陳紅云，申元英

（大理學(xué)院公共衛(wèi)生學(xué)院，云南大理 671000）

車(chē)前草幾種提取物的抗菌活性研究

陳紅云，申元英*

（大理學(xué)院公共衛(wèi)生學(xué)院，云南大理 671000）

目的：比較車(chē)前草不同提取物的抗菌活性。方法：采用分光光度比濁法，用車(chē)前草的8種溶劑室溫提取物對(duì)3種細(xì)菌進(jìn)行抗菌活性研究，8種溶劑分別是自來(lái)水、超純水、無(wú)水乙醇、甲醇、乙醚、石油醚、三氯甲烷和苯。結(jié)果：車(chē)前草提取物C、D、E、G、H均有抗菌活性（P＜0.05），提取物A、B沒(méi)有抗菌活性（P＞0.05）。結(jié)論：車(chē)前草的不同有機(jī)溶劑提取物均有良好的體外抗菌活性。

車(chē)前草；抗菌活性；最小抑菌濃度

上個(gè)世紀(jì)以來(lái)，隨著抗生素的發(fā)現(xiàn)和工業(yè)化生產(chǎn)，使細(xì)菌引起的傳染病得到了極大的控制。但是抗生素的濫用狀況也不容樂(lè)觀，由此產(chǎn)生了大批的耐藥菌，致使半合成和改良抗生素的耐藥周期越來(lái)越短，給臨床治療帶來(lái)了困難〔1〕。因此，盡快研究和開(kāi)發(fā)新的天然來(lái)源的或具有新作用機(jī)制的抗生素成為世界各國(guó)藥物學(xué)家、微生物學(xué)家研究的熱點(diǎn)。車(chē)前草（Plantago asiatica L.）屬車(chē)前科（Plantaginaceae）植物，在民間多用干燥全草入藥，始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》，列為上品。具有清熱利尿、祛痰、涼血、解毒等功效，用于水腫尿少，熱淋澀痛，暑濕瀉痢，痰熱咳嗽，吐血衄血，痛腫瘡毒等諸癥〔2〕。本研究在楊亞軍等〔3-5〕研究報(bào)道的基礎(chǔ)上，采用車(chē)前草多個(gè)溶劑的8種提取物對(duì)3種細(xì)菌進(jìn)行抗菌活性研究，從而比較車(chē)前草不同提取物的抗菌活性，為細(xì)菌性感染的治療及車(chē)前草的開(kāi)發(fā)應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥材 車(chē)前草于2011年7月采集于云南省大理市蒼山腳下，海拔高度為1 981 m的將軍洞，樣品經(jīng)有關(guān)專(zhuān)家鑒定為車(chē)前草植物〔6〕。草藥經(jīng)洗凈，除去泥沙及雜草，于室內(nèi)自然陰干得干燥植株全草，用搖擺式高速中藥粉碎機(jī)粉碎成長(zhǎng)短不規(guī)則狀粗粉（過(guò)40目篩），儲(chǔ)藏于4℃冰箱，備用。

1.2 儀器 隔水式恒溫培養(yǎng)箱（上海一恒科技有限公司），高壓蒸汽滅菌器（MLS-3780，三洋電機(jī)株式會(huì)社），雙人單面超凈工作臺(tái)（AIRTECH，蘇凈集團(tuán)安泰公司制造），無(wú)菌瓶（高溫121±0.5℃，高壓0.2± 0.05 Mpa滅菌的試劑瓶）。

1.3 試劑 MH瓊脂（生化試劑杭州天和微生物試劑有限公司，批號(hào)：110908），MH肉湯（生化試劑杭州天和微生物試劑有限公司，批號(hào)：110806）。

1.4 供試菌株 供試菌株為金黃色葡萄球菌（ATCC 25923）、大腸桿菌（ATCC 25922）、銅綠假單胞菌（ATCC 27853）由大理學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病原生物學(xué)綜合實(shí)驗(yàn)室提供。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 提取物制備 取8份車(chē)前草粗粉各50 g，分別加入自來(lái)水、超純水、無(wú)水乙醇、甲醇、乙醚、石油醚、三氯甲烷和苯200 mL，20～25℃浸潤(rùn)提取，每次24 h，共提取4次，合并提取液，減壓干燥的干粉，依次編號(hào)為提取物A、B、C、D、E、F、G、H號(hào)提取物。儲(chǔ)存于無(wú)菌瓶中4℃以下保存?zhèn)溆谩?-9〕。

2.2 供試菌株活化 將供試菌株菌種于MH瓊脂平板上，置37℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng)24 h活化，待用。

