肖錦華

（無錫市第三人民醫(yī)院 檢 驗(yàn)科，江蘇 無 錫214041）

食管癌是指由食管鱗狀上皮或腺上皮異常增生所形成的惡性病變，其發(fā)展一般經(jīng)過上皮不典型增生、原位癌、浸潤癌等階段。食管鱗狀上皮不典型增生是食管癌的重要癌前病變，由不典型增生到癌變一般需要幾年甚至十幾年。正因?yàn)槿绱?，一些食管癌可以早期發(fā)現(xiàn)，并可以完全治愈［1］。吞咽不暢或有異物感的患者應(yīng)盡早行胃鏡檢查，以便發(fā)現(xiàn)早期食管癌或癌前病變［2］。對無條件開展或是無法耐受的患者，有無其他方法可供選擇？這是醫(yī)患一直都關(guān)心的問題。本研究應(yīng)用空斑形成抑制實(shí)驗(yàn)（PFC）聯(lián)合體外溶血素分泌測定（QHS）對食管癌進(jìn)行診斷，觀察兩種方法在食管癌診斷中的的價(jià)值，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)對象 選取2008年1月～2011年10月我院腫瘤科收治的食管癌患者120例作為食管癌組，男68例，女52例，年齡35～68歲，平均年齡（47.2±5.6）歲，均由病理檢查確診；另選同期60例健康志愿者作為對照組，男30例，女30例，年齡36～70歲，平均年齡（46.7±5.1）歲，均由我院統(tǒng)一招募。兩組患者性別、年齡等比較，無明顯差異，具有可比性。

1.2 PEC方法（瓊脂固相法）

1.2.1 實(shí)驗(yàn)材料 玻璃器皿（7×1.5 cm）；1 ml注射器和青霉素小瓶；水浴（47－49℃ ）；Hanks＇液；胎牛血清 （56℃30分鐘滅活，并經(jīng)羊紅細(xì)胞吸收）；瓊脂或瓊脂糖（表層基0.7%；底層基1.4%；用Hanks＇液配制 ）；右旋糖酐（DEAE－dxtran分子量50萬，用蒸餾水配置10 mg／ml）；抗－Ig血清（測定間接空斑用）；20%綿羊紅細(xì)胞懸液（Hanks＇液配制）；補(bǔ)體：豚鼠血清（用前經(jīng)綿羊紅細(xì)胞吸收）

1.2.2 試驗(yàn)方法 （1）將溶化的底層瓊脂傾注平皿形成一薄層，使其凝固，備用；（2）將每管含2 ml表層基的試管加熱溶化后，放入47－49℃水浴內(nèi)保溫；（3）免疫小鼠脾細(xì)胞懸液的制備：將免疫小鼠腹腔或靜脈注射綿羊紅細(xì)胞4×108個(gè)。測定直接溶血空斑用免疫后4天的小鼠。測間接空斑用免疫后10天的小鼠。拉脫頸椎致死，取出脾臟，用200目鋼網(wǎng)研磨過濾，細(xì)胞計(jì)數(shù)并檢查活細(xì)胞的百分率；（4）實(shí)驗(yàn)平皿的制備：將底層平皿和所有試劑預(yù)溫40℃左右。于水浴內(nèi)保溫的表層基中加入以下試劑：胎牛血清0.1 ml、DEAE－右旋糖酐0.1 ml、適當(dāng)稀釋的抗－Ig血清0.1 ml、20%羊紅細(xì)胞0.1 ml和脾細(xì)胞懸液0.1 ml充分混勻，傾注于鋪有底層之平皿內(nèi)，在水平臺上令表層基鋪平凝固后，37℃1小時(shí)，然后每個(gè)平皿加1：10稀釋的補(bǔ)體1.5－2.0 ml，均勻覆蓋其表面，再次溫育30分鐘，即可進(jìn)行空斑計(jì)數(shù)。

