李 潔 (長江大學(xué)園藝園林學(xué)院，湖北 荊州 434025)

譚風(fēng)云 (湖北城隆市政園林設(shè)計有限公司，湖北 荊州 434000)

潘佑找，劉曉玲，彭 斌，胡夢婷 (長江大學(xué)園藝園林學(xué)院，湖北 荊州 434025)

蘭州百合鱗片培養(yǎng)快速繁殖技術(shù)研究簡報

李 潔 (長江大學(xué)園藝園林學(xué)院，湖北 荊州 434025)

譚風(fēng)云 (湖北城隆市政園林設(shè)計有限公司，湖北 荊州 434000)

潘佑找，劉曉玲，彭 斌，胡夢婷 (長江大學(xué)園藝園林學(xué)院，湖北 荊州 434025)

以蘭州百合(Liliumdavidiivar.unicolor)鱗片為外植體進(jìn)行快速繁殖技術(shù)研究。結(jié)果表明，蘭州百合鱗片不同部位均可誘導(dǎo)出芽，其強(qiáng)弱依次為外層、中層、內(nèi)層；芽誘導(dǎo)最佳培養(yǎng)基是MS + 6-BA 0.2mg/L+ NAA 0.5mg/L，NAA較2,4-D更有利于芽的增殖；NAA誘導(dǎo)生根的效果要好于IAA，生根誘導(dǎo)最佳培養(yǎng)基為1/2MS + NAA 0.5mg/L，而且生根培養(yǎng)對后期的移栽也有影響。

蘭州百合(Liliumdavidiivar.unicolor)；鱗片；外植體；組織培養(yǎng)；快速繁殖

蘭州百合(Liliumdavidiivar.unicolor)是百合科百合屬川百合的變種，是多年生草本植物，有著悠久的栽培歷史。蘭州百合營養(yǎng)豐富，品質(zhì)極佳，以“名菜良藥”著稱，是百合中的佼佼者。百合的常規(guī)繁殖方法主要采用常規(guī)分球、分珠芽鱗片扦插、鱗片包埋等，但存在繁殖系數(shù)低、易感染病毒、栽培面積難以擴(kuò)大以及多代繁殖后退化等缺陷。由于組織培養(yǎng)具有繁殖速度快、占用空間小、便于種質(zhì)保存與交換等優(yōu)勢，在百合繁殖中占有主導(dǎo)地位。百合屬植物鱗片作為外植體具有容易獲得、分化能力強(qiáng)、對培養(yǎng)基要求不嚴(yán)等優(yōu)點(diǎn)，是目前百合組織培養(yǎng)中普遍采用的外植體[1]。另外，百合葉片[2]、莖段[3]、根[4]、珠芽[5]作為外植體的也有相關(guān)研究。本研究以蘭州百合鱗片為材料，擬建立較完整的快速繁殖體系，達(dá)到降低生產(chǎn)成本目的。

1 材料與方法

1.1 材料

蘭州百合于2011年9月采自恩施藥用植物研究所，保存于花盆中。

1.2 方法

(1)材料處理 將蘭州百合鱗片刷凈泥土，流水沖洗10min，75%乙醇消毒35s，10%次氯酸鈉溶液消毒10min，無菌水沖洗6次。將蘭州百合鱗片分為外層、中層、內(nèi)層，切成0.5cm×0.5cm的小方塊用于接種。

(2)誘導(dǎo)培養(yǎng) 以MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，培養(yǎng)基中6-BA為1.0mg/L，NAA設(shè)置0.2、0.5mg/L 2個濃度。培養(yǎng)溫度為25℃，光照強(qiáng)度為1000～1500lx，每天光照12h。

(3)繼代培養(yǎng) 接種后一個月，進(jìn)行繼代培養(yǎng)，繼代培養(yǎng)基為MS + 6-BA 0.2mg/L + NAA(0.05、0.20、0.50mg/L)或2,4-D(0.05、0.2、0.5mg/L)。

(4)生根培養(yǎng)與移栽 將經(jīng)過繼代培養(yǎng)的無根苗接種到生根培養(yǎng)基，生根培養(yǎng)基為1/2MS + IAA(0.2、0.5 mg/L)或NAA(0.2、0.5 mg/L)。試管苗的根長到1～2cm時進(jìn)行移栽，移栽前進(jìn)行煉苗。

