呂 鵬 何巧玲 羅 秀 陳兆霓 焦 楊 黃仁彬 張士軍*

（廣西南寧醫(yī)科大學(xué)，廣西 南寧 530021）

跌打消腫止痛靈是扁藤、骨碎補(bǔ)、田七、血竭、大羅傘組成的復(fù)方酊劑，有舒筋活絡(luò)、消腫止痛、活血化淤的功效，民間使用對跌打損傷、腰腿痛、風(fēng)濕痛、軟組織損傷等有極好的療效。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)跌打消腫止痛靈經(jīng)口服給藥具有良好的抗炎鎮(zhèn)痛作用，但是口服給藥在肝臟中存在“首過效應(yīng) ”，也容易在胃腸道中受到破壞[1]。為了延長跌打消腫止痛靈有效作用時間，減少作用次數(shù)，避免肝臟的和胃腸道的破壞，減少胃腸給藥的副作用，本課題組考慮采用皮膚用藥、皮膚用藥與口服給藥聯(lián)合等不同給藥途徑來維持跌打消腫止痛靈恒定的最佳血藥濃度或生理效應(yīng)。為了確保跌打消腫止痛靈臨床皮膚用藥的安全性，本次試驗(yàn)進(jìn)行了跌打消腫止痛靈皮膚用藥的毒性試驗(yàn)研究，從而為跌打消腫止痛靈的開發(fā)和臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動物

健康白色豚鼠，雌雄各半，普通級，體質(zhì)量（250±20）g，由廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心提供。試驗(yàn)動物生產(chǎn)許可證 SCXK（桂）2003-0003，試驗(yàn)動物使用許可證 SYXK（桂）2003 -0005。常規(guī)兔飼料喂養(yǎng)，自由飲水。

1.2 試驗(yàn)藥物及試劑

跌打消腫止痛靈：由本實(shí)驗(yàn)室自行提取配制；2，4-二硝基氯苯（sigma公司，批號：Lot# MKAA0924V）。

1.3 方法

1.3.1 皮膚急性毒性試驗(yàn)[2]

取白色豚鼠50只，雌雄各半，于給藥前24h，將背部脊柱兩側(cè)剃毛，去毛面積約40cm2，去毛后24h檢查去毛皮膚是否因去毛而受傷，受傷的皮膚不宜做完好皮膚的毒性試驗(yàn)。破損皮膚的制作：采用400#細(xì)砂紙在豚鼠脫毛區(qū)皮膚上擦傷，以滲血為度。將剃毛豚鼠分為5組：空白對照組，完整皮膚高、低劑量組（16，4mL/kg），破損皮膚高、低劑量組（16，4mL/kg），每組10只，給藥體積 4mL，空白對照組給予等體積蒸餾水，采用多次重復(fù)皮膚給藥，將受試藥物均勻涂于脫毛區(qū)，每只動物分籠飼養(yǎng)。給受試藥物24h后，用溫水洗去殘留受試藥物，去除受試藥物后1、24、48、72h至第7日，每日觀察并記錄動物體質(zhì)量、皮膚毛發(fā)、眼和結(jié)膜的變化、呼吸、中樞神經(jīng)系統(tǒng)、四肢活動等及其他中毒表現(xiàn)，若遇有死亡動物，應(yīng)及時進(jìn)行尸檢和肉眼觀察，當(dāng)有肉眼可見病變時，應(yīng)進(jìn)行病例組織學(xué)檢查。

1.3.2 皮膚刺激性試驗(yàn)[2]

取白色豚鼠20只，雌雄各半，去毛及破損皮膚制作同上。試驗(yàn)采用同體左右側(cè)自身對比，分完整皮膚組和破損皮膚組，每組10只，左側(cè)去毛區(qū)涂受試藥物1mL，右側(cè)涂蒸餾水1mL作為對照。每只動物分籠飼養(yǎng)，給受試藥物24h后，用溫水洗去殘留受試藥物，去除受試藥物后1、24、48、72h觀察并記錄涂抹部位有無紅斑和水腫等情況，按《皮膚刺激性反應(yīng)評分標(biāo)準(zhǔn)》[2]進(jìn)行評分，計算各組動物反應(yīng)平均分值。根據(jù)《皮膚刺激性強(qiáng)度評價標(biāo)準(zhǔn)》[2]對皮膚刺激性強(qiáng)度進(jìn)行評價。

