楊春蕾，李麗娟，周文忠，趙志杰，潘英芳，車向榮，郭 亮

(1.天津農(nóng)學(xué)院動(dòng)物科學(xué)系，天津 300384;2.中國農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)學(xué)院，北京 100094;3.山西農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，山西太谷 030801)

恩諾沙星(Enrofloxacin，ENR)是第一個(gè)動(dòng)物專用的氟喹諾酮類抗菌藥物，對(duì)大腸桿菌、沙門氏菌、嗜血桿菌、金黃色葡萄球菌、鏈球菌等細(xì)菌均有效，具有抗菌譜廣、體內(nèi)分布廣、殺菌活性強(qiáng)、與其他抗菌藥物無交叉耐藥性等特點(diǎn)，在畜禽的細(xì)菌和支原體疾病的預(yù)防和治療方面均有良好的效果［1－2］。

納米乳劑(nanoemulsions)是指粒徑＜100 nm的乳粒，是由油相、水相、表面活性劑和助表面活性劑按照適當(dāng)?shù)谋壤瞥傻囊环N半透明或者透明、低粘度、各向同性的液體。將恩諾沙星制備成脂質(zhì)納米乳這種給藥系統(tǒng)的優(yōu)勢(shì)在于，不僅可以提高其生物利用度，同時(shí)還有靶向、緩釋等控釋能力［4－6］。體外研究發(fā)現(xiàn)，恩諾沙星脂質(zhì)納米乳劑對(duì)金黃色葡萄球菌的最小抑菌濃度與普通藥物相似，說明此種制劑組成沒有改變恩諾沙星的殺菌能力。昆明小鼠體內(nèi)研究表明，恩諾沙星脂質(zhì)納米乳劑能相對(duì)增加藥物的消除半衰期(T1/2)、平均滯留時(shí)間(MRT)和藥時(shí)曲線下面積(AUC)［5］。但有關(guān)恩諾沙星脂質(zhì)納米乳劑在斷奶仔豬上的應(yīng)用研究國內(nèi)尚未見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)以恩諾沙星脂質(zhì)納米乳劑為試驗(yàn)材料，旨在研究不同濃度恩諾沙星脂質(zhì)納米乳對(duì)斷奶仔豬血清生化指標(biāo)的影響，為恩諾沙星脂質(zhì)納米乳劑的研發(fā)和臨床應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料 恩諾沙星脂質(zhì)納米乳劑由十六烷基碳脂肪酸組成，其中恩諾沙星粉劑含量5.0 mg/mL，實(shí)測(cè)平均粒徑為(111.0±7.2)nm，分散指數(shù)為0.26 ±0.17，電動(dòng)勢(shì)為(－ 31.57 ±3.76)mv，由中國農(nóng)業(yè)大學(xué)周文忠教授實(shí)驗(yàn)室提供。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)及試驗(yàn)動(dòng)物 隨機(jī)選擇健康斷奶仔豬5組，其中分為4個(gè)試驗(yàn)處理組，1個(gè)空白對(duì)照組，仔豬平均體重10.05 kg，長(zhǎng)白與大約克夏雜交三元品種，分別按 0、5.0、2.5、1.25、0.6 mg/kg 劑量對(duì)仔豬進(jìn)行口服給藥，在給藥后2、6、8與96 h前腔靜脈采血。

1.3 飼養(yǎng)管理 經(jīng)7 d的適應(yīng)性飼養(yǎng)后，5個(gè)處理組仔豬生長(zhǎng)良好，無其他異?，F(xiàn)象。試驗(yàn)正試期開始空腹稱重并做記錄，每天定時(shí)飼喂四次(7:00、11:00、16:00、21:00)，仔豬自由采食、飲水，保持舍內(nèi)清潔。

1.4 測(cè)定指標(biāo)

1.4.1 臨床癥狀觀察 每日觀察各處理組仔豬的精神狀態(tài)、飲食等狀況。

1.4.2 生化指標(biāo)檢測(cè) 仔豬于試驗(yàn)開始和結(jié)束時(shí)空腹稱重，試驗(yàn)結(jié)束時(shí)仔豬前腔靜脈采血5 mL，3000 r/min離心15 min分離血清，采用自動(dòng)生化分析儀測(cè)定谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、堿性磷酸酶(ALP)、尿素(Urea)、淀粉酶(AMY)和肌酐(Crea)含量。

