萬金華 張學(xué)鈺 王武明 范海銀 (江西省胸科醫(yī)院胸外科，江西 南昌 330006)

腦源性神經(jīng)生長因子在非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移中的作用

萬金華 張學(xué)鈺 王武明 范海銀 (江西省胸科醫(yī)院胸外科，江西 南昌 330006)

非小細(xì)胞肺癌;轉(zhuǎn)移;腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子

1995年全世界就有60萬人死于肺癌，而且每年人數(shù)都處于上升的趨勢，其中女性患肺癌的發(fā)生率在性別中的比重上升明顯〔1〕。腦源性神經(jīng)生長因子(BDNF)屬于神經(jīng)營養(yǎng)因子家族，BDNF通過與受體酪氨酸激酶受體B結(jié)合，激活細(xì)胞內(nèi)的酪氨酸激酶信號通路，促進抑制細(xì)胞失巢凋亡能力，還可以促進腫瘤細(xì)胞的生存，在腫瘤生長、浸潤和轉(zhuǎn)移的過程中發(fā)揮重要作用〔2，3〕。本研究采用免疫組化SP法，檢測BDNF在非小細(xì)胞肺癌中的表達，研究BDNF與臨床病理學(xué)參數(shù)之間的關(guān)系，了解BDNF在非小細(xì)胞肺癌發(fā)生發(fā)展中的作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料

2010年1月至2012年2月我院手術(shù)切除并經(jīng)病理學(xué)確診的原發(fā)性非小細(xì)胞肺癌組織及相應(yīng)癌旁組織標(biāo)本各53例。術(shù)前均未接受過化療或放療。癌旁組織為正常肺癌組織，于同一手術(shù)中切除，距離腫瘤病灶5 cm之外。標(biāo)本均經(jīng)40 g/L中性甲醛液固定，用HE染色及免疫組織化學(xué)檢查。

1.2 主要試劑

兔抗人BDNF多克隆抗體、兔抗羊SP試劑盒購自北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司。

1.3 方法

明書上的要求進行，嚴(yán)格控制溫度及時間。以1：200作為一抗稀釋濃度，陽性對照是以人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞核染棕黃色為標(biāo)準(zhǔn)，空白對照使用磷酸鹽緩沖液(PBS)，蘇木素復(fù)染，DAB用于顯色，采用中性樹膠封片。結(jié)果判定：以細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)或細(xì)胞核出現(xiàn)淺黃、棕黃或棕褐色顆粒或環(huán)狀影判斷為陽性細(xì)胞。采用雙盲法，使用稍加改進的文獻〔4〕方法進行半定量分析。染色程度記分標(biāo)準(zhǔn)：棕褐色為3分，棕黃色為2分，淡黃色為1分，未著色為0分。計算每張切片里面至少500個細(xì)胞中的陽性細(xì)胞數(shù)，以陽性細(xì)胞數(shù)的平均百分比進行計分。數(shù)量＞75%為4分，51% ～75%為3分，26% ～50%為2分，6% ～25%為1分，0～5%為0分。以染色程度和陽性細(xì)胞百分比計分之和進行結(jié)果判定，陰性(-)為0～1分，弱陽性(+)為2～3分，中度陽性(?)為4～5分，強陽性(?)為6～7分。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

應(yīng)用SPSS13.0軟件進行χ2和t檢驗。

免疫組織化學(xué)染色：操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說

2 結(jié)果

2.1 BDNF表達

BDNF在肺癌組織中的陽性表達〔34例(64.15%)〕顯著高于癌旁組織〔21例(39.62%)〕(P＜0.05)。

2.2 BDNF表達與臨床病理特征的關(guān)系

BDNF表達與性別、年齡、生活習(xí)慣、組織分型、分化程度、腫瘤大小無顯著相關(guān)性，而與淋巴轉(zhuǎn)移具有顯著相關(guān)性(P＜0.05)。見表1。

表1 BDNF的表達與臨床病理特征的關(guān)系±s)

表1 BDNF的表達與臨床病理特征的關(guān)系±s)

臨床因素 n BDNF P值性別 男性36 2.71±0.54 ＞0.05女性 17 2.65±0.36年齡(歲)≥60 34 2.73±0.31 ＞0.05＜60 19 2.86±0.28生活習(xí)慣 吸煙 40 2.69±0.31 ＞0.05不吸煙 13 2.73±0.33組織分型 鱗癌 31 2.81±.0.58 ＞0.05腺癌 22 2.73±0.63分化程度 高/中 35 2.75±0.53 ＞0.05低18 2.63±0.49腫瘤大小≤3 cm 33 2.68±0.33 ＞0.05＞3 cm 20 2.75±0.29淋巴轉(zhuǎn)移 N0 21 2.51±0.61 ＜0.05 N1-3 32 3.05±0.53

