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        井穴放血和薏苡仁對腦缺血大鼠腦水腫影響的實驗研究*

        2012-11-24 06:37:36杜元灝李中正田力欣
        針灸臨床雜志 2012年3期
        關(guān)鍵詞:差異模型

        高 靚,杜元灝,李中正,田力欣,郭 義△

        (1.天津中醫(yī)藥大學(xué),天津300193;2.天津中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院,天津300193)

        腦血管病已成為目前人類疾病的3大死亡原因之一,腦水腫是腦血管病的嚴(yán)重并發(fā)癥,對于腦水腫的治療,目前主要限于滲透性利尿或手術(shù)減壓,副作用較大。課題組在前期工作中發(fā)現(xiàn),井穴放血和中藥薏苡仁提取液對大鼠缺血損傷后的腦水腫有改善作用。本研究旨在進(jìn)一步探索井穴放血及薏苡仁提取液對腦缺血損傷后大鼠存活率、存活時間及腦水腫的作用規(guī)律。為針灸及中藥在缺血性腦病的中早期介入提供實驗依據(jù)。

        1 材料與方法

        1.1 實驗動物與藥品

        實驗選用成年健康的Sprague-Dawley雄性大鼠,毛色光亮,體重250~300 g,月齡2~3月齡,由中國北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司提供(許可證編號:SCXK(京)2007-0001)。飼養(yǎng)于實驗室動物房籠具內(nèi)(紹豐SIM型、SIR型獨立換氣系統(tǒng)籠具),溫度(22±2)℃,濕度 ≧40%。動物的飼養(yǎng)和使用符合國際動物倫理法案的相關(guān)動物福利要求。自由進(jìn)食、飲水。注射用薏苡仁提取液100 ml(與生藥比例為1∶5),由天津中醫(yī)藥大學(xué)中藥實驗室提供,批號:090418。

        1.2 實驗方法

        1.2.1 動物模型的制備、分組及干預(yù)

        選用雄性SD大鼠,在SPSS 11.5版本統(tǒng)計軟件中生成隨機數(shù)字表,將動物隨機分為正常組、假手術(shù)組、模型組和3個治療組,即:井穴放血組、薏苡仁組和井穴放血加薏苡仁組。實驗周期為48 h。

        動物模型制備方法參照Longa法[1],假手術(shù)組只暴露血管不進(jìn)行模型制作。根據(jù)人與動物體表面積折算的等效劑量比值計算方法[2],參照成人薏苡仁用量[3]及提取注射液與生藥比例(為1∶5)確定薏苡仁注射液每日用量為0.81 ml/100 g體重,大鼠尾靜脈注射給藥,每日治療3次。井穴放血組采用比較解剖學(xué)參考人體有關(guān)中醫(yī)穴位的定位取位于大鼠雙側(cè)前后肢趾端的十二“井穴”(除去“涌泉穴”),使用三棱針針具,左手固定針刺部位,右手拇、食指夾持固定針柄,中指指腹抵住針身末端,將三棱針直刺入皮膚,深度限定在1 mm,刺入后立即出針,出血量為每穴15~20 μl,每日治療3次,前后肢交替進(jìn)行。井穴放血加薏苡仁組綜合使用井穴放血法和薏苡仁提取液尾靜脈注射法,每日治療3次。

        1.2.2 觀察指標(biāo)

        存活率及存活時間的計算:統(tǒng)計各組大鼠48 h存活率并記錄各組未存活到48 h的死亡大鼠的存活時間。

        腦組織含水量測定:大鼠處死取腦后,沿腦橋上界水平切斷,棄去小腦及雙側(cè)嗅球,將剩余腦組織沿中線切開,濾紙吸干表面水分,分別稱取左右兩側(cè)濕重,恒溫烤箱110℃烘干至恒重后稱取干重,腦組織含水量=(濕重-干重)/濕重×100%。

        腦系數(shù)測定:腦系數(shù)=全腦濕重/動物體重×100%,右腦腦系數(shù)=右腦濕重/動物體重×100%,左腦腦系數(shù)=左腦濕重/動物體重×100%。

        1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

        數(shù)據(jù)采用SPSS11.5統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析,實驗結(jié)果以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示,存活率采用χ2檢驗,組內(nèi)左右兩側(cè)比較采用配對t檢驗,各組間比較采用單因素方差分析。

        2 結(jié)果

        2.1 實驗動物存活率及存活時間

        至48 h時,模型組動物死亡率過半。各治療組存活率皆有升高的趨勢。井穴放血加薏苡仁組的存活率最高,比模型組提高了17.14個百分點。見表1。運用χ2檢驗,井穴放血組、薏苡仁組、井穴放血加薏苡仁組與模型組相比均無統(tǒng)計學(xué)差異。

        表1 各組實驗動物存活率(%)

        比較各組死亡大鼠存活時間:與模型組相比,井穴放血組、薏苡仁組、井穴放血加薏苡仁組死亡大鼠存活時間均長于模型組,有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01)。見表2。

        表2 不同干預(yù)措施對MCAO大鼠存活時間的影響(±s)