1.5 數(shù)據(jù)處理 采用SPSS17.0軟件進(jìn)行處理，并做單因素方差分析，采用鄧肯氏法進(jìn)行多重比較，P＜0.05為差異顯著，數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 臨床癥狀觀察 對(duì)照組和試驗(yàn)組仔豬，精神狀態(tài)、飲食欲和對(duì)外界的反應(yīng)能力未見異常。

2.2 不同劑量恩諾沙星脂質(zhì)納米乳對(duì)斷奶仔豬生化指標(biāo)的影響 不同劑量恩諾沙星納米脂質(zhì)乳劑給藥后，分別在2、6、8和96 h檢測(cè)，結(jié)果見表1。表1中的統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)為2、6、8和96 h內(nèi)各項(xiàng)指標(biāo)的平均值。

表1 不同劑量恩諾沙星脂質(zhì)納米乳對(duì)斷奶仔豬生化指標(biāo)的影響(n=5)

續(xù)表

表1實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示，仔豬分別按0.6、1.25、2.5 和 5.0 mg/kg 劑量對(duì)仔豬給藥后:(1)各劑量組的 ALT、AST、ALP、AMY 和 Crea在2、6、8和96 h與對(duì)照組差異不顯著(P＞0.05)。(2)各劑量組的Urea在2 h與對(duì)照組未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異;但5.0 mg/kg劑量組在6 h與對(duì)照組和0.6 mg/kg劑量組差異顯著(P＜0.05)，在8 h和96 h的數(shù)值與對(duì)照組和其他劑量組差異顯著(P＜0.05)。以上數(shù)據(jù)表明，恩諾沙星脂質(zhì)納米乳劑以口服給藥方式，在生長(zhǎng)仔豬平均體重10.05 kg時(shí)，以0.6、1.25、2.5 和 5.0 mg/kg 的劑量下在 2、6、8和96 h對(duì)仔豬肝功能和胰腺功能影響未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但在5.0 mg/kg的劑量下，仔豬血清Urea水平與其他劑量組差異顯著，說明隨著劑量的增加對(duì)仔豬血清Urea水平的影響逐漸增大。結(jié)果提示，5.0 mg/kg劑量下恩諾沙星脂質(zhì)納米乳劑可能會(huì)對(duì)仔豬腎臟功能有一定的影響。

3 討論

恩諾沙星水溶性差的特點(diǎn)使其藥劑配方設(shè)計(jì)困難，導(dǎo)致了生物利用度的多樣性［5］。此外，恩諾沙星在大部分哺乳動(dòng)物體內(nèi)的新陳代謝快和消除半衰期短，需連續(xù)多次給藥才能達(dá)到治療目的，給臨床應(yīng)用帶來很大不便，而且容易造成動(dòng)物的應(yīng)激［7］。本試驗(yàn)中采用恩諾沙星納米脂質(zhì)乳劑，具有延緩藥物釋放、延長(zhǎng)峰值血藥濃度時(shí)間、減少臨床給藥次數(shù)和增加治療效果等優(yōu)點(diǎn)。本制劑在抗菌活性試驗(yàn)中，利用金黃色葡萄球菌測(cè)定其MIC為0.25 μg/mL，與普通恩諾沙星藥物的值接近，說明其保持了原來藥物的抗菌活性［5］。

哺乳動(dòng)物的血清生理生化指標(biāo)與機(jī)體代謝、營養(yǎng)狀況和疾病有密切的關(guān)系。當(dāng)機(jī)體受到外界因子的影響而發(fā)生生理或病理變化時(shí)，會(huì)在血液指標(biāo)中反應(yīng)出來［8］。血清中ALT、AST和ALP活性的變化是判斷肝功能正常與否的主要指標(biāo)，Urea和Crea活性的變化是判斷腎臟功能正常與否的主要指標(biāo)［9－10］。AMY是α－淀粉酶中的內(nèi)淀粉酶，是用于臨床診斷中的酶類之一［11］。正常情況下，細(xì)胞膜的屏障作用下細(xì)胞內(nèi)的酶不易逸出［13］，機(jī)體血清中常用的肝腎功能指標(biāo)和胰腺指標(biāo)處于正常值范圍內(nèi)。只有當(dāng)機(jī)體肝、腎和胰腺受外來敏感物質(zhì)刺激發(fā)生變化時(shí)，會(huì)使得細(xì)胞膜遭受破壞，使細(xì)胞內(nèi)的酶釋放入血液的速度大大提升，這些指標(biāo)會(huì)隨之升高或者降低。本試驗(yàn)結(jié)果表明仔豬口服恩諾沙星脂質(zhì)納米乳后，低劑量組在不同時(shí)間對(duì)仔豬的肝臟功能、腎功能和胰腺的影響未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但隨著劑量的增加，仔豬血清Urea水平與其他劑量組差異顯著，說明高劑量可能對(duì)仔豬腎臟會(huì)產(chǎn)生一定的影響。

