梁 鑫 付 雙 張 杰▲ 劉 軍 沙子鍵 關(guān) 宏

1.齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，黑龍江齊齊哈爾 161006；2.齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院微生態(tài)研究所，黑龍江齊齊哈爾 161006

毛細(xì)管區(qū)帶電泳電化學(xué)檢測(cè)人體尿樣中的雙氯滅痛、氯丙嗪

梁 鑫1付 雙1張 杰1▲劉 軍1沙子鍵1關(guān) 宏2

1.齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，黑龍江齊齊哈爾 161006；2.齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院微生態(tài)研究所，黑龍江齊齊哈爾 161006

目的 建立毛細(xì)管區(qū)帶電泳法測(cè)定人體尿樣中雙氯滅痛、氯丙嗪含量的方法。 方法 采用彈性石英毛細(xì)管（31.5 cm，25 μm i.d.，360 μm o.d.），以 4.90×10-3mol/L Na2HPO4-7.80×10-3mol/L NaH2PO4（pH=7）為緩沖液，10 kV分離電壓，5 kV電滲進(jìn)樣10 s，碳纖維電極工作電極（長(zhǎng)200 μm，直徑8 μm），檢測(cè)電勢(shì)0.72 V。 結(jié)果 雙氯滅痛、氯丙嗪兩種藥物分別在 9.90×10-6～5.00×10-4mol/L（r=0.998 2）、5.0×10-7～1.0×10-4mol/L（r=0.999 8）范圍內(nèi)表現(xiàn)出良好的線性，其回收率分別為104%，96.0%。 結(jié)論 該方法簡(jiǎn)便、快速、準(zhǔn)確，可作為人體尿樣中雙氯滅痛、氯丙嗪的分離檢測(cè)方法。

毛細(xì)管區(qū)帶電泳；電化學(xué)檢測(cè)；雙氯滅痛；氯丙嗪

毛細(xì)管電泳是在散熱效率很高的毛細(xì)管內(nèi)進(jìn)行的電泳，具有“高效、低耗、快速、應(yīng)用廣泛”等特點(diǎn)，在藥物的分析方面得到了廣泛的應(yīng)用[1-5]。氯丙嗪是一種抗精神病藥，近年來(lái)，用HPLC、毛細(xì)管氣相色譜法[6-9]檢測(cè)氯丙嗪皆有所報(bào)道；雙氯滅痛是一種抗風(fēng)濕藥，對(duì)該藥的檢測(cè)，HPLC[10-12]曾有過(guò)報(bào)道。用毛細(xì)管電泳在同一緩沖體系中電化學(xué)同時(shí)檢測(cè)兩種藥物還未見報(bào)道。本研究建立了毛細(xì)管電泳電化學(xué)安培檢測(cè)人體尿樣中雙氯滅痛、氯丙嗪含量的方法，為雙氯滅痛、氯丙嗪體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)的研究提供了一條可行性途徑。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

高壓電源 （山東省化工研究所與山東大學(xué)聯(lián)合研制）；901-μA型微電流伏安儀（福建寧德分析儀器廠）；碳纖維（上海碳素廠）；彈性石英毛細(xì)管（河北永年光學(xué)纖維廠）。

1.2 試藥

氯丙嗪（江蘇常州東慶制藥有限公司）；雙氯滅痛（兗州制藥廠）；其他試劑均為分析純，實(shí)驗(yàn)用水均為亞沸蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的配制

2.1.1 雙氯滅痛標(biāo)準(zhǔn)溶液 準(zhǔn)確稱取0.159 0 g雙氯滅痛，用水稀釋至50.00 mL，配成1.00×10-2mol/L儲(chǔ)備液。

2.1.2 氯丙嗪標(biāo)準(zhǔn)溶液 準(zhǔn)確稱取0.177 7 g鹽酸氯丙嗪，用水稀釋至50.00 mL，配成1.00×10-2mol/L儲(chǔ)備液。