3 討論

非小細(xì)胞肺癌屬于世界上發(fā)病率較高的惡性腫瘤之一，療效并不理想，其中侵襲、轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致非小細(xì)胞肺癌死亡率居高不下的最主要原因。肺癌的侵襲和轉(zhuǎn)移是一個非常復(fù)雜的腫瘤生物學(xué)問題。BDNF主要由神經(jīng)膠質(zhì)和神經(jīng)元細(xì)胞產(chǎn)生，其信號傳導(dǎo)軸作用領(lǐng)域廣泛，對于神經(jīng)細(xì)胞的存活、增殖和凋亡具有促進作用，并參與神經(jīng)系統(tǒng)疾病的發(fā)生，如癲癇、神經(jīng)細(xì)胞退變等疾病〔5〕。另外，BDNF還參與自身免疫性疾病、炎癥性疾病和癌癥等多種病理狀態(tài)的發(fā)生和發(fā)展。研究表明BDNF與視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、肝細(xì)胞癌、胰腺癌、肺癌等多種神經(jīng)源性和非神經(jīng)源性實體腫瘤有著十分密切的聯(lián)系，參與了腫瘤的發(fā)生、侵襲和轉(zhuǎn)移的過程〔6〕。

金常娥等〔7〕研究顯示BDNF在肺癌組織中有顯著表達，與本研究結(jié)果相一致。BDNF的表達與非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生、侵襲和轉(zhuǎn)移有相關(guān)性。本研究提示BDNF可能促進淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。配體BDNF通過與TrkB結(jié)合來激活細(xì)胞內(nèi)的AKT/PT3K(蛋白激酶B/磷脂酰肌醇3激酶)信號通路。AKT/PT3K信號通路依靠調(diào)控bcl-2家庭成員的表達及線粒體凋亡途徑參與到失巢凋亡調(diào)節(jié)中，從而賦予細(xì)胞失巢凋亡抑制能力。這一作用給予非小細(xì)胞肺癌的癌細(xì)胞抑制失巢凋亡的能力。失巢凋亡是由于細(xì)胞外基質(zhì)與其他細(xì)胞脫離接觸而誘發(fā)細(xì)胞程序死亡的形式，抵抗細(xì)胞失巢凋亡可能在肺癌的擴散和轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用。此外，由BDNF激活的AKT/PI3K信號通路會減少釋放細(xì)胞色素C，相應(yīng)地作為凋亡終末效應(yīng)器的Caspase-3和Caspase-7的活性也會降低。腫瘤細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移是一個復(fù)雜過程，包含多個步驟和多個階段，涉及細(xì)胞與基質(zhì)、細(xì)胞與細(xì)胞之間相互作用的失調(diào)。BDNF的過度表達可賦予癌細(xì)胞生存、侵襲和轉(zhuǎn)移的特性，包括細(xì)胞遷移、細(xì)胞骨架變形、轉(zhuǎn)移瘤形成、異位附著和瘤內(nèi)血管生成等〔8〕。在腫瘤血管新生的過程中BDNF也發(fā)揮了一定的作用，腫瘤血管的血管內(nèi)皮生長因子就由其刺激表達。綜上，BDNF激活的信號通路對腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移具有促進作用，針對BDNF開展治療，有望有效提高治療的療效。然而有多種基因聯(lián)合參與非小細(xì)胞肺癌的發(fā)生發(fā)展以及侵襲轉(zhuǎn)移，BDNF與其他基因的聯(lián)合機制還需要深入研究。

1 張 凱，黃全順，徐錦程，等.涎腺腺樣囊性癌中BDNF和TrkB的表達及其臨床意義〔J〕.蚌埠醫(yī)學(xué)院學(xué)報，2008;33(3)：279-81.

2 劉天卿，任海軍，溫 爽，等.胃癌組織中Survivin、TrkB和BDNF的表達及意義〔J〕.臨床與實驗病理學(xué)雜志，2009;25(3)：291-4.

3 陳 鐘，徐 勇，張柏梁.BDNF/TrkB在口腔鱗癌浸潤和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中的功能〔J〕.實用口腔醫(yī)學(xué)雜志，2011;27(3)：373-7.

4 Faridi A，Rudlowski C，Biesterfeld S，et al.Long-term follow-up and prognosis significance of angiogenic basic fibroblast growth factor(bFGF)expression in patients with breast cancer〔J〕.Pathol Res Pract，2002;198(1)：1-5.

5 楊 希，朱君飛，吳文龍，等.非小細(xì)胞肺癌患者血清MMP-9表達及siRNA靶向抑制A549細(xì)胞侵襲與轉(zhuǎn)移的研究〔J〕.中華腫瘤防治雜志，2012;19(8)：591-4.

6 Hress K，Macintyre T，Wang H，et al.Identification and preclinical characterization of AZ-23，a novel，selective，and orally bioavailable inhibitor of the Trk kinase pathway〔J〕.Mol Cancer Ther，2009;8(7)：1818-27.

7 金常娥，邱 晨，傅應(yīng)云，等.TrkB/BDNF在非小細(xì)胞肺癌組織中的表達及臨床意義〔J〕.微循環(huán)學(xué)雜志，2011;21(4)：23-5.

8 葉曉鋒，高 平，李金平，等.非小細(xì)胞肺癌中VEGF和MMP-2的表達及其與腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移關(guān)系的研究〔J〕.寧夏醫(yī)學(xué)雜志，2009;31(12)：1098-100.

R734.2

A 〔

1005-9202(2012)23-5292-02;

10.3969/j.issn.1005-9202.2012.23.101

萬金華(1984-)，男，主治醫(yī)師，主要從事胸外科學(xué)研究。

〔2011-11-17收稿 2012-03-21修回〕

(編輯 趙慧玲)