恩諾沙星味道苦，不適合口服給藥，因此限制了其給藥方式，同時(shí)也使得其在單胃動(dòng)物體內(nèi)口服生物利用度高的優(yōu)點(diǎn)不能有效發(fā)揮［14］。本試驗(yàn)中，利用熱均質(zhì)法和超聲波破碎法裝載十六烷基碳脂肪酸制得的恩諾沙星脂質(zhì)納米乳劑，是一種新型的緩釋制劑，試驗(yàn)采用口服的方式進(jìn)行給藥，以期達(dá)到延緩藥物釋放時(shí)間、延長(zhǎng)峰值血藥濃度時(shí)間、減少臨床給藥次數(shù)及改善藥物適口性的目的，從而克服和彌補(bǔ)傳統(tǒng)恩諾沙星制劑的不足，同時(shí)為恩諾沙星脂質(zhì)納米乳劑的研發(fā)和臨床應(yīng)用提供參考。

［1］ 劉小艷，吳海坤，方炳虎，等.恩諾沙星混懸液在豬體內(nèi)殘留消除規(guī)律研究［J］.動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展，2011，32(5):89 －93.

［2］ 曾振靈，馮淇輝.恩諾沙星對(duì)大腸桿菌感染豬的藥動(dòng)學(xué)及藥效學(xué)研究［J］.中國農(nóng)業(yè)科學(xué)，1997，30(6):10 －15.

［3］ Muller R H，Mader K，Gohla S.Solid lipid nanoparticles(SLN)for controlled drug delivery － A review of the state of the art［J］.Eur J Pharm Biopharm，2000，50(1):161 －177.

［4］ 龔露旸，楊先樂，胡 鯤.恩諾沙星納米粒的制備及穩(wěn)定性研究［J］.安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，37(5):2019 －2021.

［5］ Shuyu Xie，SiLiang Wang，BaoKai Zhao，et al.Effect of PLGA as a polymeric emulsifer on preparation of hydrophilic proteinloaded solid lipid nanoparticles［J］.Colloids and Surfaces B:Biointerfaces，2008，67:199 －204.

［6］ Shuyu Xie，Luyan Zhu，Zhao Dong，et al.Preparation，characterization and pharmacokinetics of enrofloxacin－loaded solid lipid nanoparticles:Influences of fatty acids［J］.Colloids and Surfaces B:Biointerfaces，2011，83:382 －387.

［7］ Nielsen P，Gyrd － hansen N.Bioavailability of enrofloxacin after oral administration to fed and fasted pigs［J］.Pharmaeology ＆Toxieology，1997，80:246 －250.

［8］ 汪文選，陳 琛，盧彤巖，等.恩諾沙星對(duì)鯽魚血液生理生化指標(biāo)的影響［J］.水產(chǎn)學(xué)雜志，2009，22(4):20 －22.

［9］ 姜 勝，馬 昆，于世明，等.小型豬特異性麻醉頡頏劑對(duì)小型豬肝腎功能的影響［J］.中國獸醫(yī)雜志，2012，48(1):18 －20.

［10］陳志虹，郭世寧，孔德勝，等.中草藥添加劑對(duì)育肥豬生長(zhǎng)性能及血液生化指標(biāo)的影響［J］.中國獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2011，31(10):1523－1525.

［11］石芙蓉.野豬和雜種豬血清淀粉酶活性的測(cè)定［J］.四川畜牧獸醫(yī)，2008，4:26.

［12］王愛華，于嘉屏，許紹輝，等.慢性腎功能不全患者血清淀粉酶及其同工酶的變化［J］.第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)，1995，16(5):499－500.

［13］高露姣，施兆鴻，艾春香.不同脂肪源對(duì)施氏鱘幼魚血清生化指標(biāo)的影響［J］.海洋漁業(yè)，2005，27(4):319 －323.

［14］ Vaneutsem P M，Babish J G，Sehwark W S.The fluoroquinolone antimicrobials:Structure，antimicrobial activity，pharmacokinetics，clinical use in domestic animals and toxicity［J］.Cornell Veterinary，1990，80:86 －173.