2.2 毛細(xì)管電泳電化學(xué)安培檢測(cè)條件的選擇

2.2.1 緩沖液pH的選擇 試驗(yàn)了雙氯滅痛、鹽酸氯丙嗪在pH為 6.6、7.0、7.4、7.7、8.0 條件下的柱效及峰電流值：（1）雙氯滅痛，n 分別為 1.63×104、1.77×104、1.80×104、1.81×104、1.64×104，iP（pA）分別為 83、108、104、99、89；（2）鹽酸氯丙嗪，n 分別為6 499、6 404、6 404、6 404、6 310，iP（pA）分別為 162、174、185、181、181。因此選擇pH=7.0的緩沖液。

2.2.2 緩沖液濃度的選擇 緩沖液濃度以Na2HPO4（NaH2PO4∶Na2HPO4為1.6∶1.0）計(jì)，試驗(yàn)了雙氯滅痛、鹽酸氯丙嗪在Na2HPO4濃度 為 2.40×10-3、3.10×10-3、4.90×10-3、5.80×10-3、6.70×10-3mol/L 條件下的柱效及峰電流值：（1）雙氯滅痛，n分別為 6.73×103、8.80×103、1.67×104、1.31×104、1.31×104，iP（pA）分別為 99、99、104、105、104；（2）鹽酸氯丙嗪，n 分別為 4 740、5 140、6 404、6 404、6 400，iP（pA）分別為 177、181、185、183、185。因此選擇Na2HPO4濃度為4.90×10-3mol/L的緩沖液。

2.2.3 檢測(cè)電勢(shì)的選擇 不同檢測(cè)電勢(shì)（Ed）下測(cè)定的峰電流（iP）與Ed的關(guān)系曲線見圖1，可以看出iP與Ed的變化趨勢(shì)，綜合考慮，選擇0.72 V為檢測(cè)電勢(shì)。

圖1 峰電流與檢測(cè)電勢(shì)的關(guān)系

2.2.4 分離電壓的選擇 雙氯滅痛、鹽酸氯丙嗪在5、8、10、15、20、25 kV等不同分離電壓下的柱效及峰電流值，（1）雙氯滅痛，n 分別為 2.63×104、2.27×104、2.65×104、1.62×104、1.64×104，iP（pA）分別為 112、125、105、58、48；（2）鹽酸氯丙嗪，n 分別為5 074、5 926、6 377、5 928、6 508，iP（pA）分別為 520、592、637、460、421。因此選擇10 kV分離電壓。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 重現(xiàn)性試驗(yàn) 固定上述條件對(duì)濃度為9.90×10-5mol/L的雙氯滅痛、2.80×10-5mol/L的鹽酸氯丙嗪連續(xù)測(cè)定6次，tm與 iP的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差：（1）雙氯滅痛為 0.80%、4.7%；（2）鹽酸氯丙嗪為0.46%、4.5%。

2.3.2 線性關(guān)系 固定上述條件對(duì)不同濃度的雙氯滅痛、鹽酸氯丙嗪進(jìn)行測(cè)定，得到（1）雙氯滅痛，線性范圍為9.90×10-6～5.00×10-4mol/L，相關(guān)系數(shù)為 0.998 2；（2）鹽酸氯丙嗪，線性范圍為 5.00×10-7～1.00×10-4mol/L，相關(guān)系數(shù)為 0.999 8。

2.3.3 檢測(cè)限 固定上述條件，（1）對(duì)9.90×10-6mol/L的雙氯滅痛進(jìn)行檢測(cè)，得出高出噪音8倍的響應(yīng)值，當(dāng)S/N=2時(shí)，雙氯滅痛的檢測(cè)限為 2.48×10-6mol/L（見圖 2）；（2）對(duì) 5.0×10-7mol/L鹽酸氯丙嗪進(jìn)行分離檢測(cè)，得出高出噪音10倍的響應(yīng)值，當(dāng)S/N=2時(shí)，鹽酸氯丙嗪的檢測(cè)限為1.0×10-7mol/L（見圖2）。

