文以黑花生衣色素(BPSP)為原料,研究了該色素對自由基的清除作用,為該色素在食品中的應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。

        1 材料與方法

        1.1 材料

        黑花生:市售;DPPH:日本東京化成工業(yè)株式會社;T ris-HCl緩沖液,鄰苯三酚,檸檬酸、FeSO4-EDTA、蔗糖酯、三氯乙酸(TCA)、硫代巴比妥酸(TBA)、α-脫氧核糖、磷酸二氫鈉、鹽酸、VC等試劑均為分析純。

        1.2 儀器

        Vv-7504紫外可見分光光度計:上海欣茂儀器有限公司;FA-2004A電子天平:上海精天電子儀器有限公司;精密數(shù)顯酸度計:上海天達(dá)儀器有限公司;UV-1249紫外可見分光光度計:北京瑞利分析儀器公司;RE-52AA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器:上海亞榮生化儀器廠;HP20大孔樹脂:天津南開大學(xué)化工廠。

        1.3 方法

        1.3.1 黑花生衣色素提取方法

        將黑花生衣置于燒杯中,加入pH=1檸檬酸-磷酸氫二鈉緩沖溶液進(jìn)行浸提,其中料液比(g/mL)為1∶50,放入80℃恒溫水浴中浸提2 h,浸提級數(shù)為2級[1];取濾液,再經(jīng)HP20樹脂吸附、80%乙醇洗脫旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得到BPSP濃縮膏待用[2]。

        1.3.2 黑花生衣色素抗氧化能力的測定

        1.3.2.1 清除羥自由基能力的測定[3]

        分別取 0.01、0.05、0.1、0.5、1.0、1.5 mg/mL 6 個不同濃度的待測液各0.2 mL,依次加入10 mmol/L FeSO4-EDTA混合液0.2 mL、10 mmol/L的α-脫氧核糖溶液0.2 mL,而后用磷酸緩沖液(PBS,pH 7.4,0.1 mol/L)定容至1.8 mL,再加入10 mmol/L H2O20.2 mL和1 mL的濃度為5%蔗糖酯,混勻后置于25℃恒溫水浴中反應(yīng)1 h后,加入1 mL三氯乙酸(TCA,2.8%)溶液,和 1 mL硫代巴比妥酸溶液(TBA,1.0%),混勻后置于沸水浴中反應(yīng)15 min,冷卻后以PBS為參比于520 nm處比色測定吸光值為A。同時做空白試驗,所測吸光值為A0。以VC為陽性對照進(jìn)行試驗。按下式計算清除能力,并繪制清除率與樣品濃度曲線。

        1.3.2.2 清除超氧陰離子自由基能力的測定[4]

        取 2.7 mL Tris-HCl緩沖液(0.05 mol/L、pH 8.2),加入蒸餾水0.1 mL,于25℃恒溫水浴10 min后,加入0.2 mL鄰苯三酚溶液(30 mmol/L、25℃),迅速混勻,在520 nm處測定溶液的吸光度A1。分別取濃度為0.01、0.05、0.10、0.15、0.20 mg/mL 的待測液各 0.1 mL,加入2.7 mL Tris-HCl緩沖液(0.05 mol/L、pH 8.2),于 25 ℃恒溫水浴10 min,加入25℃預(yù)熱的10 mmol/L HCl溶液0.2 mL,迅速混勻,在520 nm處測定溶液的吸光度A2。取濃度分別為 0.01、0.05、0.10、0.15、0.20 mg/mL 的待測液各0.1mL,加入2.7mLTris-HCl緩沖液(0.05mol/L、pH 8.2),于25℃恒溫水浴10 min后,加入0.2 mL鄰苯三酚溶液(30 mmol/L、25℃),迅速混勻,在520 nm處測定溶液的吸光度A3。以VC為陽性對照進(jìn)行試驗。按下式計算清除能力,并繪制清除率與樣品濃度曲線。

        1.3.2.3 清除自由基效能力的測定——DPPH法[5]

        將提取液配制成 0.05、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg/mL 7個濃度,分別吸取樣液2.0 mL,加入濃度為2.0 mg/mL DPPH·乙醇溶液2.0 mL,搖勻、于25℃水浴30 min,以95%乙醇為對照,在520 nm處測定試液的吸光度A1。同時,為扣除試劑本身顏色的影響,取2.0 mL待測樣液與2.0 mL 95%乙醇進(jìn)行混合,以95%乙醇為對照,在520 nm處測定試液的吸光度A2。2.0 mL將DPPH·乙醇溶液與2.0 mL 95%乙醇混合,同樣以95%乙醇為對照,在520 nm處測定試液的吸光度A3。每組測定3次,求取平均值,按下述公式計算樣品的抑制率。以VC為陽性對照進(jìn)行試驗。按下式計算清除能力,并繪制清除率與樣品濃度曲線。