        表2 不同干預(yù)措施對MCAO大鼠存活時間的影響(±s)

        注:與模型組比較,**P<0.01。

        組別 死亡數(shù) 存活時間(h)模型組(M) 9 22.2333±3.5711井穴放血組(W-B) 6 28.9500±3.8688**薏苡仁組(H-Y) 6 29.4119±2.2696**井穴放血加薏苡仁組(B+Y) 6 29.8685±2.8926**

        2.2 腦組織含水量測定

        左右兩側(cè)腦含水量比較:正常組、假手術(shù)組左右兩側(cè)腦含水量大致相等,無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05);模型組右側(cè)腦含水量明顯增高,左右兩側(cè)腦含水量相比有極顯著的統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01),說明右側(cè)腦水腫嚴(yán)重,造模成功;經(jīng)各組治療后,井穴放血組、薏苡仁組左右兩側(cè)腦含水量相比較仍有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05),但差異已不明顯,提示右側(cè)腦水腫有所改善;井穴放血加薏苡仁組左右兩側(cè)腦含水量相比,已無顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05),提示右側(cè)腦水腫得到明顯改善。見表3。

        表3 不同干預(yù)措施對MCAO大鼠腦含水量的影響(±s)

        表3 不同干預(yù)措施對MCAO大鼠腦含水量的影響(±s)

        注:與左腦含水量比較,*P<0.05,**P<0.01;與模型組相比較,Δ P<0.05,ΔΔP<0.01;與正常組相比較,##P<0.01。

        組別(例數(shù)) 右腦腦含水量(%) 左腦腦含水量(%)正常組 N(6) 79.3964±0.1391ΔΔ 79.2749±0.1416假手術(shù)組 S(9) 79.3362±0.3073ΔΔ 79.3171±0.3602模型組 M(6) 85.0850±0.3672##** 79.9518±0.2178##井穴放血組 W-B(7) 82.1358±1.6612Δ* 79.6049±0.5382薏苡仁組 H-Y(7) 82.0249±1.6960Δ* 79.6492±0.6401井穴放血加薏苡仁組 B+Y(8) 81.2794±1.8009ΔΔ 79.6474±0.3681

        各組間右腦腦含水量比較:模型組顯著高于正常組和假手術(shù)組,有極顯著的統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01),說明造模后右腦含水量明顯增高,水腫嚴(yán)重,造模成功;經(jīng)治療后,井穴放血組、薏苡仁組腦含水量低于模型組,有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05),且與正常組相比較已無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05),提示右側(cè)腦水腫得到了明顯改善;井穴放血加薏苡仁組腦含水量低于模型組,有極顯著的統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01),且與正常組相比較已無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05),提示右側(cè)腦水腫得到了明顯改善,效果優(yōu)于井穴放血組和薏苡仁組。見表3。

        2.3 腦系數(shù)測定

        左右兩側(cè)腦系數(shù)比較:正常組、假手術(shù)組左右兩側(cè)腦系數(shù)大致相等,無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05);模型組右腦腦系數(shù)明顯增高,左右兩側(cè)腦系數(shù)相比有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05),說明右側(cè)腦水腫嚴(yán)重,造模成功;各治療組經(jīng)干預(yù)后,左右兩側(cè)腦系數(shù)相比較已無顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05),提示右側(cè)腦水腫得到明顯改善。見表4。

        各組間右腦腦系數(shù)比較:正常組、假手術(shù)組右腦腦系數(shù)均低于模型組,有極顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01),表明造模后腦水腫嚴(yán)重,造模成功;經(jīng)治療后,井穴放血組和薏苡仁組右腦腦系數(shù)均低于模型組,有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01),說明井穴放血和薏苡仁對腦水腫有改善作用,但與正常組相比,仍存在統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05);井穴放血加薏苡仁組右腦腦系數(shù)低于模型組,有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01),并且與正常組相比已無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05),說明井穴放血加薏苡仁組對腦水腫有明顯改善作用。見表4。

        各組間腦系數(shù)值比較:正常組、假手術(shù)組腦系數(shù)值均低于模型組,有極顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01),表明造模后腦水腫嚴(yán)重,造模成功;經(jīng)治療后,各治療組腦系數(shù)值均低于模型組,有顯著統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.01),并且和正常組相比已無統(tǒng)計學(xué)差異,說明各治療組對腦水腫均有改善作用。見表4。

        表4 不同干預(yù)措施對MCAO大鼠腦系數(shù)的影響(±s)

        表4 不同干預(yù)措施對MCAO大鼠腦系數(shù)的影響(±s)