2 結(jié)果與分析

2.1 NAA及鱗片部位對蘭州百合芽誘導(dǎo)的影響

接種第11d后蘭州鱗片百合開始膨大，20d左右切口處出現(xiàn)黃綠色愈傷組織，少數(shù)有氣生根出現(xiàn)，30d時形成綠色小芽。在6-BA相同的情況下，NAA 0.5mg/L比0.2mg/L更有利于芽的誘導(dǎo)，且鱗片不同部位分化強(qiáng)弱順序?yàn)橥?中>內(nèi)(表1)。

表1 NAA及鱗片部位對蘭州百合芽誘導(dǎo)的影響

2.2 NAA和2,4-D對繼代培養(yǎng)的影響

從表2可看出，在6-BA相同的情況下，芽增殖率隨NAA和2,4-D濃度的升高而升高，但NAA較2,4-D更有利于芽的增殖，且增殖芽的質(zhì)量也好。

表2 NAA和2,4-D對蘭州百合繼代培養(yǎng)的影響

2.3 IAA和NAA對生根培養(yǎng)的影響

由表3可見，所有處理的生根率都是100%，IAA處理的平均生根數(shù)較NAA處理的多，綜合根數(shù)和根的粗細(xì)來看，NAA 0.5mg/L對生根更有利。

表3 IAA和NAA生根培養(yǎng)的影響

3 討 論

百合的鱗片外植體的切取部位除了外、中、內(nèi)層，其上、中、下部位對組織培養(yǎng)結(jié)果也有影響[4,6-7]。這在本研究的蘭州百合中也得到了證實(shí)。試管苗葉面無角質(zhì)、蠟質(zhì)、表皮毛很少或者無，氣孔開關(guān)能力弱，極易失水，煉苗是非常必要的措施。通過光照和濕度的變化促進(jìn)莖葉保護(hù)組織的發(fā)生和氣孔功能的恢復(fù)[8-9]，以促使其適應(yīng)環(huán)境。移栽成活率隨著煉苗的天數(shù)而有所提高，但并非煉苗時間越久越好，本研究州鱗片百合百合煉苗3d，加上移栽后給予合適的條件，移栽成活率達(dá)100%。

[1]蔣細(xì)旺，司懷軍．百合的組織培養(yǎng)技術(shù)綜述[J]．湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2004，(1)：78-82．

[2]潘佑找，柯尊濤，趙宇瑛．不同外植體對蘭州百合組織培養(yǎng)的影響[J]．安徽農(nóng)學(xué)通報，2007，13(19)：242-245．

[3]孟 楊，潘佑找，賈珊珊，等．湖北百合組織培養(yǎng)技術(shù)研究[J]．安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2006，34(17)：4247-4248．

[4]楊成德，種 康，敬蘭花．百合鱗片不同部位的小鱗莖分化與激素調(diào)節(jié)研究[J]．蘭州大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版)，1998，24(3)：95-99．

[5]趙祥云，程 廉，刑尤美，等．百合珠芽組培及脫毒研究[J]．園藝學(xué)報，1993，20(3)：284-288．

[6]潘佑找，林 強(qiáng)，陳香麗，等．鱗片不同放置方式對卷丹快速繁殖的影響[J]．湖北農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，48(10)：2499-2501．

[7]Pan Y Z.Study on Tissue Culture and Rapid Propagation of WildLiliumlancifolium[J].Medicinal Plant,2011,5:51-55.

[8]Jeong J H.Invitropropagation of bulb scale section of several Korean native lilies [J].Acta Hortic,1996,41:269-276.

[9]Pan Y Z,Zhao Y Y,Liu X L,et al.Different Explants ofLiliumlancifoliumhave Different Potential to Differentiate and Regenerate in Tissue Culture [J].Agricultural Science & Technology,2011,12:1437-1440.

10.3969/j.issn.1673-1409(S).2012.08.010

Q813.1+2；Q949.71+8.23

A

1673-1409(2012)08-S030-02

2012-07-10

李 潔(1991-)，女，北京人，現(xiàn)從事園藝植物繁殖研究。

潘佑找，E-mail:panyouzhao@163.com。