張玉璽 楊姣 劉春鶴 姚曉穎 王麗紅

楊硼洗劑是我院自制的外用制劑，用于治療真菌性皮膚疾患。通過參閱相關(guān)水楊酸、硼酸在其他劑型中含量測定的文獻［1-3］，我們建立了用HPLC法測定楊硼洗劑中水楊酸和硼酸兩種成分含量的方法。

1 儀器與試劑

1.1 儀器 高效液相色譜儀(Agilent 1100，美國);電子天平(AG204，瑞士)。

1.2 試劑 水楊酸、硼酸對照品(中國藥品生物制品檢定所);甲醇為色譜級，水為重蒸餾水;樣品為醫(yī)院制劑。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱Diamonsil C18(150 mm×4.6 mm，5 μm);流動相:甲醇-水(45∶55);流速:1.3 ml/min;檢測波長289nm;進樣 20 μL;柱溫:25℃。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取水楊酸對照品、硼酸對照品各16 mg，置100 ml棕色量瓶中，加流動相適量使溶解，稀釋至刻度，搖勻，得對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備 精密吸取楊硼洗劑1 ml，置100 ml棕色量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，以0.45 μm濾膜過濾即得供試品溶液。

2.4 陰性樣品制備 按處方配比制備缺水楊酸、硼酸的陰性楊硼洗劑，按供試液制備方法制備成陰性樣品溶液。

在此色譜條件下，陰性樣品、對照品和供試液的色譜圖見圖1。水楊酸和硼酸的理論塔板數(shù)均不低于2500，相鄰兩組分間的分離度大于2，保留時間分別為3.6 min和5.7 min，陰性樣品無干擾。

2.5 線性關(guān)系考察 精密吸取對照品溶液1.0，2.0，4.0，6.0，8.0 ml于10 ml棕色量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻。在“2.1”項下色譜條件下分別進樣20 μL，以對照品濃度為縱坐標(biāo)(Y)，峰面積為橫坐標(biāo)(X)進行線性回歸。水楊酸的回歸方程為Y=12.56X-201.23(r=0.9962);硼酸的回歸方程為Y=19.12X+121.2(r=0.998)。實驗表明水楊酸和硼酸分別在16～128 μg/ml的濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.6 精密度試驗 精密吸取“2.2”項下水楊酸、硼酸濃度為160 μg/ml的對照品溶液 20 μL，按“2.1”項下色譜條件重復(fù)進樣6次，測得水楊酸峰面積的RSD為1.21%(n=6)，硼酸峰面積的RSD為0.82%(n=6)，表明儀器精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗 精密吸取“2.3”項下的供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件分別于制備后 0，2，4，6，8，24 h 測定峰面積，測得供試品溶液中水楊酸峰面積的RSD=0.81%(n=6)，硼酸峰面積的RSD=1.41%(n=6)，表明供試品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 重復(fù)性試驗 取同一批號楊硼洗劑樣品6份，按“2.3”項下方法的制備后，在“2.1”項下色譜條件各進樣3次測定，測得水楊酸和硼酸的RSD分別為0.82%和0.76%，結(jié)果表明該方法重復(fù)性良好。

2.9 加樣回收率試驗 精密量取同一批號已知濃度的供試品溶液1 ml置于10 ml棕色量瓶中，共9份，加流動相稀釋至刻度，搖勻。再精密吸取上述溶液各1 ml置于10 ml棕色量瓶中，分別精密加入水楊酸、硼酸濃度為160 μg/ml的對照品溶液 1.0，1.0，2.0，2.0，3.0，3.0 ml，加流動相稀釋至刻度，搖勻，并按“2.1”項下色譜條件測定，計算回收率。結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率試驗結(jié)果(n=6)

2.1 0 樣品含量測定 取3批楊硼洗劑，按“2.3”項下方法制備，按“2.1”項下色譜條件各進樣20 μL，測定色譜峰面積，計算兩種成分含量。結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果(n=3)

3 討論

3.1 從紫外光譜可見水楊酸和硼酸在289nm波長處均有較大的吸收，故選擇此波長作為含量測定的檢測波長。

3.2 經(jīng)反復(fù)試驗發(fā)現(xiàn)以甲醇-水(45∶55)作為流動相時，兩種組分離效果好，兩峰的分離度和保留時間也較合理，因此選用此流動相配比做為測定用流動相。

3.3 實驗結(jié)果表明，采用本法同時測定楊硼洗劑中的水楊酸和硼酸的含量，方法簡單、快速，結(jié)果準確、可靠，分離效果好。陰性對照表明，在該色譜條件下，其他輔料對兩種主成分的測定無干擾，可用本法作為該制劑的質(zhì)量控制標(biāo)準。

［1］李季靜，楊小孟，胡鳳婷.RP-HPLC法測定氯霉素水楊酸酊中氯霉素和水楊酸的含量．首都醫(yī)藥，2009，15(5):62．

［2］李長福.HPLC法測定復(fù)方水楊酸擦劑中水楊酸和苯甲酸的含量.中國傷殘醫(yī)學(xué)，2011，3(19):37．

［3］冀宛麗，趙家太.HPLC法同時測定阿司匹林咀嚼片中阿司匹林和水楊酸的含量．生命科學(xué)儀器，2007，10(5):39．