高燕妮 高武翔 幸忠 王文娟

重慶希爾安藥業(yè)有限公司，重慶 401520

跌打七厘片的鑒別及含量測定方法改進

高燕妮 高武翔 幸忠 王文娟

重慶希爾安藥業(yè)有限公司，重慶 401520

目的對跌打七厘片質(zhì)量標準中三七的鑒別及血竭素的含量測定方法進行改進。方法完善三七鑒別反應的樣品處理方法及層析條件；改變含量測定中血竭素的樣品處理方法。結果改進后的鑒別方法斑點清晰，分離度好；含量測定方法重現(xiàn)性好，準確度高。結論改進后的方法靈敏、準確，適合跌打七厘片的質(zhì)量控制。

跌打七厘片；三七；鑒別；血竭素；含量測定

跌打七厘片為傳統(tǒng)優(yōu)質(zhì)中成藥，處方由麝香、三七、血竭、紅花等十味藥組成，具有活血散瘀，消腫止痛的功效，臨床上用于治療跌打損傷，外傷出血[1]，療效確切。由于該藥為全粉入藥，成分復雜，實際工作中發(fā)現(xiàn)，其質(zhì)量標準存在三七的鑒別斑點多、分離度差、不易判斷，血竭素的高效液相色譜法重現(xiàn)性差、測定不準確的問題。本文將二者的檢測方法進行了改進，獲得了滿意的效果。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

日本島津LC–2010AHT型高效液相色譜儀；CP225D電子天平（Sartorius，十萬分之一天平）；KQ5200B超聲波清洗機型（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 試藥

人參皂苷Rg1對照品（批號：110703-200929，共含量測定用，購自中國藥品生物制品檢定所）；三七皂苷R1對照品（批號：110745-200415，供含量測定用，購自中國藥品生物制品檢定所）；血竭素高氯酸鹽對照品（批號：0811-200608，供含量測定用，購自中國藥品生物制品檢定所）；跌打七厘片（批號：110801，重慶希爾安藥業(yè)有限公司生產(chǎn)）；乙腈為色譜純；其余試劑為分析純；水為重蒸水。

2 方法與結果

2.1 跌打七厘片中三七薄層鑒別方法的改進

2.1.1 改進方法

本品30片，研細，置索氏提取器中，加適量氯仿，置水浴中回流提取2 h，棄去氯仿液，取出濾筒，晾干[2]。待氯仿?lián)]盡，再置索氏提取器中，加適量甲醇，置水浴中回流提取4 h，回收甲醇至干，殘渣加5%氫氧化鈉溶液5 mL使溶解，轉移至分液漏斗中，再用5mL的水分2次洗滌容器，轉移至分液漏斗中，用水飽和的正丁醇提取4次（10、5、5、5mL），合并正丁醇液，用水洗滌2次，每次5 mL，分取正丁醇液，蒸干，殘渣用0.8mL水分次溶解，轉移至氧化鋁柱上（中性氧化鋁100～200目，2 g，干法裝柱，直徑1 cm，長25 cm）[2]，先用30 mL氯仿洗脫，棄去氯仿洗脫液，再用70%甲醇25mL洗脫，洗脫液于水浴上蒸干，殘渣加甲醇1mL使溶解，作為樣品溶液。另取人參皂苷Rg1及三七皂苷R1對照品適量，加甲醇制成每毫升含人參皂苷Rg1及三七皂苷R1各1mg的對照品溶液。以氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水（15∶40∶22∶10）于5～10℃放置12 h的下層液為展開劑[3]，展開，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃烘5～10min，置紫外光燈（365 nm）下檢視。

2.1.2 結果

樣品斑點清晰，分離度好。供試品色譜中，在與對照品及對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，且陰性無干擾。表明該鑒別方法效果良好，可行性高，可用于替代原標準中三七的薄層鑒別。改進前后薄層對比見圖1、2。

2.2 跌打七厘片中血竭素含量測定方法的改進

2.2.1 色譜條件[4]

色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，LP-C18（4.6mm×250 mm，5μm，美國Ultimate）；柱溫：30℃；流動相：乙腈-0.05mol/L磷酸二氫鈉溶液（45∶55）；檢查波長：440 nm；流速：1.0mL/min。理論塔板數(shù)以血竭素計算應不低于3 000。

2.2.2 對照品溶液的制備

精密稱取血竭素高氯酸鹽對照品7 mg，置50 mL棕色容量瓶中，加3%磷酸甲醇溶液使溶解，并稀釋至刻度，搖勻。精密量取1 mL，置10 mL棕色量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻即得（每毫升含血竭素10μg）（血竭素重量=血竭素高氯酸鹽重量/1.377）。

2.2.3 供試品溶液的制備方法考察

實際工作中發(fā)現(xiàn)原含量測定方法重現(xiàn)性不好，經(jīng)多次實驗發(fā)現(xiàn)成品的取樣量及提取溶劑中磷酸濃度的差異均會導致最后的測定結果差異較大，故對其進行了考察。

2.2.3.1 取樣量的考察按原標準中樣品處理方法，將取樣量改為分別取約0.2、0.5、0.8、1.0、1.2 g，精密稱定，進行測定，計算含量。結果明，取樣量0.5 g，含量穩(wěn)定。

