張偉玲，王亞靜，田 慧，軒肖玉，高 旭，于 悅

（天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津市現(xiàn)代中藥重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室-省部共建國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育，天津 300193）

芒果苷（MGF），又名芒果素、知母寧，為漆樹科植物芒果葉的主要活性成分，具有廣泛的藥理活性，如抗腫瘤、抗病毒、抗輻射、抗糖尿病等作用[1]。但由于MGF脂水均難溶，導(dǎo)致口服吸收差，生物利用度低，限制了其療效的發(fā)揮和臨床應(yīng)用[2]。將藥物制成磷脂復(fù)合物可提高藥物的親脂性，促進(jìn)藥物透過生物膜，改善藥物在胃腸道內(nèi)的吸收[3-6]。因此，本課題組前期制備了芒果苷磷脂復(fù)合物（MPC）[7]，用以提高芒果苷的脂溶性。筆者進(jìn)一步考察了其在體大鼠腸吸收的情況，與芒果苷進(jìn)行了比較，以期為芒果苷新制劑的開發(fā)提供一定的生物藥劑學(xué)依據(jù)。

1 儀器與材料

1200 型高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫公司）；BT100－1F型恒流泵（保定蘭格恒流泵有限公司）；DKB－501A型超級(jí)恒溫水槽（上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司）。

芒果苷（MGF）對(duì)照品（天津中新藥業(yè)，批號(hào)：110505－11純度＞98%）；MGF原料（天津中新藥業(yè)，批號(hào)：100523，含量 90%）；MPC（自制，批號(hào)：111119，理論含量31.25%）；甲醇和乙腈均為色譜純，其余試劑均為分析純。

雄性SD大鼠，體質(zhì)量180～200 g。由北京華阜康生物科技股份有限公司提供[許可證號(hào)：SCXK（京）2009－0004]。

2 方法與結(jié)果

2.1 灌流液中芒果苷的高效液相色譜（HPLC）測(cè)定方法的建立

2.1.1 色譜條件 色譜柱：C18柱（VenusilMP－200mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈：0.1%甲酸（16∶84）；柱溫：35 ℃；流速：1.0 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：260 nm；進(jìn)樣量：20 μL。

2.1.2 方法專屬性 取K-R試液進(jìn)行腸灌流，收集6 h的空白腸灌流液，以此腸灌流液配制芒果苷對(duì)照品溶液，經(jīng)HPLC法測(cè)定，在此條件下空白腸灌流液不干擾芒果苷的測(cè)定，藥物的保留時(shí)間為8.582 min。

2.1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 精密稱取MGF對(duì)照品10 mg，置100 mL量瓶中，加甲醇適量，超聲使其溶解，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。分別精密量取該溶液0.25、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0 mL 于 100 mL 量瓶中，加K-R試液稀釋至刻度，搖勻，進(jìn)樣，以峰面積對(duì)濃度進(jìn)行線性回歸，回歸方程為A=83542×C-11937，r=0.9998，線性范圍為 0.25～8 μg/mL。

2.1.4 精密度與回收率 取標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制項(xiàng)下的對(duì)照品溶液，濃度1 μg/mL，重復(fù)測(cè)定5次，計(jì)算峰面積的RSD為1.95%。精密稱取芒果苷對(duì)照品0.5、2、4 mg，各3份，分別置100 mL量瓶中，按摩爾比1∶1加入磷脂，加K-R試液適量，超聲30 min使其溶解，用K-R試液稀釋至刻度，搖勻。各精密量取1 mL，分別置10 mL量瓶中，用K-R試液稀釋至刻度，搖勻，濾過，進(jìn)樣。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線方程計(jì)算濃度C，求得回收率。測(cè)得低、中、高3個(gè)濃度的回收率分別為 99.15%、96.84%、98.91%（n＝3）。結(jié)果表明精密度和回收率均符合方法學(xué)測(cè)定的要求。

