趙 輝 潘 濤 王慶艷 么作義 張國棟 董全紅 王寶菊 張明紅 孫續(xù)國

(天津醫(yī)科大學醫(yī)學檢驗學院，天津 300203)

轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白含量及化學修飾在肺癌診斷中的價值

趙 輝1潘 濤1王慶艷2么作義1張國棟3董全紅1王寶菊1張明紅1孫續(xù)國

(天津醫(yī)科大學醫(yī)學檢驗學院，天津 300203)

目的 研究血清和腹水轉(zhuǎn)甲狀腺素(TTR)蛋白含量和化學修飾類型，在肺癌診斷中的作用。方法 日本東芝TBA120全自動生化分析儀測定血清和胸水總蛋白(TP)、白蛋白(Alb)、甘油三酯(TG)、膽固醇(TC)、乳酸脫氫酶(LDH)及葡萄糖(GLU)的含量。免疫比濁法測定TTR、Apo A和Apo B三種蛋白含量?；?結(jié)果 胸水中有6種成分含量比血清明顯減低，減低程度明顯的順序依次是：TG、TC、Apo A、Apo B和TTR，而增高的僅LDH一項指標。在蛋白指標中TTR減低最明顯。肺癌患者胸水TTR發(fā)生3種類型化學修飾，其中GLUT-TTR修飾型明顯增高。結(jié)論肺癌患者胸水TTR含量明顯低于血清，并且glut-TTR修飾比例明顯增高，可能作為肺癌診斷的輔助參考指標。

肺癌;轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白;胸水;血清

肺癌為當前世界各地最常見的惡性腫瘤之一，我國肺癌發(fā)病率已高達61.4/10萬，且呈現(xiàn)不斷攀升趨勢〔1〕。臨床診斷肺癌的方法主要依靠核磁共振(MRI)與CT等影像學檢查，但最終確定診斷仍然需要依靠組織病理學檢查〔2，3〕。肺癌起病多隱秘，早期臨床表現(xiàn)不典型，臨床確定診斷時60% ～70%患者已經(jīng)處于中晚期。多數(shù)學者提倡探索腫瘤標志物，尋找肺癌早期輔助診斷的生物標志物，臨床已廣泛實用的有CEA、CA125、NSE等多項指標〔4，5〕。腫瘤標志物研究學者試圖尋求能夠診斷肺癌的腫瘤標志物〔6〕。但是腫瘤標志物均存在敏感性和特異性低的缺點〔7〕。人血清轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白(TTR)與肺癌表達有關(guān)系〔8〕，比較胸水與血清之間TTR蛋白含量和化學修飾的差異，將有助于肺癌的輔助診斷和預后評估。

1 材料與方法

1.1 材料

收集胸科醫(yī)院肺癌患者31例，男14例，女17例，年齡48～83歲。健康對照組16例男10例，女6例，年齡45～65歲，所有患者經(jīng)過MRI，CT影像診斷和病理診斷為肺癌?；颊呖崭故占? ml用于生化項目測定。同時采集胸水留取10 ml用于生化項目和細胞形態(tài)學、計數(shù)測定。

1.2 方法

利用日本東芝TBA120全自動生化分析儀，試劑使用上海執(zhí)誠生物技術(shù)有限公司和北京科美生物技術(shù)有限公司的產(chǎn)品，測定血清和胸水中各生化指標?；瘜W反應(yīng)方法測定總蛋白(TP)、白蛋白(Alb)含量;酶反應(yīng)動力學測定 葡萄糖(Glu)、甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)含量和乳酸脫氫酶(LDH)、腺苷脫氨酶(ADA)活性。免疫比濁法測定轉(zhuǎn)甲狀腺素蛋白(TTR)、載脂蛋白A(Apo A)、和載脂蛋白B(Apo B)含量，按照說明書操作，測定血清和胸水標本中上述三種指標?；|(zhì)輔助激光解析電離飛行時間質(zhì)譜(MALDI-TOF-MS)法分析TTR 蛋白化學修飾，150 μl血清或胸水標本中加入15 μl抗-人血清TTR抗體，37℃作用1 h，離心5 min，沉降物分別用生理鹽水和超純水各洗滌2次，最后使TTR蛋白與相應(yīng)抗體分離，質(zhì)譜分析TTR化學修飾。

1.3 統(tǒng)計學分析

2 結(jié)果

2.1 比較肺癌患者血清與胸水之間生化指標的差異

肺癌患者胸水與血清有8項生化指標差異顯著(P＜0.05)，脂質(zhì)和脂蛋白成分降低最明顯，其次為蛋白指標，其中TTR降低最為明顯，而LDH增高(表1)。

表1 血清與胸水之間生物化學成分水平的差異(± s，n=31)

表1 血清與胸水之間生物化學成分水平的差異(± s，n=31)

組別 TG(mmol/L)TC(mmol/L) ApoA(g/L) ApoB(g/L) TTR(g/L) TP(g/L) Alb(g/L) ADA(U/L)GLU(mmol/L)LDH(U/L)胸水 0.33±0.35 1.46±0.61 0.43±0.12 0.53±0.11 0.10±0.04 35.91±7.26 23.16±5.36 5.85±3.16 4.82±2.29 319.87±346.25血清 1.21±0.55 4.27±0.90 1.05±0.17 1.03±0.17 0.18±0.05 60.64±7.18 37.58±3.55 8.21±10.59 5.62±1.36 224.72±196.00胸水/血清 0.27 0.34 0.40 0.51 0.56 0.59 0.62 0.71 0.86 1.42 P值 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.000 0.239 0.047 0.175