1.3.3 多次給藥皮膚刺激性試驗(yàn)[2]

取白色豚鼠20只，分組及給藥同上，連續(xù)涂藥7d，停藥后再觀察7d，每日觀察并記錄紅斑及水腫情況并評分，并觀察涂抹部位是否有色素沉著、出血點(diǎn)、皮膚粗糙或皮膚菲薄等情況。

1.3.4 皮膚過敏試驗(yàn)[2]

白色豚鼠30只，雌雄各半，于給受試藥物24h前將背部兩側(cè)剃毛，去毛區(qū)范圍每側(cè)約3cm×3cm。將豚鼠按性別隨機(jī)分為3組：空白對照組、受試藥物組及陽性對照組，每組10只。受試藥物組給予跌打消腫止痛靈0.1mL，空白對照組給予等體積蒸餾水，陽性對照組給予等體積1% 2，4-二硝基氯苯。①致敏接觸：受試藥物組取跌打消腫止痛靈0.1mL，均勻涂于左側(cè)脫毛區(qū)，涂好后動物分籠飼養(yǎng)，于第7天和第14天以同樣的方式重復(fù)1次，共計3次?？瞻讓φ战M與陽性對照組方法同上。②激發(fā)接觸：于末次給藥后14 d，將相應(yīng)藥物0.1 ml涂于豚鼠背部右側(cè)脫毛區(qū)，陽性對照用0.1 % 2，4-二硝基氯苯，6h后去掉受試藥物，即刻觀察，然后于24、48、72h再次觀察皮膚過敏反應(yīng)情況。按《皮膚過敏反應(yīng)程度的評分標(biāo)準(zhǔn)》[2]進(jìn)行評分，計算各組動物反應(yīng)平均分值。同時注意觀察動物是否有哮喘、站立不穩(wěn)或休克等嚴(yán)重的全身變態(tài)反應(yīng)。根據(jù)《皮膚致敏性評價標(biāo)準(zhǔn)》[2]按致敏發(fā)生率推斷致敏性。

1.3.5 統(tǒng)計學(xué)處理

2 結(jié) 果

2.1 跌打消腫止痛靈的皮膚急性毒性試驗(yàn)

跌打消腫止痛靈在低劑量和高劑量用藥時對完整皮膚豚鼠與破損皮膚豚鼠的行為、活動、飲食、皮毛光澤、眼和結(jié)膜、呼吸，體質(zhì)量等均無任何影響，涂抹部位無紅斑和水腫現(xiàn)象，先后觀察7天內(nèi)無豚鼠死亡，未出現(xiàn)任何急性毒性反應(yīng)。與空白對照組比較完整皮膚組和±s，n=10 ）破損皮膚組的豚鼠體質(zhì)量增加差異不顯著（P＞0.05）。結(jié)果表明，跌打消腫止痛靈經(jīng)皮膚給藥無急性毒性反應(yīng)，安全度較大。見表1。

表1 跌打消腫止痛靈皮膚急性毒性試驗(yàn)對豚鼠體質(zhì)量的影響 （χ—

表2 跌打消腫止痛靈對豚鼠皮膚刺激試驗(yàn)（n=10 ）

表3 跌打消腫止痛靈對豚鼠皮膚致敏性試驗(yàn) （ n=10 ）

2.2 跌打消腫止痛靈的皮膚刺激性試驗(yàn)