2.3 菌液制備 挑取活化好的瓊脂平板上形態(tài)相同的菌落，用滅菌生理鹽水校正菌液濃度，使其相當(dāng)于0.5麥?zhǔn)蠘?biāo)準(zhǔn)比濁管，再用MH液體培養(yǎng)基稀釋后，備用，稀釋后的菌液在15 min內(nèi)接種完〔10-11〕。

2.4 最低抑菌濃度（MIC）測(cè)定 取無(wú)菌小試管15支為一組，共30組。其中第13、14、15管分別為“原液對(duì)照管”、“MH肉湯對(duì)照管”、“供試菌生長(zhǎng)對(duì)照管”。每支試管加入肉湯2 mL。配制8種不同提取物原液濃度為250 mg/mL，用移液器吸取藥液1 mL放入第1管內(nèi)，混勻后吸取1 mL放入第2管，依次逐管進(jìn)行稀釋到第12管，最后第12管混勻后取出1 mL棄之。除第13、14管外，每支管加入菌液1 mL，置37℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，培養(yǎng)24 h后觀察結(jié)果。在對(duì)照符合要求的條件下，凡無(wú)肉眼可見(jiàn)的細(xì)菌生長(zhǎng)的藥物最低濃度即為藥物對(duì)該供試菌的MIC〔12-13〕。

2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)方法 數(shù)據(jù)資料采用統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件Epidata 3.1版錄入，檢驗(yàn)數(shù)據(jù)資料的有效性，SPSS 16.01進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，統(tǒng)計(jì)數(shù)值P＜0.05，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

車(chē)前草各提取物在各管中的濃度見(jiàn)表1，各提取物對(duì)供試菌的作用見(jiàn)表2。

表1 車(chē)前草各提取物在各管中的濃度（mg/mL）

表2 車(chē)前草各提取物對(duì)供試菌的MIC（mg/mL）

由表2結(jié)果顯示：車(chē)前草各種提取物對(duì)供試菌的抑制作用為，車(chē)前草提取物C、D、E、G、H均有抗菌活性（P＜0.05），提取物A、B沒(méi)有抗菌活性（P＞0.05），其中提取物F對(duì)銅綠假單胞菌沒(méi)有抗菌活性（P＞0.05）。

4 討論與結(jié)論

本次實(shí)驗(yàn)采用不同的溶劑對(duì)車(chē)前草的干品進(jìn)行有效成份的提取，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，車(chē)前草的自來(lái)水和超純水提取物無(wú)抗菌活性，而車(chē)前草的不同有機(jī)溶劑提取物均有良好的體外抗菌活性。此次試驗(yàn)結(jié)果與孔陽(yáng)等〔14〕研究者采用濾紙片擴(kuò)散法對(duì)車(chē)前草乙醇提取物的抗菌實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致。

通過(guò)車(chē)前草不同的有機(jī)溶劑提取物對(duì)3種菌株的MIC值大小不同，并且對(duì)同一菌株也有大小不同的MIC。說(shuō)明不同有機(jī)溶劑提取的車(chē)前草中提取物是由不同種的化學(xué)成分組成，它們對(duì)不同菌株的抗菌機(jī)制有所不同。其抗菌結(jié)果差異和作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。本次實(shí)驗(yàn)為體外抗菌實(shí)驗(yàn)，至于在體內(nèi)能否有抗菌效果，還需要通過(guò)動(dòng)物模型進(jìn)行體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究。

志謝 大理學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院病原微生物學(xué)綜合實(shí)驗(yàn)室的王濤老師，以及公共衛(wèi)生學(xué)院的張文、林麗佳同學(xué)在研究中給予幫助和支持！

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Study on the Antibacterial Activity of Plantago asiatic L.

CHEN Hongyun,SHEN Yuanying*
（College of Public Health，Dali University,Dali，Yunnan,671000，China）

Objective:To compare the antibacterial ability of extracts that was extracted by different dissolvent from plantain. Methods:Tap-water,ultra-pure water,ethanol,methanol,ether,petroleum ether,chloroform and benzene were used to extract the antibacterial ingredients of plantain at room temperature;three kind bacteria were medium containing different extracts,and Spectrophotometry assays were performed to measure the antibacterial ability of extracts.Results:The antibacterial ability of extracts according to C,D,E,G,H（P＜0.05）priority was ingredient extracted.Ingredients extracted by Tap-water,ultra-pure water display non-antibacterial ability（P＞0.05）.Conclusion:Organic solvents were more effective as dissolvent to extract antibacterial ingredients of plantain.

Plantago asiatica L.antimicrobial activity;MIC

Q949.36［文獻(xiàn)標(biāo)志碼］A［文章編號(hào)］1672-2345（2012）03-0021-03

2011-12-20

2012-01-11

陳紅云，碩士研究生，實(shí)驗(yàn)師，主要從事分子流行病學(xué)的研究.

*通信作者：申元英，教授.

（責(zé)任編輯 毛本勇）