陳啟友，廖雪玲，趙永達，楊 剛，方秋華，章 敏，黃顯會

(1.湖南省獸藥飼料監(jiān)察所，長沙 410006;2.上海公誼獸藥廠，上海奉賢 201401;3.華南農業(yè)大學獸醫(yī)學院/國家殘留基準實驗室，廣州 510642)

頭孢噻呋是畜禽專用第3代頭孢菌素，具有抗菌譜廣、抗菌活性強的特點，對革蘭氏陽性菌、陰性菌及一些厭氧菌都有很強的抗菌活性，目前已被美國、日本和歐洲一些國家正式批準用于肉牛、奶牛、馬、豬、羊、雞等細菌性疾病，如豬細菌性呼吸道感染和雞的大腸桿菌、沙門氏菌的感染等方面的治療，顯示了廣闊的應用前景［1－2］。

近幾年，新型獸藥的應用極大地促進了養(yǎng)殖業(yè)的發(fā)展，產生了巨大的經濟效益和社會效益。頭孢噻呋因其顯著的療效，被諸多企業(yè)開發(fā)。本文進行了兩種頭孢噻呋注射液在豬體內的比較藥動學研究，為獸醫(yī)臨床用藥提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 試驗動物 12頭健康的杜洛克×長白×約克夏雜交豬，公母各半，體重(26.39 ±2.83)kg，購自廣東省原種豬場。按常規(guī)飼養(yǎng)，自由飲水和采食，飼料為全價日糧，不含任何抗菌藥物。臨床觀察兩周表現(xiàn)健康。試驗前16 h起及給藥后4 h期間禁食，僅自由飲水。

1.2 藥品與試劑 供試藥品:長效鹽酸頭孢噻呋注射液，含量10%(100 mL:10 g)，批號100720，由上海公誼獸藥廠提供。對照藥品:鹽酸頭孢噻呋注射液(速解靈注射液)，含頭孢噻呋5%(100 mL:5 g)，批號:0A4SM，美國輝瑞(動物保健品)有限公司生產。頭孢噻呋對照品:含量87.5%，批號:K0330406，中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。二硫赤蘚糖醇(DTE):批號BM0462－2，SIGMA公司。碘乙酰胺(Iodoacetamide):批號 I6125，SIGMA公司。乙腈:色譜純，德國CNW公司。水:符合GB/T6682規(guī)定的二級水。其他試劑均為國產分析純。

1.3 儀器設備 美國Waters公司超高效液相色譜儀(配紫外檢測器、四元泵、脫氣泵、自動進樣器、柱溫箱等);電子分析天平:FA2004N型，上海精密科學儀器有限公司。旋渦混合儀:XW－80A型，上海青浦瀘西儀器廠。高速離心機:美國Thermo公司。軌道式搖床:KS501digital型，德國IKA公司;MCX小柱:MCX BondElut Varian 1CC 100MG，批號171069，德國CNW公司。

1.4 給藥與血樣采集 12頭豬隨機分為兩組，每組6頭，分別進行肌注長效鹽酸頭孢噻呋注射液(上海公誼)和肌注速解靈注射液(美國輝瑞)，給藥劑量均為5 mg/kg。豬只仰臥保定，分別于頸部肌肉注射，給藥前采一次空白血。肌肉(頸部)注射給藥后分別于 5、10、15、30 min 及 1、2、3、4、6、8、12、16、24、36、48、60、72、96、120、144、168、192 h 采集血樣，每次約5 mL，置于含肝素的離心管中，4000 r/min離心10 min，分離血漿，－20℃冰箱保存，待測。

1.5 血漿樣品預處理 血漿樣品自然解凍，搖勻。準確量取血漿1.0 mL于15 mL離心管中，加入2.5 mL DTE工作液，漩渦混合1 min，50℃水浴振蕩20 min;放置室溫下降溫;加入1 mL碘乙酰胺工作液，旋渦10 s，用錫紙包好置于恒溫震蕩培養(yǎng)箱中30℃200 r/min培育30 min;加200 μL 20%的磷酸酸化后，加2.5 mL水混合均勻;7000 g離心20 min;取上清液備用。