2.1.5 穩(wěn)定性 取標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制項(xiàng)下的對(duì)照品溶液，濃度 2 μg/mL，置 37 ℃水浴中，分別于 0、1、2、4、6 h取樣，進(jìn)樣，測(cè)定芒果苷的含量。MPC在灌流液中6 h內(nèi)的RSD為1.81%，表明MPC在灌流液中6 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

2.2 大鼠腸灌流實(shí)驗(yàn)

2.2.1 溶液的配制

1）MGF灌流液：取MGF，用pH6.8的K-R緩釋液配制成的含MGF為3 μg/mL的溶液。

2）MPC灌流液：取MPC，用pH6.8的K-R緩釋液配制成的含MGF為3 μg/mL的溶液。

3）K-R 試液（pH＝6.8）：含氯化鈉 7.8 g/L、氯化鉀0.35 g/L、無(wú)水氯化鈣0.37 g/L、磷酸二氫鈉0.32 g/L、氯化鎂0.02 g/L、碳酸氫鈉1.37 g/L、葡萄糖1.48 g/L。

2.2.2 實(shí)驗(yàn)方法 取SD大鼠，禁食12 h，可自由飲水，腹腔注射20%烏拉坦麻醉（劑量1.0 g/kg），固定并維持體溫。沿腹中線打開腹腔，約4 cm，分離十二指腸、空腸、回腸、結(jié)腸各腸段。各腸段區(qū)間如下：十二指腸段為自幽門下1 cm處開始；空腸段為自幽門15 cm處開始；回腸段為自盲腸上行20 cm處開始；結(jié)腸段為緊鄰盲腸至直腸，各段均取10～15 cm。每段于兩端切口，用預(yù)熱至37℃的生理鹽水將腸內(nèi)容物沖洗干凈，插管后結(jié)扎。傷口處用浸有生理鹽水的脫脂棉覆蓋保濕，紅外燈下保溫。進(jìn)口處用已知質(zhì)量的裝有供試液的小瓶以0.2 mL/min的流速進(jìn)行灌流，出液口處用另一已知質(zhì)量的小瓶收集，持續(xù)105 min，每隔15 min迅速更換一次供試液小瓶和收集液小瓶，稱質(zhì)量，以計(jì)算進(jìn)出口灌流液的質(zhì)量，同時(shí)HPLC法測(cè)定藥物的濃度。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，處死大鼠，剪下被考察的腸段，測(cè)量長(zhǎng)度（l）和內(nèi)半徑（r）。計(jì)算并比較MGF和MPC各吸收部位下的藥物吸收速率常數(shù)（Ka）和表觀吸收系數(shù)（Papp）值，取 5 組數(shù)據(jù)的平均值進(jìn)行比較。并采用SPSS 18.5軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行單因素方差分析（one-way ANOVA）。結(jié)果見表1和表2。

計(jì)算公式：

式中：Qin和Qout分別為灌入和收集的供試液體積(假定供試液密度為1.0 g/mL，根據(jù)測(cè)得質(zhì)量計(jì)算體積)；Q為灌流速度；Cin和Cout分別為進(jìn)口和出口處供試液中的藥物濃度。l和r分別為被灌流腸段的長(zhǎng)度（cm）和橫截面半徑（cm）；Q為灌流速度（0.2 mL/min），t為灌流時(shí)間（0.25 h）；V 為灌流腸段的體積。Ka和 Papp為中間 4～5 個(gè)時(shí)間段（45～105 min）樣品的平均值。

表1 MGF和MPC在不同吸收部位的吸收速率常數(shù)Ka（±s，n＝5）Tab.1 Effect of different regions of intestinal on Kaof MGF and MPC（±s，n＝5）

表1 MGF和MPC在不同吸收部位的吸收速率常數(shù)Ka（±s，n＝5）Tab.1 Effect of different regions of intestinal on Kaof MGF and MPC（±s，n＝5）