2.2 測得的蛋白指標含量

在分析的免疫球蛋白、Alb和TTR中，半衰期最短的為TTR蛋白，其中Alb為19～21 d，代表球蛋白的IgM及IgG在10～23 d之間。通過含量變化指標診斷肺癌和預后觀察，建議選擇半衰期短的TTR蛋白作為判定指標(表2)。

2.3 MALDI-TOF/MS法比較兩組之間TTR蛋白的化學修飾

MALDI-TOF/MS分析結(jié)果顯示，健康對照組和肺癌患者血清及胸水TTR均發(fā)現(xiàn)四種修飾峰，說明TTR蛋白具有三種修飾類型，其型別依次為：b：磺化TTR(sul-TTR);c：半胱氨?；疶TR(cys-TTR);d：半胱氨酰甘氨?；疶TR(cysgly-TTR)，肺癌患者與健康對照血清內(nèi)TTR修飾類型和比例也未見有明顯改變，但患者胸水中cysgly-TTR型比例明顯增高(表3)。

表2 蛋白血清含量及半衰期

表3 TTR蛋白修飾類型的比例(± s，%)

表3 TTR蛋白修飾類型的比例(± s，%)

與對照組血清比較：1)P＜0.05

組別TTR sul-TTR cys-TTR cysgly-TTR對照組血清26.8±3.5 21.9±3.8 51.2±6.8 7.3±0.8肺癌血清 8.8±0.9 16.2±1.4 70.7±7.3 5.2±0.61)肺癌胸水 5.3±0.6 9.9±1.1 50.3±4.9 30.5±4.11)

3 討論

肺癌患者胸腹水TTR蛋白水平明顯低于血清，MALDITOF-MS測定TTR蛋白均發(fā)現(xiàn)3種主要修飾類型，并且患者胸水內(nèi)cysgly-TTR修飾類型比例增高明顯。胸水內(nèi)TTR蛋白含量與cysgly-TTR修飾型有可能作為肺癌診斷的參考指標。

血清內(nèi)TTR蛋白幾乎全部來源于肝臟細胞合成分泌，肺組織細胞內(nèi)未見有TTR蛋白mRNA和蛋白表達〔9〕，說明胸水內(nèi)TTR主要來源于肝臟實質(zhì)細胞產(chǎn)生和分泌。結(jié)果發(fā)現(xiàn)胸水內(nèi)含量最低的為脂質(zhì)成分指標。眾所周知，Apo A和Apo B為組成脂蛋白成分，結(jié)合TG和TC檢測項目，胸水內(nèi)四項指標均明顯低于血清水平，提示血清內(nèi)大分子成分難以通過漿膜層，脂質(zhì)和脂蛋白指標難以用于肺癌胸腔積液評價指標。本文結(jié)果提示肺癌患者細胞能量消耗或降解因素可能影響胸水TTR蛋白含量。

為分析TTR化學修飾在肺癌診斷中的作用，先前本組已經(jīng)建立MALDI-TOF-MS分析TTR修飾，方法簡便、可靠。分析對照與肺癌患者血清，發(fā)現(xiàn)均存在痕量的cysgly-TTR修飾型，進一步計算修飾比例發(fā)現(xiàn)cysgly-TTR比例明顯增高，提示cysgly-TTR型有可能為肺癌患者診斷的參考指標。

綜上所述，肺癌患者胸水內(nèi)TTR蛋白含量明顯低于血清，但修飾型(cysgly-TTR)比例明顯增高，TTR含量和修飾類型，有可能作為診斷肺癌的參考指標。

1 郭其森，孫玉蘭.非小細胞肺癌的綜合治療原則〔J〕.山東醫(yī)藥，2011;51(3)：101-2.

2 尚 軍，高 紅，趙明增.多層螺旋CT低劑量掃描在肺結(jié)節(jié)檢查中的作用〔J〕. 實用醫(yī)藥雜志，2011;28(3)：233-4.

3 潘紀青.周圍型小肺癌的CT表現(xiàn)及檢查方法〔J〕.上海醫(yī)學影像，2005;14(4)：284-6.

4 任文貴，任 怡，劉 彬，等.肺癌的早期診斷檢查方法概述〔J〕.航空航天醫(yī)學雜志，2011;22(2)：159-60.

5 安玉增，姜淑華，張 丹，等.CEA、CA125、CYFRA21-1/NSE聯(lián)合檢測在肺癌診斷中的臨床意義〔J〕.標記免疫分析與臨床，2011;18(2)：117-9.

6 陳 萍.突變型K-ras蛋白在非小細胞肺癌的表達及臨床意義〔J〕.中國實用醫(yī)刊，2009;36(14)：24-5.

7 蔣焱熠，劉一臻，史志周，等.uPA、ET-1蛋白在非小細胞肺癌中的表達及其臨床相關(guān)性〔J〕.中國肺癌雜志，2011;21(1)：49-53.

8 Liu L，Liu J，Dai S，et al.Reduced transthyretin expression in sera of lung cancer〔J〕.Cancer Sci，2007;98(10)：1617-24.

9 Richardson SJ.Evolutionary changes to transthyretin：evolution of transthyretin biosynthesis〔J〕.FEBS J，2009;276(19)：5342-56.

R73

A

1005-9202(2012)23-5140-02;

10.3969/j.issn.1005-9202.2012.23.018

唐山市科技支撐基金項目(No.20081374)

1 唐山市傳染病醫(yī)院 2 唐山市豐潤區(qū)人民醫(yī)院

3 唐山市協(xié)和醫(yī)院

孫續(xù)國(1965-)，男，教授，博士生導師，主要從事臨床檢驗診斷研究。

趙 輝(1970-)，男，副主任藥劑師，主要從事臨床藥學方面的研究。

〔2011-09-29收稿 2011-12-12修回〕

(編輯 曹夢園)