1.3 QHS抑制試驗(yàn)

1.3.1 實(shí)驗(yàn)材料 SRBC免疫小鼠；新鮮SRBC溶液 （1.5×108／ml）；經(jīng)SRBC吸收的補(bǔ)體溶液（來自豚鼠血清，經(jīng)SRBC吸收去除非特異性抗體）。

1.3.2 實(shí)驗(yàn)方法 （1）制備脾細(xì)胞：①斷頸處死SRBC免疫的小鼠；②取脾，以 Hank’s液漂洗；③經(jīng)200鉬銅網(wǎng)，以針?biāo)┭心テ⑴K成單細(xì)胞懸液；④收集細(xì)胞懸液，加適量 Hank’s洗滌；⑤離心1 500 rpm，5 min，棄上清；⑥細(xì)胞沉淀中加入4.5 ml蒸餾水，用力混勻40 s；⑦迅速加入0.5 ml 9%NaCl；⑧離心1 500 rpm，5 min；⑨棄上清，加入1.2 ml Hank’s溶液。（2）抗原－抗體－補(bǔ)體反應(yīng)：①加1ml SRBC溶液，加1 ml補(bǔ)體，徹底混勻；②37℃孵育1 h；③離心，3 000 rpm，5 min；④分光光度計(jì)檢測上清液413 nm波長下的吸光值。（3）計(jì)數(shù)。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法 采用13.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，組間比較采用t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析；計(jì)數(shù)資料應(yīng)用Ridit分析進(jìn)行統(tǒng)計(jì)。

2 結(jié)果

2.1 受檢者血清PFC抑制陽性率和血清PFC抑制率均數(shù)比較

以血清PFC抑制率50%為上限，大于50%則為陽性。食管癌組陽性率高達(dá)84.17%，對照組陽性率僅為11.67%。兩組陽性率經(jīng)Ridit檢驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。見表1。食管癌組血清PFC抑制率均值為0.64%，而對照組血清PFC抑制率為0.27%，經(jīng)T檢驗(yàn)，P＜0.05，說明兩組血清PFC抑制率比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表2。

表1 PFC抑制情況比較

表2 血清PFC抑制率均數(shù)比較

2.2 兩組QHS抑制率均數(shù)比較

食管癌組血清QHS抑制率均值為0.68%，而對照組血清QHS抑制率為0.35%，兩組血清QHS抑制率比較，P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見表3。

表3 血清QHS抑制率均數(shù)比較

3 討論

食管癌是最常見的惡性腫瘤之一。根據(jù)1990年－1992年中國惡性腫瘤統(tǒng)計(jì)分析發(fā)現(xiàn)：食管癌的粗死亡率為17.19／10萬，占全部腫瘤死因的第4位，比例為16.4%。流行病學(xué)研究顯示，吸煙和重度飲酒是引起食管癌的重要因素［3］。國外研究顯示，對于食管鱗癌，吸煙者的發(fā)生率增加3－8倍，而飲酒者增加7－50倍。在我國食管癌高發(fā)區(qū)，主要致癌危險(xiǎn)因素是致癌性亞硝胺及其前體物、某些霉菌及其毒素。食管癌高危人群主要是處于食管癌高發(fā)區(qū)、年齡在40歲上、有腫瘤家族史或者有食管癌的癌前疾病，或癌前病變者［4，5］。

根據(jù)臨床癥狀、體征及影像學(xué)檢查，符合下列之一者即可進(jìn)行臨床診斷：吞咽食物時(shí)有哽噎感、異物感、胸骨后疼痛或出現(xiàn)明顯的吞咽困難，食管造影發(fā)現(xiàn)食管粘膜局限性增粗、局部管壁僵硬、充盈缺損或龕影等表現(xiàn)。吞咽食物時(shí)有哽噎感、異物感、胸骨后疼痛或出現(xiàn)明顯的吞咽困難，胸部CT檢查發(fā)現(xiàn)食管管壁的環(huán)形增厚或不規(guī)則增厚。臨床診斷食管癌病例需經(jīng)病理學(xué)檢查確診［6］。