用溫水洗去殘留受試藥物后1、24、48、72h觀察涂抹部位，個別豚鼠有勉強(qiáng)可見紅斑，各組豚鼠均未見水腫情況。連續(xù)給藥 1周后，觀察發(fā)現(xiàn)個別豚鼠有勉強(qiáng)可見的紅斑，能夠很快自行消失，其余豚鼠未見水腫、色素沉著、出血點(diǎn)、皮膚粗糙或皮膚菲薄等情況。皮膚刺激程度平均反應(yīng)分值均＜0.49，為無刺激性。結(jié)果表明，跌打消腫止痛靈對皮膚無刺激性。見表2。

2.3 跌打消腫止痛靈的皮膚過敏反應(yīng)試驗(yàn)

受試藥物組和空白對照組于0、24、48、72h觀察未見紅斑、水腫等皮膚變態(tài)反應(yīng)情況；陽性對照組出現(xiàn)明顯的紅斑、水腫等皮膚致敏反應(yīng)情況，平均分值較高，致敏率達(dá)到100%。各組豚鼠均未出現(xiàn)哮喘、站立不穩(wěn)或休克等嚴(yán)重的全身變態(tài)反應(yīng)。結(jié)果表明，跌打消腫止痛靈對皮膚無致敏性。見表3。

3 討 論

口服給藥是最常用的給藥途徑，藥物經(jīng)過消化道，主要通過小腸進(jìn)行吸收。藥物吸收后通過門靜脈進(jìn)入肝臟，有些藥物進(jìn)入肝臟后發(fā)生首過效應(yīng)，從而減少了進(jìn)入體循環(huán)的藥量。雖然口服用藥方便快捷，但是其吸收慢，欠完全，對在胃腸破壞的、胃腸刺激大的、首關(guān)消除多的藥物不適宜性的缺點(diǎn)也是顯而易見的[1]。皮膚給藥則避免了首關(guān)消除的缺點(diǎn)，用藥方便。藥物通過皮膚，進(jìn)入體內(nèi)循環(huán)，還能夠促進(jìn)神經(jīng)體液調(diào)節(jié)，改善各組織器官的免疫功能等，增強(qiáng)自身抗病修復(fù)能力[3]。

對于跌打損傷、腰腿痛、風(fēng)濕痛、軟組織損傷等，通過皮膚途徑給藥，能夠更快捷的到達(dá)病灶，進(jìn)入體內(nèi)循環(huán)發(fā)揮藥效，保持較長時間的生理效應(yīng)。皮膚途徑中的皮膚毒性、刺激性、致敏性是皮膚用藥安全性的重要保證。跌打消腫止痛靈是本課題組依托廣西特色中草藥材料，根據(jù)民間用藥經(jīng)驗(yàn)，提取配制的復(fù)方酊劑，其中扁藤祛風(fēng)燥濕；骨碎補(bǔ)補(bǔ)腎強(qiáng)骨，續(xù)傷止痛；田七止血抗炎、活血化瘀，能夠擴(kuò)張血管，改善微循環(huán)，增強(qiáng)機(jī)體免疫功能；血竭活血散瘀，止血生?。淮罅_傘活血化瘀、消腫解毒。采用酊劑可以增加活血功效，有利于藥物吸收與藥效發(fā)揮。為研究其抗炎鎮(zhèn)痛的作用及其機(jī)制，首先必須確定跌打消腫止痛靈的皮膚用藥安全性。本課題組通過試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)跌打消腫止痛靈具有良好的皮膚用藥安全性，對皮膚無不良反應(yīng)，下一步本課題組將通過不同的炎癥模型，進(jìn)一步研究確定其通過皮膚給藥發(fā)揮藥效的作用機(jī)理，發(fā)揮藥物最大功效，以期望能夠開發(fā)出一種新的有效的抗炎鎮(zhèn)痛外用制劑，為臨床用藥提供試驗(yàn)依據(jù)，為廣西地區(qū)特色中草藥開發(fā)研究利用奠定基礎(chǔ)。

[1]金有豫.藥理學(xué)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,2001:18.

[2]中華人民共和國衛(wèi)生部藥政管理局.中藥新藥研究指南[S].1995:209-212.

[3]陳文貴.對中藥皮膚給藥途徑的探討[J].黑龍江中醫(yī)藥,1995,4(1):41-44.