鄭 佳

（岳陽(yáng)職業(yè)技術(shù)學(xué)院 生物醫(yī)藥系，湖南 岳陽(yáng)414000）

近年來(lái)，隨著人們生活水平提高，脂肪肝在我國(guó)的發(fā)病率呈上升趨勢(shì)。脂肪肝可發(fā)展成脂肪性肝炎、肝纖維化、肝硬化，嚴(yán)重者可發(fā)展成肝癌。目前，臨床尚無(wú)治療脂肪肝的特效藥物。從天然產(chǎn)物中研究新的藥物制劑防治本病，已成為研究課題之一。肝脂消膠囊主要由虎杖、大黃、山楂、柴胡等中藥組成，具有降脂、利膽、消炎的作用，特別是對(duì)脂肪肝有較好的治療作用，其中虎杖為君藥，大黃為臣藥，而虎杖和大黃主要藥效成分為蒽醌類物質(zhì)（其中大黃素含量較高），具有保肝利膽降脂的功效。為便于臨床應(yīng)用，筆者擬對(duì)其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行研究，采用HPLC法測(cè)定了肝脂消膠囊中大黃素的含量，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 試藥與儀器

肝脂消膠囊（同濟(jì)醫(yī)院藥學(xué)部提供）；虎杖、大黃、山楂、柴胡等藥材（武漢國(guó)藥集團(tuán)提供）；大黃素（批號(hào)：110756－200110，中國(guó)藥品生物制品檢定所）。甲醇為色譜純，其他試劑均為分析純。美國(guó)Agilent 1100型高效液相色譜儀，包括7725i進(jìn)樣閥；UV－265FW型可見(jiàn)紫外分光光度計(jì)（日本島津）；SCQ－250型超聲波提取儀（上海申波超聲公司）；AUW 220D型雙量程分析天平（日本島津）。

2 大黃素含量測(cè)定［1－2］

2.1 色譜條件

色譜柱為 Hypersil－ODS 4.6mm×200mm（5μm）；流動(dòng)相：甲醇－0.1%磷酸（80：20）；流速：0.8mL／min，檢測(cè)波長(zhǎng)：254nm，柱溫：40℃，進(jìn)樣量10μL。

2.2 對(duì)照品溶液的制備

精密稱取大黃素對(duì)照品0.04122g于100mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，搖勻，精密吸取10mL于50mL量瓶，加甲醇至刻度，制成每1mL含大黃素82.44μg的溶液。

2.3 供試品溶液的制備

精密稱取肝脂消膠囊粉末1g，加入25mL氯仿和2.5mol／mL硫酸20mL，80℃水浴回流2h，冷卻稱定，氯仿補(bǔ)重，精密量取三氯甲烷10mL，蒸干，加甲醇溶解，移至10mL容量瓶中，定容，搖勻，即得。

分別精密吸取對(duì)照品溶液、供試品溶液各10μL，注入液相色譜儀，結(jié)果見(jiàn)圖1。

圖1 大黃素對(duì)照品和肝脂消膠囊高效液相色譜

2.4 陰性樣品溶液的制備

取缺虎杖、大黃藥材的其它藥材，按供試品制備方法得到陰性樣品溶液。

2.5 線性范圍

精密量取大黃素對(duì)照品溶液0.5、1.0、2.0、4.0、5.0mL分別置10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度。分別精密吸取上述對(duì)照品溶液各10μL，注入液相色譜儀，測(cè)定峰面積積分值。以大黃素峰面積的積分值A(chǔ)為縱坐標(biāo)，對(duì)照品溶液濃度C為橫坐標(biāo)，作線性回歸分析，得大黃素回歸方程：A＝64.41C＋218.85，r＝0.9997，說(shuō)明大黃素在4.122～41.22μg／mL濃度范圍內(nèi)呈良好線性關(guān)系。

2.6 精密度試驗(yàn)

準(zhǔn)確吸取對(duì)照品溶液10μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)定峰面積，大黃素RSD為1.07%。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取新制備的供試品溶液，每隔2h進(jìn)樣測(cè)定1次，共測(cè)定6次。結(jié)果供試品中的大黃素的RSD為0.86%，表明供試品溶液在12h內(nèi)穩(wěn)定。

2.8 回收率試驗(yàn)

精密稱取已知含量的供試品粉末（批號(hào)070101），分別加入質(zhì)量濃度為37.64μg／mL的大黃素對(duì)照品溶液3、4、5mL，同“2.3”項(xiàng)下方法，制成供試品溶液，吸取10μL，進(jìn)樣分析2次，記錄色譜圖，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 回收率試驗(yàn)

2.9 樣品含量測(cè)定

參照“2.3”項(xiàng)下方法操作，制備供試品溶液，精密吸取樣品溶液，注入液相色譜儀，依法測(cè)定，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 樣品含量測(cè)定結(jié)果

本品每粒以大黃素計(jì)算，暫定為：不得少于0.0383mg。

3 討論

大黃素是分布最廣泛的一種蒽醌類物質(zhì)，具有保肝利膽、降脂消炎等多種生物活性，是虎杖和大黃主要有效成分之一［3］。HPLC測(cè)定肝脂消膠囊中大黃素含量的方法學(xué)考察結(jié)果表明，在254nm檢測(cè)波長(zhǎng)下，以甲醇－0.1%磷酸（80：20）為流動(dòng)相，該方法在4.122μg／mL～41.22μg／mL間線性關(guān)系良好，重復(fù)性和穩(wěn)定性良好，加樣回收試驗(yàn)回收率達(dá)99.47%，RSD值為0.37%。該方法準(zhǔn)確，穩(wěn)定可靠，可作為大黃素的定量控制方法。

本研究參照《中華人民共和國(guó)藥典》2010版一部虎杖項(xiàng)下大黃素含量測(cè)定方法制訂肝脂消膠囊的含量測(cè)定方法，通過(guò)5個(gè)批次大黃素的含量測(cè)定，得到足夠數(shù)據(jù)表明各批樣品大黃素含量均處于0.0383mg／粒以上，且各批樣品含量均高于這一數(shù)據(jù)，據(jù)此確定本品含大黃素不少于0.0383mg／粒。經(jīng)過(guò)上述HPLC試驗(yàn)，為肝脂消膠囊的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的提高提供了大量實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，在生產(chǎn)中能更好地控制本制劑的質(zhì)量。

［1］王娟，袁紹莉.HPLC法測(cè)定護(hù)肝寧膠囊中大黃素的含量［J］.亞太傳統(tǒng)醫(yī)藥，2010，6（10）：25－26.

［2］金鑫，曲佳，李時(shí)放.HPLC法測(cè)定麻仁膠囊中大黃素及大黃酚的含量［J］.天津藥學(xué)，2011，23（4）：17－19.

［3］裴蓮花，吳學(xué)，金光洙.虎杖化學(xué)成分及藥理作用研究現(xiàn)狀［J］.延邊大學(xué)醫(yī)學(xué)學(xué)報(bào)，2006，29（2）：147－149.