蔣曉云，陳燕萍，常梅仙，楊紅梅，馬繼瓊，尹桂芳

（1.西雙版納州農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所，云南景洪666100；2.云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院生物技術(shù)與種質(zhì)資源研究所，云南昆明650223）

魔芋 （Amorphophalms konjac）為天南星科魔芋屬多年生草本植物，具有較發(fā)達(dá)的地下塊莖，是目前人類認(rèn)識(shí)的唯一大量含有葡甘聚糖的植物，被廣泛應(yīng)用于食品、醫(yī)藥、化工等方面。紅魔芋 [Amorphophallus bulbifer （Roxb.）Blume]是近年來(lái)在西雙版納州發(fā)現(xiàn)的一個(gè)魔芋新種，因其地下塊莖的肉質(zhì)顏色為紅色至淺紅色而得名。紅魔芋植株健壯，球莖形態(tài)好，葡甘聚糖含量高，且有較強(qiáng)的抗病性。魔芋無(wú)性繁殖使種芋帶病嚴(yán)重，品質(zhì)退化，優(yōu)良種芋的奇缺已成為魔芋產(chǎn)業(yè)發(fā)展的一個(gè)瓶頸問(wèn)題。通過(guò)開展紅魔芋塊莖組培培養(yǎng)基篩選試驗(yàn)，選擇最適宜的培養(yǎng)基配方，為紅魔芋組織快繁技術(shù)提供依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

選擇健康紅魔芋塊莖 （塊莖直徑10～15 cm）。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

1.2.1 愈傷組織誘導(dǎo)、不定芽分化培養(yǎng)基

選用8種不同激素配方 （表1），每個(gè)處理接種100瓶，每瓶接種1塊外植體，通過(guò)觀察記錄外植體生長(zhǎng)情況，找出適合于紅魔芋愈傷組織誘導(dǎo)、不定芽分化的培養(yǎng)基。培養(yǎng)基pH=5.8～6.0。

1.2.2 生根培養(yǎng)基

選用4種不同激素配方 （表2）對(duì)根進(jìn)行誘導(dǎo)試驗(yàn)，每個(gè)處理接種20瓶，通過(guò)觀察記錄找出最適合誘導(dǎo)紅魔芋生根的培養(yǎng)基。

表1 不同激素配比的培養(yǎng)基

表2 不同激素配比的生根培養(yǎng)基

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 外植體消毒

將紅魔芋的塊莖用自來(lái)水沖洗干凈，放入1%洗衣粉水中沖洗5 min，并攪拌，后用清水沖洗干凈。置于陰涼通風(fēng)處晾干，將晾干的塊莖外皮削凈，在75%酒精中浸泡30 s，無(wú)菌水沖洗1次；0.1%升汞水浸泡20min，無(wú)菌水沖洗4次；在無(wú)菌條件下削掉因滅菌損壞的表面，切成1 cm3左右的小塊待用。

1.3.2 愈傷培養(yǎng)

在25±2℃暗培養(yǎng)室內(nèi)進(jìn)行培養(yǎng)。

1.3.3 繼代培養(yǎng)

置于溫度25±2℃，光照8 h，光強(qiáng)1 500 lx的培養(yǎng)室培養(yǎng)。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

不定芽分化率 （%）=不定芽誘導(dǎo)材料/接種外植體未污染數(shù)×100

生根率 （%）=生根苗數(shù)/未污染苗數(shù)×100

愈傷組織誘導(dǎo)率 （%）=愈傷組織誘導(dǎo)數(shù)/接種外植體未污染數(shù)×100

2 結(jié)果與分析

2.1 不同培養(yǎng)基對(duì)愈傷組織誘導(dǎo)的影響

將處理好的紅魔芋塊莖外植體接種在A1～A8培養(yǎng)基上，試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，外植體培養(yǎng)10 d左右開始膨大，繼續(xù)培養(yǎng)20 d后，其表面有白色或粉紅色的愈傷組織。從表3可看出，誘導(dǎo)率隨培養(yǎng)基的不同表現(xiàn)出一定的差異，A2培養(yǎng)基誘導(dǎo)率明顯高于其它培養(yǎng)基，說(shuō)明MS＋6-BA 0.5mg/L+NAA 0.1 mg/L為最適合紅魔芋愈傷組織誘導(dǎo)的培養(yǎng)基。

表3 不同培養(yǎng)基對(duì)愈傷組織的誘導(dǎo)效果

2.2 不同培養(yǎng)基對(duì)不定芽分化的影響

將在同一種培養(yǎng)條件下獲得的愈傷組織切割成0.5 cm左右的小塊，接種在A1～A8培養(yǎng)基上，培養(yǎng)30 d左右，愈傷組織在不同激素的培養(yǎng)基上繼續(xù)生長(zhǎng)，表面形成淡綠色、粉紅色的不定芽。從表4可以看出，不同激素配比的培養(yǎng)基對(duì)不定芽分化有較大的影響， 在 A8 （MS＋6-BA 2.0 mg/L+NAA 1.0 mg/L）培養(yǎng)基上分化率達(dá)87.1%，說(shuō)明此培養(yǎng)基可作為紅魔芋不定芽分化的最適培養(yǎng)基。

表4 不同培養(yǎng)基對(duì)不定芽的分化效果

2.3 根誘導(dǎo)培養(yǎng)基的篩選

將切去愈傷組織的有效芽苗植入不同配比的生根培養(yǎng)基中，在溫度25±2℃、光強(qiáng)1 500 lx、每天光照8 h的條件下培養(yǎng)，10 d后觀察生根情況。試驗(yàn)結(jié)果表明 （表5），B1培養(yǎng)基 （1/2MS+NAA 1.0mg/L+活性炭1 g/L）中紅魔芋組培苗的生根率最大，達(dá)100%，其誘導(dǎo)的根長(zhǎng)度約為1 cm，且較粗壯，為最適合根誘導(dǎo)的培養(yǎng)基。

表5 不同配比培養(yǎng)基的生根效果

3 討論

（1）紅魔芋塊莖中含有多種多酚類物質(zhì)，在多酚氧化酶的作用下極易發(fā)生褐變，是制約紅魔芋組培成功的瓶頸問(wèn)題。為有效防止離體組織褐變，張興圍等在培養(yǎng)基中添加0.1%Vc和0.1%PVP，對(duì)防褐化有一定作用。王玲等從外源激素、培養(yǎng)基濃度、培養(yǎng)條件及培養(yǎng)材料的生理狀態(tài)等方面對(duì)魔芋組培過(guò)程中出現(xiàn)褐變的成因進(jìn)行了探討。應(yīng)用同行的研究成果，可有效防止紅魔芋塊莖組培中的褐變問(wèn)題。

（2）本試驗(yàn)是分別在MS基本培養(yǎng)基中添加不同濃度水平的6-BA和NAA，以觀察紅魔芋愈傷組織形成、不定芽分化和生根情況，最終選擇對(duì)愈傷組織形成快、不定芽長(zhǎng)勢(shì)好、增殖系數(shù)大的培養(yǎng)基配方作為最佳配方。試驗(yàn)結(jié)果表明，MS＋6-BA 0.5mg/L＋NAA0.1 mg/L為適宜愈傷組織誘導(dǎo)的培養(yǎng)基；MS＋6-BA 2.0mg/L＋NAA 1.0mg/L為適宜不定芽分化的培養(yǎng)基；1/2MS＋NAA 1.0mg/L＋活性炭1 g/L為適宜生根的培養(yǎng)基。