圖2 鹽酸氯丙嗪與雙氯滅痛的區(qū)帶電泳圖

2.4 尿樣中雙氯滅痛、鹽酸氯丙嗪的分離檢測(cè)

取人體尿液500 μL，加入雙氯滅痛、鹽酸氯丙嗪的標(biāo)準(zhǔn)溶液，混勻配成含雙氯滅痛4.00×10-3mol/L、鹽酸氯丙嗪4.00×10-4mol/L的模擬尿樣。取該模擬尿樣100 μL加入10 mL中性磷酸鹽緩沖液中，混合均勻后進(jìn)行電泳分離電化學(xué)檢測(cè)，得到模擬尿樣中雙氯滅痛、鹽酸氯丙嗪的區(qū)帶電泳圖（見圖3）。圖3中，A為尿樣的區(qū)帶電泳圖；B為加入雙氯滅痛、鹽酸氯丙嗪后的模擬尿樣區(qū)帶電泳圖，a、b為尿液中未知組分。測(cè)量峰高，用標(biāo)準(zhǔn)加入法定量得到模擬尿樣中雙氯滅痛、鹽酸氯丙嗪的含量分別為4.00×10-3、3.98×10-4mol/L與配制的模擬尿樣含量一致，回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果分別為104%、96.0%。

圖3 尿樣中鹽酸氯丙嗪雙氯滅痛的區(qū)帶電泳圖

3 討論

采用pH=7的磷酸緩沖體系作為分離介質(zhì)，10 kV的分離電壓可以使雙氯滅痛、鹽酸氯丙嗪得到較高的柱效及峰電流，人體尿液中含有未知成分，但在此分離條件下未知成分與目標(biāo)藥物均能得到很好的分離；尿樣在電泳前要進(jìn)行處理，處理方法簡(jiǎn)單。

綜上所述，本方法簡(jiǎn)單、快速，靈敏度較高，線性、回收率試驗(yàn)均符合規(guī)定，可作為人體尿樣中雙氯滅痛、氯丙嗪的分離檢測(cè)方法。

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Determination of diclofenac sodium and chlorpromazine in human urine by capillary zone electrophoresis with electrochemical detection

LIANG Xin1FU Shuang1ZHANG Jie1▲LIU Jun1SHA Zijian1GUAN Hong2
1.College of Pharmacy,Qiqihar Medical University,Heilongjiang Province,Qiqihar 161006,China;2.Microecological Institute,Qiqihar Medical University,Heilongjiang Province,Qiqihar 161006,China

Objective To establish the methods of determination of diclofenac sodium and chlorpromazine in human urine by capillary zone electrophoresis.Methods Quartz capillary column (31.5 cm,25μm i.d.,360 μm o.d.)was adopted.The optimum conditions of separation and detection were 4.90×10-3mol/L Na2HPO4-7.80×10-3mol/L NaH2PO4(pH=7)for the buffer solution,10 kV for the separation voltage,5 kV and 10 s for the injection voltage and the injection time,0.72 V for the detection potential,respectively.Carbon fiber microelectrode(length:200 μm,diameter:8 μm).Results Diclofenac sodium and chlorpromazine had better linery relation in the range of 9.90×10-6-5.00×10-4mol/L (r=0.998 2),5.0×10-7-1.0×10-4mol/L (r=0.999 8),and the recovery was 104%,96.0%,respectively.Conclusion The method is simple,rapid,accuracy and is applied to the determination of diclofenac sodium and chlorpromazine in human urine.

Capillary zone electrophoresis;Electrochemical detection;Diclofenac sodium;Chlorpromazine

R446.12+2

A

1674-4721（2012）10（b）-0008-02

▲通訊作者：張杰，副教授，碩士；研究方向：藥物分析；研究時(shí)間：2010年6～12月。

2011-12-08 本文編輯：郭靜娟）