王曉賢 劉潔 周永紅

XT-4000i血液分析儀血小板兩種測定方法與血涂片復(fù)檢的對比

王曉賢 劉潔 周永紅

目的分析血液分析儀XT-4000i血小板兩種測定方法的準確性和血涂片復(fù)檢的關(guān)系。方法選取50例電阻抗法(PLT-I)計數(shù)正常無提示有血小板直方圖異常的標本，50例PLT-I計數(shù)大于100 ×109/L并提示有血小板直方圖異常(小紅細胞和紅細胞碎片)的標本和50例PLT-I計數(shù)小于100× 109/L并提示有血小板直方圖異常(大血小板和血小板聚集)的標本，用光學法(PLT-O)計數(shù)血小板和涂片鏡檢觀察血小板數(shù)量和形態(tài)分布并間接計數(shù)血小板的數(shù)量，以鏡檢法為參考方法，評價電阻抗法和光學法的準確性。結(jié)果50例電阻抗法(PLT-I)計數(shù)正常無提示有血小板直方圖異常的標本用阻抗法和光學法檢測血小板與顯微鏡法對比差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。在小紅細胞組、紅細胞碎片組和大血小板組中，電阻抗法和鏡檢法的計數(shù)結(jié)果差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，光學法和鏡檢法的計數(shù)結(jié)果差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，光學法的準確性優(yōu)于電阻抗法。但在血小板聚集組中，電阻抗法和鏡檢法的計數(shù)結(jié)果差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)光學法和鏡檢法的計數(shù)結(jié)果差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。結(jié)論光學法能較好地消除小紅細胞、紅細胞碎片和大血小板等因素對血小板計數(shù)的影響，但無法消除血小板聚集對計數(shù)血小板的影響，應(yīng)與顯微鏡法復(fù)核，使結(jié)果更準確、可靠。

血小板計數(shù);電阻抗法;光學法;顯微鏡間接計數(shù)法

目前，全自動血液分析儀對血小板的計數(shù)方法有電阻抗法和光學法。由于血小板特殊的生理特點，血小板計數(shù)易受大血小板、血小板聚集和紅細胞等因素的干擾而影響計數(shù)結(jié)果。本文使用電阻抗法與光學法同時進行血小板計數(shù)并與人工鏡檢法進行對比，評價電阻抗法和光學法的差異性及臨床應(yīng)用。

1 材料與方法

1.1 儀器 日本Sysmex XT-4000i全自動血液分析儀，湖北武漢致遠的EDTA-K2抗凝管，奧林巴斯雙目光學顯微鏡。

1.2 試劑 采用Sysemx XT-4000i全自動血液分析儀及原裝配套試劑。定期開展質(zhì)控和較準，嚴格按照儀器操作作業(yè)指導(dǎo)書的要求執(zhí)行進行檢測，檢測前儀器狀態(tài)良好，血涂片染色液采用瑞氏染色。

1.3 方法 從我院住院和門診患者用Sysemx XT-4000i檢測血常規(guī)的標本中遵循不重復(fù)的原則選取50例電阻抗法(PLTI)計數(shù)正常無提示有血小板直方圖異常的標本為A組，50例PLT-I計數(shù)大于100×109/L并提示有血小板直方圖異常(小紅細胞和紅細胞碎片)的標本為B組和50例PLT-I計數(shù)小于100×109/L并提示有血小板直方圖異常(大血小板和血小板聚集)的標本為C組，用光學(PLT-O)計數(shù)血小板和涂片鏡檢觀察血小板數(shù)量和形態(tài)分布并間接計數(shù)血小板的數(shù)量。血涂片的制作參照《臨床檢驗基礎(chǔ)》第4版的標準，要求厚薄適宜，頭體尾分明，邊緣整齊。血涂片自然干燥后用瑞氏染液染色后鏡檢，觀察區(qū)域從約50% 的紅細胞互相重疊區(qū)域開始，并向紅細胞完全散開的區(qū)域推移，用油鏡觀察血小板的形態(tài)和數(shù)量［1］。正常情況下，在血片厚薄適中區(qū)域(每個紅細胞彼此相互接觸但不重疊)，每個油鏡視野，約有血小板8～15個［2］;少于8個/油鏡視野可初步認為血小板減少，大于30個/油鏡視野則可初步認為血小板增加。油鏡下的細胞形態(tài)異常判斷標準:①小紅細胞:直徑小于6 um。②紅細胞碎片:各種不完整形狀的細胞碎片。③血小板聚集:血小板5個以上成堆。④巨、大血小板:直徑6 um以上或直徑4～6 um［3］。顯微鏡間接計數(shù)血小板:按照Sutor AH等［4］人推薦的方法，在血片體尾交界處區(qū)，采取城垛式計數(shù)方式無重復(fù)的計數(shù)100個血小板(N目測血小板數(shù))和所涉及的視野中所有的白細胞的總數(shù)(N目測白細胞數(shù))，對于血小板嚴重減少的患者，計數(shù)不少于50個血小板;以儀器計數(shù)的白細胞數(shù)(N儀器×109/L)為參考，計算出血小板的總數(shù)，血小板數(shù)量N=(N目測血小板數(shù)/N目測白細胞數(shù))×N儀器×109/L［1］。以鏡檢法為參考方法，評價電阻抗法和光學法的準確性。