根據(jù)臨床癥狀、體征及影像學(xué)檢查，經(jīng)細(xì)胞學(xué)或組織病理學(xué)檢查，符合下列之一者可診斷為食管癌：纖維食管鏡檢查刷片細(xì)胞學(xué)或活檢陽性；臨床診斷為食管癌，食管癌病變（鎖骨上淋巴結(jié)、皮膚結(jié)節(jié)）經(jīng)活檢或細(xì)胞學(xué)檢查明確診斷者。但是，因于病理檢查的技術(shù)難度及患者的耐受程度，以及可能在活檢中并不能取到真正的病變部位等局限性，在臨床上尋求一種可靠的或是可供參考的診斷方法非常有意義。本文采取PFC聯(lián)合QHS抑制試驗(yàn)檢查食管癌，結(jié)果表明，其陽性檢測率均明顯高于健康人（P＜0.05）。

PFC測定技術(shù)又稱溶血空斑試驗(yàn)［7］，是一種體外檢測單個(gè)抗體形成細(xì)胞（漿細(xì)胞）的方法。自從1963年Jerne和Nordin首先建立PFC測定技術(shù)以來，使免疫學(xué)方法得到很大的發(fā)展。特別是間接溶血空斑測定法的建立，更擴(kuò)大了本實(shí)驗(yàn)的應(yīng)用范圍。它不僅可以測定產(chǎn)生Ig M類的抗體產(chǎn)生細(xì)胞，而且還可以檢測產(chǎn)生其他各類免疫蛋白及其亞類的抗體形成細(xì)胞。它不僅可以作為免疫基本理論研究的有力工具，而且還可以作為臨床篩檢抗腫瘤新藥以及研究中藥對機(jī)體免疫功能的影響（免疫增強(qiáng)劑和免疫抑制劑）的特異指標(biāo)。1983年王建光等［8］應(yīng)用此法測定胃癌病人血清抑制活性，獲陽性結(jié)果，與本研究的結(jié)果一致，提示此方法是一種可供選擇的方法。

［1］李秀敏，趙志敏，張淵智，等.食管癌高發(fā)區(qū)食管癌患者遺傳易感性對生存期的影響［J］.實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2010，26（4）：675.

［2］徐寶宏，陳雪華，李 靜，等.無痛胃鏡檢查的臨床觀察［J］.中華全科醫(yī)師雜志，2007，6（9）：558.

［3］李 顥，李會(huì)慶.食管癌的流行病學(xué)研究進(jìn)展［J］.中華胃腸外科雜志，2009，12（1）：96.

［4］賀宇形，李建濤，劉江惠，等.食管癌高發(fā)區(qū)人群免疫功能與食管癌發(fā)病相關(guān)性研究［J］.中華預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2009，43（1）：73.

［5］代麗萍，王凱娟，張建中，等.以人群為基礎(chǔ)的食管癌高發(fā)區(qū)危險(xiǎn)因素病例對照家系研究［J］.中華預(yù)防醫(yī)學(xué)雜志，2009，43（7）：597.

［6］丁以國，沈振亞，余云生，等.同時(shí)性食管重復(fù)癌27例的診斷與治療分析［J］.現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2009，17（6）：1098.

［7］王 霞，劉 靜，趙汝松，等.復(fù)雜環(huán)境介質(zhì)中全氟化合物的分析檢測現(xiàn)狀［J］.光譜實(shí)驗(yàn)室，2008，25（6）：1064.

［8］王建光，李一鳴，葉維曾，等.胃癌血清中免疫抑制因子的初步探討［J］.上海免疫學(xué)雜志，2011，3：53.

［9］鄧家剛，吳 光，運(yùn)晨霞，等.達(dá)肝清對小鼠免疫功能影響的實(shí)驗(yàn)研究［J］.中國現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué)，2008，25（4）：278.