注：與 MGF 相比，*P<0.1；與 MGF 相比，**P<0.01。

腸段Ka（×10－2/min）MPC MGF十二指腸 4.45±0.76* 3.40±1.19空腸 6.85±2.10** 4.15±0.99回腸 3.41±0.61* 2.33±0.51結(jié)腸 4.36±0.583.95±1.31

表2 MGF和MPC在不同吸收部位的表觀吸收系數(shù)Pap（p±s，n＝5）Tab.2 Effect of different regions of intestine on Pappof MGF and MPC（±s，n＝5）

表2 MGF和MPC在不同吸收部位的表觀吸收系數(shù)Pap（p±s，n＝5）Tab.2 Effect of different regions of intestine on Pappof MGF and MPC（±s，n＝5）

注：與 MGF 相比，**P<0.01。

腸段Papp（×10－3cm/min）MPC MGF十二指腸 4.86±0.584.27±1.57空腸 9.14±2.47** 4.84±1.37回腸 4.39±1.043.60±1.35結(jié)腸 5.30±1.484.79±0.62

由表1和表2可知，MPC各吸收部位的Ka和Papp值與MGF相比，均有不同程度的提高，說明磷脂復(fù)合物對(duì)芒果苷的腸吸收具有改善作用。經(jīng)方差分析，MPC在十二指腸和回腸的Ka值與MGF相比均有所提高（P＜0.1）。MPC 在空腸段的 Ka和 Papp值較 MGF 均提高顯著（P＜0.01），Ka和 Papp值分別增加了1.65和1.89倍，說明磷脂復(fù)合物對(duì)芒果苷的腸吸收改善部位主要在空腸。

3 討論

吸收是藥物在生物體內(nèi)發(fā)揮療效的前提，藥物的腸吸收在某一程度上能夠反映藥物經(jīng)口服后整體的吸收情況[8]。因吸收速度是影響藥物進(jìn)一步分布、代謝、排泄的決定性因素，而藥物透過生物膜的滲透能力是吸收的限速過程，因此，吸收速率常數(shù)Ka和表觀吸收系數(shù)Papp成為研究藥物腸吸收的重要?jiǎng)恿W(xué)參數(shù)[9-10]。其中Ka代表藥物從吸收部位進(jìn)入體循環(huán)的速度，用來(lái)衡量藥物吸收速度的快慢；Papp代表藥物透過生物膜的滲透能力。

目前研究藥物腸吸收的方法有外翻腸囊法、腸灌流法、分離腸黏膜法等[11]，其中在體腸灌流模型能夠較真實(shí)的模仿腸道的環(huán)境，吸收速率穩(wěn)定，與人體腸吸收有很好的相關(guān)性，因此常被用來(lái)考察藥物的腸吸收情況[12-13]。本實(shí)驗(yàn)以動(dòng)力學(xué)參數(shù)Ka和Papp為指標(biāo)，通過大鼠在體腸灌流模型來(lái)考察藥物的腸吸收情況。MPC和MGF腸吸收的對(duì)比結(jié)果顯示（見表1和表2），MPC在各吸收部位的Ka和Papp值較MGF均有不同程度的提高，其中在空腸段的提高最為顯著（P＜0.01），表明磷脂復(fù)合物無(wú)論是從吸收速度還是吸收程度上均對(duì)芒果苷的腸吸收有所改善。這可能與磷脂復(fù)合物對(duì)芒果苷親脂性的提高有關(guān)。磷脂與細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)相似，具有細(xì)胞親和力，與藥物結(jié)合后，非選擇性的增強(qiáng)了與腸壁細(xì)胞的親和力，使藥物更易透過腸壁細(xì)胞膜，從而提高了藥物在各吸收部位的滲透能力，進(jìn)而提高藥物的腸吸收速度。由此可見，將藥物制成磷脂復(fù)合物是改善中藥活性成分腸吸收的一種有效途徑，對(duì)于提高中藥制劑的口服生物利用度具有重要意義。

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