馬涵濤，沈新倫，杜雄軍

（1.河南科技大學第一附屬醫(yī)院，河南洛陽471003；2.湖北福人金身藥業(yè)有限公司，湖北咸寧 437100；3.湖北福人藥業(yè)股份有限公司，湖北通城 437400）

HPLC-ELSD法測定補心氣口服液中黃芪甲苷的含量

馬涵濤1＊，沈新倫2，杜雄軍3

（1.河南科技大學第一附屬醫(yī)院，河南洛陽471003；2.湖北福人金身藥業(yè)有限公司，湖北咸寧 437100；3.湖北福人藥業(yè)股份有限公司，湖北通城 437400）

目的：建立測定補心氣口服液中黃芪甲苷含量的方法。方法：采用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測（HPLC-ELSD）法。色譜柱為十八烷基硅烷鍵合硅膠柱，流動相為乙腈-水（35∶65），流速為1.0 mL·min－1，柱溫為常溫，進樣量為20μL，蒸發(fā)光散射檢測器的載氣（空氣）流速為2.50 L·min－1，蒸發(fā)溫度為90℃，霧化溫度為50℃。結果：黃芪甲苷進樣量在1～22μg范圍內的自然對數值與峰面積積分值的自然對數值呈良好的線性關系（r＝0.999 7）；平均回收率為97.13%，RSD＝2.65%（n＝6）。結論：該方法簡便、準確、重復性好，適用于補心氣口服液的質量控制。

補心氣口服液；黃芪甲苷；高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測法；含量測定

補心氣口服液是由黃芪、石菖蒲、人參、薤白4味中藥制成的復方成藥，具有補益心氣、理氣止痛的功效，用于氣短、心悸、乏力、頭暈等心氣虛損型胸痹心痛的治療。黃芪甲苷是該方君藥黃芪的主要有效成分，通過測定黃芪甲苷含量，能夠更好地控制該制劑的內在質量。為此，筆者參考有關文獻[1-3]，采用高效液相色譜-蒸發(fā)光散射檢測（HPLC-ELSD）法，建立了測定補心氣口服液中黃芪甲苷含量的方法。

1 儀器與試藥

P230 HPLC儀（大連依利特分析儀器有限公司）；PLELS2100蒸發(fā)光散射檢測器（英國Polymer Laboratories公司）；AUW120D電子天平（日本島津公司）

黃芪甲苷對照品（中國食品藥品檢定研究院提供，批號：110781-200512）；補心氣口服液（湖北福人金身藥業(yè)有限公司生產，批號：20050112，20061016，20061017，20061018，20061117，20061118，20061119，20061202，20061203，20061204）；甲醇為色譜純，其他試劑為分析純，水為重蒸餾水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠柱（150 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相：乙腈-水（35∶65）；流速：1.0 mL·min－1；柱溫：常溫；進樣量：20μL；蒸發(fā)光散射檢測器的載氣（空氣）流速：2.50 L·min－1；蒸發(fā)溫度：90℃；霧化溫度：50℃。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備 精密稱取黃芪甲苷對照品適量，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 精密量取補心氣口服液樣品20 mL，用水飽和的正丁醇振搖提取5次，每次25 mL，合并正丁醇提取液，用氨試液洗滌3次，每次20 mL，正丁醇提取液回收溶劑至干，殘渣轉移至10 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過，即得。

2.2.3 陰性對照溶液的制備 按處方工藝制備缺黃芪藥材的陰性樣品，按“2.2.2”項下方法操作，即得。

2.3 干擾試驗

取對照品溶液、供試品溶液和陰性對照溶液各10μL，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖。結果，陰性對照在對照品和供試品出峰的相應位置無干擾峰，表明處方中其他成分對黃芪甲苷的含量測定無影響。色譜見圖1。

圖1 高效液相色譜圖A.對照品；B.供試品；C.陰性對照；1.黃芪甲苷Fig 1 HPLC chromatogramsA.substance control；B.test sample；C.negative control；1.astragalosideⅣ

2.4 線性關系考察

精密稱取黃芪甲苷對照品49.8 mg，置于25 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，備用（黃芪甲苷濃度為1.992 mg·mL－1）。精密吸取上述溶液0.25、0.5、1.5、2.5、3.5、4.5、5.5 mL，置于10 mL量瓶中，用甲醇定容，搖勻，各進樣20μL，記錄色譜圖。以對照品峰面積的自然對數值（Y）為縱坐標，以進樣量（μg）的自然對數值（X）為橫坐標，進行線性回歸，得回歸方程Y＝1.532 3X+4.726 8（r＝0.999 7）。結果表明，黃芪甲苷進樣量在1～22μg范圍內的自然對數值與峰面積積分值的自然對數值呈良好的線性關系。

