彭運生，孫順昌，陳群蓉，謝春英，王 清

（深圳市寶安區(qū)人民醫(yī)院 檢驗科，廣東 深圳518101）

β－珠蛋白生成障礙性貧血又稱β－地中海貧血，是由β－珠蛋白基因突變導致β－珠蛋白肽鏈合成減少或缺乏所產(chǎn)生的貧血［1］。β－珠蛋白生成障礙性貧血主要分布在地中海沿岸和東南亞地區(qū)，據(jù)統(tǒng)計全球約有1.5億β－珠蛋白生成障礙性貧血患者［2］。我國長江以南區(qū)域的β－珠蛋白生成障礙性貧血的發(fā)病率也較高，其中以廣東、廣西及海南三省的發(fā)病率最高［3］。依據(jù)貧血程度，β－珠蛋白生成障礙性貧血分為輕型、中間型及重型β－珠蛋白生成障礙性貧血［4］。紅細胞參數(shù)是反映紅細胞大小及血紅蛋白含量的參數(shù)，它包括紅細胞平均容積（mean cell volume，MCV）、紅細胞平均血紅蛋白含量（mean cell hemoglobin，MCH）、紅細胞平均血紅蛋白濃度（mean cell hemoglobin concentration，MCHC）、紅細胞體積分布寬度標準差（red blood cell distribution width－standard deviation，RDW－SD）及紅細胞體積分布寬度變異系數(shù)（red blood cell distribution width－coefficient of variation，RDW－CV）等，這些指數(shù)對珠蛋白生成障礙性貧血的診斷有重要意義［5］。輕型β－珠蛋白生成障礙性貧血是β－珠蛋白基因雜合突變所導致，患者一般無臨床癥狀，通常需實驗室檢查才能確診［6］。本研究以輕型β－珠蛋白生成障礙性貧血患者為研究對象，探討β－珠蛋白基因的突變類型與紅細胞參數(shù)的相關性。

1 資料與方法

1.1 對象 收集深圳地區(qū)中國漢族人群118例輕型β－珠蛋白生成障礙性貧血患者的外周血標本。男性62名，女性56名，年齡為28.1±12.6歲（8～59歲）。輕型β－珠蛋白生成障礙性貧血的診斷及分型標準見文獻報道［7］。前期突變分析顯示所有118例患者均存在β－珠蛋白基因雜合突變，突變類型有7種，其中IVS－II－654（C→T）突變率最高，－28（A→G）突變率最低，其它5種突變依據(jù)突變頻率的高低分別為 codon17（A→T）、codon41／42（－TTCT）、codon71／72（＋A）、codon27／28（＋C）、codon43（G→T）。本研究同時收集110例中國漢族人群體檢健康的個體，男性57例，女性53例，年齡為34.6±14.5歲（21～60歲）。

1.2 方法 用Sysmex XE－2100全自動五分類血液分析儀對患者及健康個體外周靜脈血進行分析。MCV、MCH、MCHC、RDW－SD 及 RDW－CV 通 過儀器自動計算獲得。依據(jù)7種突變類型進行分組，每組患者的各項紅細胞參數(shù)均與全部患者的相同項參數(shù)的均數(shù)進行團體t檢驗。與全部患者參數(shù)有顯著性差異的患者組再與其它患者組進行團體t檢驗。

2 結果

118例輕型β－珠蛋白生成障礙性貧血患者，共存在7種β－珠蛋白基因突變，均為雜合突變。各組患者和正常對照組的紅細胞參數(shù)見表1，與正常對照組相比，輕型β－珠蛋白生成障礙性貧血患者的MCV、MCH、MCHC 及 RDW－SD均降低（P＜0.01），而RDW－CV則高于正常對照組（P＜0.01）。

依據(jù)7種突變類型進行分組，經(jīng)與全部患者的紅細胞參數(shù)進行團體t檢驗，顯示攜帶codon41／42（－TTCT）突變的患者組 MCV、MCH及 MCHC高于其它突變患者組（P＜0.05），而RDW－CV低于其它突變患者組（P＜0.05）。攜帶codon41／42（－TTCT）突變的患者組RDW－SD與其它突變患者組無顯著差異（P＞0.05）。除攜帶codon41／42（－TTCT）突變的患者組外，攜帶其它突變的患者組的各項紅細胞參數(shù)與全部患者相比，各項參數(shù)均無顯著性差異（P＞0.05）。

表1 各類突變患者的紅細胞參數(shù)

3 討論

β－珠蛋白生成障礙性貧血它是由位于第11號染色體上的β－珠蛋白基因突變而導致的β－珠蛋白鏈合成缺陷所致［8］。輕型β－珠蛋白生成障礙性貧血患者可無癥狀或僅輕度貧血，實驗室血紅蛋白電泳檢查時患者的HbA2一般會輕度升高［9］。目前已發(fā)現(xiàn)的β－珠蛋白基因突變有300多種，這些突變在不同地區(qū)和人群中存在著不同的突變熱點，它們所占的比例也不相同［10］。在中國人群中已發(fā)現(xiàn)的β－珠蛋白基因突變約20多種，本研究前期在118例深圳地區(qū)中國漢族人群輕型β－珠蛋白生成障礙性貧血患者中共發(fā)現(xiàn)7種突變，均以雜合狀態(tài)存在，以突變頻率高低依次為IVS－II－654（C→T）、codon17（A→T）、codon41／42（－TTCT）、codon71／72（＋A）、codon27／28（＋C）、codon43（G→T）、－28（A→G）。紅細胞參數(shù)可反映紅細胞大小及血紅蛋白含量，對診斷珠蛋白生成障礙性貧血有參考意義［11］。因此本研究以輕型β－珠蛋白生成障礙性貧血患者為對象，探討β－珠蛋白基因的突變類型與紅細胞參數(shù)的相關性。