        2 結(jié)果與討論

        2.1 黑花生衣色素清除羥自由基的效果

        黑花生衣色素和VC對羥自由基的清除效果見圖1。

        圖1 黑花生衣色素和VC對羥自由基清除率對比Fig.1 Comparison BPSP and VCon the elimination of·OH

        由圖1可以看出,同等濃度下VC對于羥自由基的清除效果優(yōu)于黑花生衣。黑花生衣色素和VC對于羥自由基的清除效果均隨著濃度的增大而增強(qiáng)。當(dāng)黑花生衣色素和VC濃度超過0.1mg/mL時,清除率增加速度明顯減緩,濃度增加對清除效果影響不大。

        2.2 黑花生衣色素清除超氧陰離子自由基的效果

        黑花生衣色素和VC對超氧陰離子自由基的清除效果見圖2。

        圖2 黑花生衣色素和VC對超氧陰離子自由基清除率對比Fig.2 Comparison BPSP and VCon the elimination of·O2-

        由圖2可以看出,同等濃度下VC對超氧陰離子自由基的清除效果優(yōu)于黑花生衣。黑花生衣色素和VC對于超氧陰離子自由基的清除效果均隨著濃度的增大而增強(qiáng)。當(dāng)黑花生衣色素和VC濃度超過0.1 mg/mL時,濃度增加對自由基清除效果影響不大。

        2.3 黑花生衣色素清除DPPH自由基的效果

        黑花生衣色素和VC對DPPH自由基的清除效果見圖3。

        圖3 黑花生衣色素和VC對超氧陰離子自由基清除率對比Fig3 Comparison BPSP and VCon the elimination of DPPH·

        由圖3可見,同等濃度下VC對DPPH自由基的清除效果優(yōu)于黑花生衣。黑花生衣色素和VC對于DPPH自由基的清除效果均隨著濃度的增大而增強(qiáng)。當(dāng)黑花生衣色素和VC濃度超過0.6 mg/ml時,清除率基本不再上升,說明濃度超過0.6 mg/ml后濃度增加對自由基清除效果影響不大。

        3 結(jié)論

        不同抗氧化體系所測的結(jié)果往往存在一定的差異,因此,本次實驗采用三種抗氧化體系對黑花生衣色素的抗氧化活性進(jìn)行評價。實驗表明,黑花生衣色素對羥基自由基(·OH)、超氧陰離子(·O2-)和二苯代苦味酰基自由基(DPPH·)均具有良好的清除效果。說明黑花生衣色素是一種具有抗氧化活性的天然植物色素,不僅可用于食品的著色,而且可以起到抗衰老、防癌、抗癌等良好的保健作用。

        [1]呂曉玲,張淑娟,范輝.黑花生衣色素的提取工藝條件研究[J].食品研究與開發(fā),2009(5):178-181

        [2]王鋒,譚興和,郭時印.大孔樹脂純化黑花生衣色素的研究[J].湖南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報:自然科學(xué)版,2007,33(4):500-505

        [3]Mar klund S.Involvement of the superoxide anion radical in he autoidation of pyrogallol and aconvenient assay for superoide dismutase[J].Eur J Biochem,1974,47:469

        [4]Alex andre C,Kur t H,Wahjo D,et al.Antioxidant and lipophilic constituent softinos poracrispa[J].Planta Medica,1998,64:393-396

        [5]蔡華珍,陳守江,張麗,等.烏骨雞黑色素的酶法提取及其抗氧化作用的初步研究[J].食品與發(fā)酵工業(yè),2006(1):99-102

        [6]李進(jìn),瞿偉菁,張素軍,等.黑果枸杞色素的抗氧化活性研究[J].中國中藥雜志,2006,31(14):1179-1183

        [7]趙云霞,馬永昆,宋萬杰,等.桑椹紅色素的純化及其抗氧化活性研究[J].食品工業(yè)科技,2008,29(6):250-253

        [8]徐淵金,杜琪珍.花色苷分離鑒定方法及其生物活性[J].食品與發(fā)酵工業(yè),2006,32(3):67-72

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