2.5 精密度試驗

精密吸取“2.2.1”項下對照品溶液20μL，重復進樣5次，測定峰面積。結果，黃芪甲苷峰面積的RSD＝1.90%，表明精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗

取同一批樣品（批號：20050112）適量，按“2.2.2”項下方法制成供試品溶液，分別于0、1、2、3、4、5 h進樣測定峰面積。結果，黃芪甲苷峰面積的RSD＝2.03%，表明5 h內供試品溶液穩(wěn)定性良好。

2.7 重復性試驗

取同一批樣品（批號：20050112）適量，分別按“2.2.2”項下方法制成5份供試品溶液，分別進樣測定含量。結果，RSD＝0.42%，表明本方法重復性好。

2.8 加樣回收率試驗

精密量取已知含量的同一批樣品（批號：20050112）6份，每份10 mL，精密加入黃芪甲苷溶液（濃度為0.508 mg·mL－1）8 mL，按“2.9”項下方法和“2.1”項下色譜條件測定含量，計算回收率，結果見表1。

表1 加樣回收率試驗結果（n＝6）Tab 1 Results of recovery test（n＝6）

2.9 樣品含量測定

分別精密吸取“2.2.1”項下對照品溶液10、20μL及供試品溶液20μL，按“2.1”項下色譜條件測定，以外標兩點法對數方程計算黃芪甲苷的含量，結果見表2。

表2 樣品含量測定結果（n＝3）Tab 2 Results of content determination of samples（n＝3）

3 討論

在樣品提取過程中，考察了水飽和的正丁醇的提取次數和氨試液洗滌的次數。通過比較，確定用水飽和的正丁醇振搖提取5次，氨試液洗滌3次，效果較佳，能夠將樣品中的黃芪甲苷提取完全，且操作過程中黃芪甲苷沒有損失。

本試驗選擇了不同的流動相進行考察，包括乙腈-水-四氫呋喃（33∶65∶4）、甲醇-水（1∶1）、乙腈-水（35∶65）等，其中乙腈-水（35∶65）出峰時間、峰的分離度、峰形都比較好，因此選擇乙腈-水（35∶65）作為本試驗的流動相。

本方法簡便、準確、重復性好，適用于補心氣口服液的質量控制。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（一部）[S].2010年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：213.

[2] 張開蓮，凌立新，楊思進.HPLC-ELSD法測定心安顆粒中黃芪甲苷的含量[J].中國藥房，2009，20（24）：1 884.

[3] 趙靈芝，朱丹妮，嚴永清.HPLC-ELSD法測定黃芪中黃芪甲苷的含量[J].藥物分析雜志，1999，19（6）：403.

Content Determination of AstragalosideⅣin Buxinqi Oral Solution by HPLC-ELSD

MA Han-tao
（The First Affiliated Hospital of Henan University of Science and Technology，Henan Luoyang 471003，China）
SHEN Xin-lun
（Hubei Furen Jinshen Medicinal Limited Company，Hubei Xianning 437100，China）
DU Xiong-jun
（Hubei Furen Medicinal Co.，Ltd.，Hubei Tongcheng 437400，China）

OBJECTIVE：To establish the method for the content determination of astragalosideⅣ in Buxinqi oral solution.METHODS：HPLC-ELSD method was adopted.The separation was performed on Kromasil ODS C18column with mobile phase consisted of acetonitrile-water（35∶65）at the flow rate of 1.0 mL·min－1.The column temperature was room temperature and injection volume was 20μL.The flow rate of carrier gas（air）of ELS detector was 2.50 L·min－1.The evaporating temperature was 90℃ and atomizing temperature was 50℃.RESULTS：The linear range of astragalosideⅣ was 1～22μg（r＝0.999 7）with an average recovery of 97.13%（RSD＝2.65%，n＝6）.CONCLUSION：The method is simple，accurate and reproducible，and it can be used for the quality control of Buxinqi oral solution.

Buxinqi oral solution；AstragalosideⅣ；HPLC-ELSD；Content determination

R917

A

1001-0408（2012）36-3444-02

DOI 10.6039/j.issn.1001-0408.2012.36.33

2012-05-06

2012-08-15）