朱剛毅，陶正澤，劉寶有，邢四仙，王兆美，張明芬，李勝達，業(yè)光文，潘巧珍

(江川縣畜牧獸醫(yī)局，云南 江川 652600)

免疫接種是預(yù)防動物發(fā)生傳染病的主要手段，但并不是所有經(jīng)過疫苗接種的動物都能達到預(yù)期的免疫效果。疫苗接種后機體產(chǎn)生的免疫應(yīng)答是一個極其復(fù)雜的生物學(xué)過程，許多因素不單會影響機體免疫力的產(chǎn)生，部分機體還會發(fā)生不良反應(yīng)。為進一步了解豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗、豬圓環(huán)病毒Ⅱ型滅活疫苗免疫種公豬產(chǎn)生的免疫應(yīng)激反應(yīng)及免疫效果，對免疫種公豬的生殖生理指標(biāo)和免疫抗體進行對比測定，從而對兩種疫苗免疫安全性及效果進行評價。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 疫苗

豬繁殖與呼吸綜合征(豬藍耳)滅活疫苗(NVDC－JXA1株):瑞普保定生物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號:101134。豬圓環(huán)病毒Ⅱ型滅活疫苗(LG株):哈爾濱維科生物技術(shù)開發(fā)有限公司生產(chǎn)，批號:20101019。

1.1.2 儀器

非接觸式紅外測溫儀AR350:廣州市恒高精藝科技發(fā)展有限公司生產(chǎn)。精蟲計數(shù)器:意大利美的科卡公司生產(chǎn)。電子天平，顯微鏡，5mL塑料注射器，針頭，一次性使用負壓采血管。

1.1.3 試驗豬

杜洛克種公豬8頭，整個試驗期按常規(guī)飼養(yǎng)管理進行。

1.2 方法

1.2.1 試驗豬分組及性能指標(biāo)測定

8頭試驗種公豬分為A、B兩組，每組4頭，分別飼養(yǎng)在江城鎮(zhèn)、九溪鎮(zhèn)兩個供精點。A組豬:頸部耳根后肌肉免疫注射豬繁殖與呼吸綜合征(NVDC－JXA1株)滅活疫苗4mL;B組豬:頸部耳根后肌肉免疫注射豬圓環(huán)病毒Ⅱ型(LG)滅活疫苗2mL。

試驗豬免疫注射前5d和免疫注射后15d逐頭測試下列生殖生理指標(biāo):

采精量:按照常規(guī)采精，用電子天平稱量。

精子密度:用精蟲計數(shù)器，按照使用說明進行測定。

精子活力:用顯微鏡放大100倍觀察，看精子運動活力評定。

精子畸形率:用顯微鏡放大400倍，看畸形精子占全部精子的比例。

體溫:用非接觸式紅外測溫儀在耳根后距離表皮10cm測定，每天上午9:00、下午17:00各測1次。

精神、食欲:按好、中、差三級標(biāo)準(zhǔn)評定。

1.2.2 采血

A、B兩組試驗豬免疫注射前當(dāng)天和免疫后21d用負壓采血管，在耳靜脈每頭采血5mL，靜置后分離血清，血清冷凍保存，用于檢測試驗用疫苗的對應(yīng)抗體。

2 試驗結(jié)果

2.1 種公豬體溫、精神和食欲三項生理指標(biāo)測定

從測試結(jié)果得出:A、B兩組試驗豬疫苗免疫后15d與免疫前5d比較，體溫正常，精神、食欲都好，說明兩種疫苗免疫后對種公豬體溫、精神和食欲三項生理指標(biāo)無影響，結(jié)果見表1。

表1 種公豬體溫、精神和食欲三項生理指標(biāo)測定

2.2 兩種疫苗免疫后對種公豬的采精量、精子密度、精子活力、精子畸形率的測定

兩種疫苗免疫種公豬后15d內(nèi)，A組平均每次采精量減少11.12%，平均每次的精子密度下降4.4%，表明豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗免疫種公豬后，對種公豬的采精量、精子密度有輕微的負面影響。但從總體試驗觀察，負面影響表現(xiàn)在免疫后7d內(nèi)，7d后采精量及精子密度能恢復(fù)正常。B組豬平均每次采精量及精子密度還有所增加，A、B兩組試驗豬的精子活力、畸形率無改變。表明圓環(huán)病毒滅活疫苗免疫后對種公豬的采精量、精子密度、精子活力、精子畸形率均無影響，豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗免疫種公豬后也不會改變精子的活力和精子的畸形率。結(jié)果見表2。

2.3 兩種疫苗免疫效果測定

A組(豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗免疫組):由于免疫前注射過豬繁殖與呼吸綜合征疫苗，所以免疫前豬繁殖與呼吸綜合征病毒抗體陽性比為3/4，平均OD630值僅為0.57;免疫后21d抗體陽性比也為3/4，但平均OD630值上升為1.38。證實豬繁殖與呼吸綜合征滅活疫苗免疫組免疫21d后抗體總體水平明顯上升，疫苗免疫效果較好。B組(圓環(huán)病毒Ⅱ型滅活疫苗免疫組):種公豬免疫前圓環(huán)病毒Ⅱ型抗體陽性比為0/4，平均OD630值僅為0.263，免疫后21d抗體陽性比為2/4，平均OD630值僅為0.831;試驗結(jié)果表明:該疫苗免疫種公豬有效。結(jié)果見表3。

表2 疫苗免疫后對種公豬采精量、精子密度、精子活力、精子畸形率測定

3 討論

(1)一些能夠引起免疫抑制的疾病也會影響疫苗的免疫效果。豬圓環(huán)病毒Ⅱ型可導(dǎo)致B細胞和T細胞數(shù)量下降，使免疫細胞功能受到影響，造成免疫抑制;其它引起免疫抑制的疾病還包括藍耳病、偽狂犬病、豬流感、豬細小病毒病等。畜禽發(fā)生免疫抑制性疾病，應(yīng)立即采取果斷措施，使其盡快恢復(fù)健康，而不要急于進行免疫，待機體免疫器官完全復(fù)原，再進行疫苗接種，本次試驗所用的兩種疫苗免疫并未造成免疫抑制。

(2)一般來說，抗體水平隨著接種劑量的增加而提高，但這并不意味著免疫劑量越大越好。相反，若劑量過大，機體產(chǎn)生抗體的能力反而降低，出現(xiàn)免疫麻痹情況。本次試驗嚴格按照疫苗使用說明書規(guī)定的免疫劑量進行免疫接種，種公豬免疫后并未出現(xiàn)免疫麻痹情況。

(3)江川縣豬群無豬圓環(huán)病Ⅱ型疫苗免疫史，近兩年對種公豬進行血清學(xué)檢測，豬圓環(huán)病毒Ⅱ型抗體陽性率較高，說明豬圓環(huán)病毒病在江川縣較普遍，應(yīng)用豬圓環(huán)病毒Ⅱ型滅活疫苗預(yù)防種公豬圓環(huán)病毒病勢在必行。