往MCX小柱中依次加入3 mL色譜甲醇，3 mL水活化凈化小柱，棄去流出液;加入上述上清液，棄去流出液;再依次加入3 mL水，3 mL甲醇淋洗，真空抽干4 min;加入1 mL 1 mol/L醋酸胺:乙腈(85+15，V/V)混合液洗脫;將洗脫液用 0.22 μm微孔濾膜濾過，上UPLC儀測定。

1.6 色譜條件 色譜柱:Waters ACQUITY BEH RP18(2.1 mm ×50 mm，1.7 μm)，柱溫:25 ℃，紫外檢測器，檢測波長:265 nm，流速:0.5 mL/min，進樣量:10 μL，流動相:0.2%三氟乙酸(A)+乙腈(B)，梯度洗脫，見表1。

表1 流動相梯度洗脫條件

1.7 數(shù)據處理與統(tǒng)計分析 采用美國Pharsight公司藥動學軟件 Winnonlin5.2.1的非房室模型來處理藥動數(shù)據，計算出每頭試驗豬的藥動學參數(shù)，然后計算平均值()及標準差(s)，同時以血藥濃度平均值對時間作藥－時曲線圖。所得藥動學參數(shù)，采用SPSS 16.0進行t檢驗，顯著性水平為0.05。

2 結果

2.1 色譜條件適用性 在本試驗建立的色譜條件下，基線平穩(wěn)，頭孢噻呋衍生物去呋喃羰基頭孢噻呋乙酰胺(DCA)與血漿中組分分離良好，DCA的色譜峰保留時間分別為3.29 min左右。本方法可獲得較好的峰形，保留時間穩(wěn)定(圖1)。

圖1 頭孢噻呋衍生化UPLC色譜圖

2.2 標準曲線和檢測限 經UPLC測定，以峰面積(A)對藥物濃度(C)回歸，得回歸方程 A=25247C+269.12，r=0.9992。頭孢噻呋衍生物去呋喃羰基頭孢噻呋乙酰胺與頭孢噻呋添加量之間在0.05～20 μg/mL范圍內線性關系良好。檢測限數(shù)據滿足藥動學研究要求。在上述條件下，頭孢噻呋的檢測限為0.02 μg/mL。血漿中頭孢噻呋的平均回收率76.63% ～93.61%，本方法批內變異系數(shù)為1.46% ～7.37%，批間變異系數(shù)為6.16% ～8.05%。

2.3 回收率測定 頭孢噻呋在添加濃度0.1、1、10 μg/mL的平均回收率分別為(92.37±4.30)%、(76.63% ±4.94)%、(93.61% ±7.54)%(n=5)，方法回收率高，符合生物樣品測定要求。

2.4 精密度測定 0.1、1、10 μg/mL 頭孢噻呋藥物濃度的日內RSD均小于8%，日間RSD均小于9%(表2)，符合精密度要求，測定方法可靠。

2.5 血漿中的藥物濃度和主要動力學參數(shù) 肌肉注射頭孢噻呋注射液和速解靈注射液后，血藥濃度－時間曲線圖見圖2。

表2 頭孢噻呋在豬血漿中UPLC色譜分析的變異系數(shù)(n=6)

圖2 兩種鹽酸頭孢噻呋注射液豬單劑量(5 mg/kg)肌注后血漿藥-時曲線

豬單劑量肌注頭孢噻呋注射液和肌注速解靈注射液的藥時數(shù)據最佳模型為非房室模型，頭孢噻呋注射液和肌注速解靈注射液后藥動學參數(shù)見表3。

表3 兩種頭孢噻呋注射液主要藥動學參數(shù)比較

通過表3中的各項平均藥動學參數(shù)可以看到，健康豬肌注長效鹽酸頭孢噻呋注射液5 mg/kg后，吸收較慢，注射給藥后11.67 h，血藥濃度達峰值，Cmax為8.16 μg/mL。血漿中平均消除半衰期(t1/2)為20.05 h;AUC 為 292(μg·h)/mL，平均滯留時間(MRT)為31.7 h;肌注速解靈注射液5 mg/kg后，吸收迅速，肌肉注射給藥后2.67 h，血藥濃度達峰值，Cmax為21.92 μg/mL，t1/2為 18.31 h;AUC 為 296.83(μg·h)/mL，MRT 為17.76 h。