        注:與左腦腦系數(shù)比較,*P<0.05;與模型組比較,ΔΔP<0.01;與正常組比較,#P<0.05,##P<0.01

        組別(例數(shù)) 右腦腦系數(shù)(%) 左腦腦系數(shù)(%) 腦系數(shù)(%)正常組 N(6) 0.2673±0.0082ΔΔ 0.2685±0.0055 0.5358±0.0126ΔΔ假手術(shù)組 S(9) 0.2684±0.0070ΔΔ 0.2698±0.0064 0.5430±0.0157ΔΔ模型組 M(6) 0.3145±0.0160*## 0.2894±0.0074 0.6098±0.0294##井穴放血組 W-B(7) 0.2836±0.0132ΔΔ# 0.2737±0.0186 0.5647±0.0355ΔΔ薏苡仁組 H-Y(7) 0.2811±0.0112ΔΔ# 0.2713±0.0227 0.5611±0.0355ΔΔ井穴放血加薏苡仁組 B+Y(8) 0.2802±0.0120ΔΔ 0.2711±0.0112 0.5578±0.0279ΔΔ

        3 討論

        腦梗死是臨床常見病,具有發(fā)病率高、死亡率高、致殘率高和復(fù)發(fā)率高的“四高”特點[4]。腦水腫是腦梗死嚴(yán)重并發(fā)癥,水腫所致腦疝是該病重要死亡原因,減輕腦水腫對該病的治療及預(yù)后有重要意義。

        本課題組多年的研究證明[5~10],井穴放血可使中風(fēng)初期損傷面積小的患者意識狀態(tài)好轉(zhuǎn),對中風(fēng)患者的腦血流有雙向良性調(diào)整作用,可使急性局灶性腦缺血模型大鼠缺血區(qū)局部腦組織O2分壓升高、H+濃度降低,阻止胞外Ca2+內(nèi)移,減小細(xì)胞外液中K+濃度上升和Na+濃度下降,維持細(xì)胞離子穩(wěn)態(tài),緩解細(xì)胞毒性水腫的發(fā)生與發(fā)展,可能對腦水腫有改善作用。在前期工作中發(fā)現(xiàn),與模型組和其他治療組相比,薏苡仁治療組能降低大鼠的死亡率,延長大鼠的存活時間,對缺血性腦水腫有一定的改善作用,且對腦缺血損傷后的神經(jīng)細(xì)胞有一定的保護作用。

        基于本課題組多年的研究基礎(chǔ),本實驗采用大鼠大腦中動脈栓塞(MCAO)所致缺血性腦水腫模型,井穴放血、薏苡仁提取液靜脈注射及井穴放血加薏苡仁提取液靜脈注射組大鼠的存活率、存活時間均明顯高于模型組,腦含水量、腦系數(shù)均明顯低于模型組,說明井穴放血和薏苡仁提取液靜脈注射有提高腦缺血后大鼠48 h存活率的趨勢,對腦缺血后48 h內(nèi)死亡大鼠的存活時間有一定的延長作用,對缺血性腦水腫有一定的改善作用,且兩者合用療效優(yōu)于單用一種。

        井穴放血法是中醫(yī)經(jīng)典急救中風(fēng)的傳統(tǒng)針灸療法的一種,在中國有著廣泛的臨床基礎(chǔ)和“簡便驗廉”的優(yōu)勢特點。本實驗井穴放血法對模型大鼠存活率、存活時間及腦水腫有積極作用,其可能的機理是:該療法能調(diào)節(jié)細(xì)胞外K+、Na+失衡,改變局部微循環(huán)血量,改變血液性狀和血流速度,從而影響了血管通透性,調(diào)節(jié)了體液循環(huán)[11],促進(jìn)腦血流的改善,緩解腦組織的缺血缺氧狀況,使皮質(zhì)缺血區(qū)的內(nèi)環(huán)境發(fā)生良性改變,從而抑制了腦水腫的發(fā)展[5,7,12~15]。

        薏苡仁的現(xiàn)代藥理研究顯示,其提取物有抗腫瘤、增強免疫、降血糖、解熱鎮(zhèn)痛抗炎、抑制胰蛋白酶作用[16~20],臨床可治療多種惡性腫瘤、肥胖癥、急性咽喉炎、婦女排卵異常、扁平疣、帶狀皰疹、尿路結(jié)石、糖尿病等[21]。在薏苡仁鎮(zhèn)痛抗炎抗血栓作用的研究中[20],其醇提物可對抗二甲苯引起的小鼠耳腫和角叉菜膠引起的小鼠足跖腫脹,輕度抑制乙酸引起的小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高,能延長電刺激動脈血栓形成時間和凝血時間。本實驗薏苡仁對模型大鼠存活率、存活時間及腦水腫的影響可能與此機制有關(guān)。

        本實驗在一定程度上證實了井穴放血和中藥薏苡仁對缺血性腦水腫可有一定療效。為針灸及中藥在缺血性腦病的中早期介入提供了一定的實驗依據(jù),值得進(jìn)一步深入研究。

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        [8]何樹泉,郭義,馬巖番,等.手十二井穴刺絡(luò)放血對實驗性腦缺血大鼠缺血區(qū)H+濃度影響的實驗研究[J].針灸臨床雜志,2002,18(2):43-44

        [9]郭義,胡利民.手十二井穴刺絡(luò)放血對實驗性腦缺血大鼠缺血區(qū)胞外Ca2+濃度影響的動態(tài)觀察[J].針灸臨床雜志,1999,15(6):48

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