依據(jù)突變對β－珠蛋白合成的影響，β－珠蛋白基因突變可分為2類，使β－珠蛋白合成完全缺乏的突變稱為β0突變，使β－珠蛋白合成減少的突變稱為β＋突變［12］。本研究的7種突變中除IVS－II－654（C→T）和－28（A→G）突變?yōu)棣拢蛔兺?，其?種β－珠蛋白基因突變均為β0突變（表2）。從表2各種突變效應推測IVS－II－654（C→T）和－28（A→G）突變引起的表型應輕于其余5種β－珠蛋白基因突變。

β－珠蛋白生成障礙性貧血為小細胞性貧血。與正常對照組相比，本研究118例輕型β－珠蛋白生成障礙性貧血患者的 MCV、MCH、MCHC及RDWSD均降低，這與β－珠蛋白生成障礙性貧血的特征相符。輕型β－珠蛋白生成障礙性貧血患者的RDWCV高于正常對照組，顯示輕型β－珠蛋白生成障礙性貧血為小細胞不均一性貧血。本研究依據(jù)發(fā)現(xiàn)的7種突變類型進行分組，各組患者的紅細胞參數(shù)與全部患者的紅細胞參數(shù)均數(shù)進行比較。結果顯示攜帶codon41／42（－TTCT）突變的患者 MCV、MCH 及MCHC高于其它突變患者，而RDW－CV低于其它突變患者。攜帶codon41／42（－TTCT）突變患者的RDW－SD與其它突變患者無顯著差異。除攜帶codon41／42（－TTCT）突變的患者外，攜帶其它突變的患者組的各項紅細胞參數(shù)與全部患者相比，均無顯著性差異。這顯示codon41／42（－TTCT）突變引起的表型可能輕于其它幾種β－珠蛋白基因突變。β＋與β0突變的區(qū)分并不能解釋codon41／42（－TTCT）突變引起的紅細胞參數(shù)差異。這或許與突變引起的β－珠蛋白C－端氨基酸序列改變有關。因此β－珠蛋白生成障礙性貧血的表型不僅與β－珠蛋白合成量的多少有關，也與β－珠蛋白的序列改變有關。

表2 各類突變的性質

［1］Ghedira ES，Dupin－Deguine D，Duffilot D，et al.A second observation of the rare frameshift mutation in theβ－globin gene：codon 46（＋A）（Hbb：c.138＿139insA）［J］.Hemoglobin，2011，35（2）：157.

［2］Waye JS，Nakamura－Garrett LM，Eng B，et al.β＋－Thalassemia trait due to a novel mutation in theβ－globin gene promoter：－26（A＞C）［HBB c.－76A＞C］［J］.Hemoglobin，2011，35（1）：84.

［3］榮卡彬，黃 革，蔣文玲，等.中間型β地中海貧血家系基因分子生物學特征分析［J］.中華檢驗醫(yī)學雜志，2009，32（4）：412.

［4］Angalena R，Prabitha KN，Chaudhary AK，et al.A novel homozygous point mutation at codon 82（HBB：c.247A ＞T）in the betaglobin gene leads to thalassemia major［J］.Int J Lab Hematol，2010，32（5）：548.

［5］Shang X，Rao Z，Lou J，et al.Compound heterozygosity for a rare small deletion and a common point mutation in the beta－globin gene：report of two Chinese families［J］.Int J Lab Hematol，2011，33（1）：79.

［6］Yi P，Yu F，Huang S，et al.Identification of a novel frameshift mutation at codon 53（－T）in the beta－globin gene causing dominantly inherited beta－thalassemia in a Chinese Miao family［J］.Blood Cells Mol Dis，2008，41（1）：56.

［7］Chin JY，Kuan JY，Lonkar PS，et al.Correction of a splice－site mutation in the beta－globin gene stimulated by triplex－forming peptide nucleic acids［J］.Proc Natl Acad Sci U S A，2008，105（36）：13514.

［8］Yu N，Kim HR，Cha YJ，et al.A novel frameshift mutation at codon 66 （HBB：c.del201A）in theβ－globin gene leads to betathalassemia［J］.Ann Hematol，2011，90（2）：243.

［9］Cadet E，F(xiàn)oulon K，Claisse JF，et al.First identification of a point mutation at position－83（G＞A）of the beta－globin gene promoter［J］.Hemoglobin，2009，33（3）：274.

［10］Li DZ，Liao C，Xie XM，et al.A novel mutation of－50（G－－＞A）in the direct repeat element of the beta－globin gene identified in a patient with severe beta－thalassemia［J］.Ann Hematol，2009，88（11）：1149.

［11］Dufva M，Poulsen L.Genotyping of mutation in the beta－globin gene using DNA microarrays［J］.Methods Mol Biol，2009，509：47.

［12］Mais DD，Gulbranson RD，Keren DF.The range of hemoglobin A（2）in hemoglobin E heterozygotes as determined by capillary electrophoresis［J］.Am J Clin Pathol，2009，132（1）：34.