3 討論與結論

3.1 最佳房室模型的選擇 根據國外已有報道，頭孢噻呋的藥動學數(shù)據大都采用非房室模型分析［3－17］。采用 3P97藥物動力學參數(shù)計算程序，Marquardt法對一、二、三房室分別以權重1、1/C、1/C2等3種情況進行計算，AIC值愈小，則認為該模型擬合愈好［18］。在微機電腦上處理實測血漿頭孢噻呋血藥濃度－時間數(shù)據，結果顯示，頭孢噻呋注射液和肌注速解靈注射液的血藥濃度數(shù)據均不能擬合出合適的生理模型。因此采用非房室模型的分析方法，計算出有關藥物動力學參數(shù)。

3.2 肌注長效鹽酸頭孢噻呋注射液藥動學特征經肌肉注射給藥結果表明，健康豬肌注長效鹽酸頭孢噻呋注射液5 mg/kg后，吸收較慢，給藥后11.67 h，血藥濃度達峰值，與 Brown 等［4］的研究結果(tmax=0.33 h)相比，達峰時間顯著延長;但達峰濃度遠低于Brown的研究結果(28.3 μg/mL)。與胡振英等［19］的研究結果相比，本試驗研究表明長效頭孢噻呋注射液具有較長的半衰期，較胡振英研究結果(14.64 h)長7 h。長效頭孢噻呋注射液的藥動學參數(shù)與文獻報道相似［20］。長效頭孢噻呋注射液的相對生物利用度為98.41%，說明國產長效頭孢噻呋注射液與進口產品生物利用度相當。本試驗結果表明上海公誼獸藥廠研制的長效頭孢噻呋注射液峰濃度有所降低，但達峰時間和半衰期均延長，表明具有緩釋作用，能更好的起到動物疾病的防治效果。

3.3 肌注速解靈注射液的藥動學特征 通過對長效鹽酸頭孢噻呋注射液和速解靈注射液(輝瑞)藥動學研究，藥動參數(shù)經 t檢驗，MRT、Cmax、tmax存在極顯著性差異(P＜0.01)，表明健康豬肌注長效鹽酸頭孢噻呋注射液(5 mg/kg)與肌注速解靈注射液相比，長效鹽酸頭孢噻呋注射液單劑量肌注給藥吸收較慢，達峰時間顯著延遲，達峰濃度顯著降低，平均駐留時間顯著延長，參數(shù)AUC、Kel、t1/2統(tǒng)計無顯著性差異(P＞0.05)，長效鹽酸頭孢噻呋注射液與肌注速解靈注射液的生物利用度相當。

3.4 長效頭孢噻呋注射液臨床給藥方案的建議健康豬肌注長效鹽酸頭孢噻呋注射液5 mg/kg后，在 72 h 平均血藥濃度達 0.88 μg/mL，120 h 達0.2 μg/mL，144 h仍可檢測到藥物。肌注速解靈注射液5 mg/kg后，在72 h 平均血藥濃度為0.36 μg/mL，120 h血藥濃度已經低于定量限，144 h檢測不到藥物。結果表明，健康豬肌注長效鹽酸頭孢噻呋注射液(5 mg/kg)有效血藥濃度維持時間更長，對臨床敏感菌感染，可用長效鹽酸頭孢噻呋注射液肌內注射，每kg體重5 mg，每2 d給藥1次，連續(xù)給藥2次。

本研究進行了國產頭孢噻呋注射液與進口頭孢噻呋注射液的比較藥動學研究，通過研究發(fā)現(xiàn)，國產藥物與進口藥物生物利用度相似。

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