2.2.3.2 提取溶劑的考察[5]取樣量為0.5 g，分別以甲醇、1%磷酸甲醇溶液、3%磷酸甲醇溶液、7%磷酸甲醇溶液、10%磷酸甲醇溶液作為提取溶劑，進行測定，計算含量。結果表明，磷酸濃度在3%～7%范圍內(nèi)，含量穩(wěn)定。

根據(jù)實驗結果，將供試品溶液的制備改為：取本品粉末0.5 g，精密稱定，置25mL棕色容量瓶中，加3%磷酸甲醇溶液振搖5min，稀釋至刻度，搖勻，過濾即得。

取不含血竭藥材的其余藥材，按處方比例和工藝制備方法制備陰性樣品，并按供試品溶液的制備方法制備成陰性樣品溶液。

2.2.4 系統(tǒng)適應性試驗

取對照品溶液、供試品溶液及陰性樣品溶液各10μL，按“2.2.1”項下色譜條件進行測定，記錄色譜，見圖3。

由圖3可知，該條件下，血竭素峰與樣品中其他組分色譜峰可基線分離，血竭素與其相鄰色譜峰的分離度大于1.5，且陰性樣品無干擾。

2.2.5 線性關系考察

分別精密量取對照品溶液5 mL，對照品儲備液2、4、6、8 mL，分別置10 mL的棕色量瓶中，以3%的磷酸甲醇溶液稀釋至刻度，搖勻。分別進樣10μL，測定峰面積。以峰面積（Y）為縱坐標，進樣量（X，μg）為橫坐標，做線性分析，得回歸方程Y=22 785.4X+21.9（r=0.999 9）。結果表明，血竭素進樣量在0.050 80～0.813 36μg范圍內(nèi)呈良好的線性關系。

2.2.6 精密度試驗

精密吸取對照品溶液10μL，連續(xù)進樣5次，測定其峰面積，計算相對標準偏差（RSD）為0.7%。

2.2.7 穩(wěn)定性考察

取改進方法后的供試品溶液，于0、2、4、6、8 h分別測定血竭素的峰面積，計算峰面積的RSD為0.9%，即供試品溶液在8 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.2.8重復性考察

取同一批樣品5份，按改進后的供試品溶液制備方法制備供試品溶液，精密吸取10μL溶液，測定其血竭素含量，計算含量的RSD值為1.21%，表明方法重現(xiàn)性較好。

2.2.9 加樣回收率考察

精密稱取同一批樣品6份（0.25 g），分別加入血竭素高氯酸鹽對照品適量，依法測定，計算，結果見表1。

表1 加樣回收率實驗結果

2.2.10 與原方法比較

采用改進的血竭素含量測定方法與原標準中血竭素的含量測定方法分別對同一批跌打七厘片進行了測定，結果表明新方法重現(xiàn)性更好。結果見表2。

表2 兩種測定方法測定結果對比

3 討論

3.1 三七薄層鑒別樣品制備方法比較

因跌打七厘片為十味藥材全粉入藥，其所含成分較多，不易分離。原標準中三七的薄層鑒別樣品處理過程較為簡單，脫脂后以正丁醇萃取即得，導致斑點分離度不好，不易辨別。本實驗選用氧化鋁柱層析[1]及大孔吸附樹脂[6]進行樣品純化比較，結果表明氧化鋁柱層析效果明顯。

3.2 三七薄層鑒別展開劑選擇

本實驗亦對展開劑進行了考察，以展開劑氯仿-甲醇-水（13∶7∶2）10℃以下放置的下層液[7]，正丁醇-乙酸乙酯-水（4∶1∶5）上層溶液[8-10]，及氯仿-乙酸乙酯-甲醇-水（15∶40∶22∶10）于5～10℃放置12 h的下層液進行了對比研究，最終確定為后者，并取得了滿意的分離效果。

3.3 血竭含量測定中樣品制備方法的改進

本研究對血竭含量測定中的樣品制備方法進行了多方面的研究，包括取樣量、提取溶劑、提取方式、提取時間的比較。試驗發(fā)現(xiàn)，原標準中的含量測定取樣量為1.0 g，雖然仍在線性范圍內(nèi)，可能由于樣品中成分復雜，影響了血竭素高氯酸鹽的溶出，導致樣品含量偏低，且重現(xiàn)性不好，將樣品的取樣量改為0.5 g，且固定稀釋劑為3%磷酸甲醇溶液后，含量測定結果更加穩(wěn)定可靠。

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Im provement of identification and determ ination of content in Diedaqili Tablets

GAO Yanni GAOWuxiang XING Zhong WANGWenjuan
Chongqing Healn Pharmaceutical Co.,Ltd.,Chongqing 401520,China

ObjectiveTo improve the identification for Notoginseng radix et rhizoma and determination of dracorhodin both in the quality standard of Diedaqili Tablets.MethodsThe sampling pre-treatment and condition of chromatography for identification of Notoginseng radix et rhizome were improved,and the sampling pre-treatment for determination of dracorhodin wasmodified.ResultsThe TLC spotswere fairy clear and separated well;determination method was reliable and accurate.ConclusionThe improved method ismore sensitive andmore accurate,and it is suitable for the quality control of Diedaqili Tablets.

Diedaqili Tablets;Notoginseng radix et rhizoma;Identification;Dracorhodin;Determination

R927.2

A

1673-7210（2012）11（c）-0117-03

2012-07-23 本文編輯：衛(wèi)軻）