2 結(jié)果

2.1 3種方法血小板計數(shù)結(jié)果及直方圖異常標本中存在的干擾因素見表1。

涂片顯示小紅細胞、紅細胞碎片、大血小板、血小板聚集是病理標本中常見的干擾物質(zhì)。以鏡檢法為參考方法，在A組中分別與電阻抗法比較P＞0.05，與光學法比較P＞0.05，因此電阻抗法被大部分儀器應(yīng)用。

2.2 干擾因素對光學法和阻抗法PLT計數(shù)結(jié)果的影響分析見表2。

在小紅細胞、紅細胞碎片和大血小板組中，電阻抗法和鏡檢法的計數(shù)結(jié)果差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，光學法和鏡檢法的計數(shù)結(jié)果差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)，光學法的準確性優(yōu)于電阻抗法。但在血小板聚集組中，電阻抗法和鏡檢法的計數(shù)結(jié)果差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)光學法和鏡檢法的計數(shù)結(jié)果差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，光學法也存在局限性。

3 討論

血小板計數(shù)是止血凝血檢查最常用的試驗之一。傳統(tǒng)的電阻抗檢測技術(shù)，單純靠細胞體積一個檢測參數(shù)，無法有效區(qū)分其他干擾物質(zhì)，特別是無法區(qū)分病理樣本中的大血小板、小紅細胞以及細胞碎片。為了提高血小板計數(shù)結(jié)果的準確性，近年來光學法血小板計數(shù)被逐漸應(yīng)用到自動血液分析中。本文觀察光學法能較好地消除小紅細胞、紅細胞碎片和大血小板等因素對計數(shù)血小板影響，但無法消除血小板聚集對計數(shù)血小板的影響。與儀器自動計數(shù)血小板相比，血涂片觀察血小板有其顯著的優(yōu)點。在顯微鏡下，通過肉眼能直觀地區(qū)分血小板、紅細胞、細胞碎片，觀察血小板聚集情況，能直接排出大血小板、小紅細胞、細胞碎片和血小板凝集對血小板的干擾，并能直接計數(shù)各種細胞的比例，這就是顯微鏡鏡檢間接計數(shù)血小板可行性的理論基礎(chǔ)［1］。臨床實際工作中可用PLT-I法作為常規(guī)標本檢測，當遇到某些特殊標本(如混有大型血小板或小球性紅細胞時或細胞碎片等)，提示PLT-I結(jié)果可信度低(血小板異常)，建議使用PLT-O法再次檢測，使血小板結(jié)果更加可信，這樣可節(jié)約試劑成本、降低復(fù)查次數(shù)，但在一些特殊病例如EDTA依賴性的血小板聚集時應(yīng)與顯微鏡法復(fù)核，使結(jié)果更準確、可靠。

［1］劉善鳳，王利民，曾筱倩，胡麗華.涂片鏡檢對初步糾正血小板假性降低的意義.臨床血液學雜志，2010，23(4):193-195.

［2］朱忠勇.應(yīng)用血液分析儀后復(fù)查血片的內(nèi)容和方法及程序.中華醫(yī)學檢驗雜志，2003，26(12):785-787.

［3］朱忠勇.準確計數(shù)血小板方法學研究進展.國外醫(yī)學臨床生物化學與檢驗分冊，2002，23:121-125.

［4］ANTON H SUTOR，M D.ASTRIDGROH MANN，etal.Problems with platelet counting in thrombocytopenia.A rapidmanualmethodtomeasur e lowplatelet counts.Seminar s in thrombosis and hemostasis，2001，27(3):237-243.

350009 福建省福州市第一醫(yī)院檢驗科

1.4 統(tǒng)計學方法 以鏡檢法為參考方法，分別與電阻抗法和光學法進行配對t檢驗和分析。所有數(shù)據(jù)使用SPSS 10.0軟件進行統(tǒng)計分析。

表1 3種方法血小板計數(shù)結(jié)果及標本中存在的干擾因素(x±s，×109/L)

干擾因素組別 例數(shù) 電阻抗法 光學法 鏡檢法 小紅細胞 紅細胞碎片 大血小板 血小板聚集A組 50 191±49.2 195±47.3 197±49.8無 無 無 無B組 50 249±82.9 200±83.2 203±85.4 15 35 無 無C組 50 66.8±13.4 92.3±15.6 94.7±16.1 無 無30 20

表2 干擾因素對光學法和阻抗法PLT計數(shù)結(jié)果的影響分析(x±s，×109/L)

注:與鏡檢法比較，［1］P＜0.05;［2］P＜0.05

例數(shù) 電阻抗法 光學法 鏡檢102±8.6 203±97.5 200±99.4紅細胞碎片 35 257±101［1］237±103 240±106大血小板 30 75.4±8.3［1］94.6±7.9 96.0±8.5血小板聚集 20 53.9±8.1［2］58.4±8.4［2］組別法小紅細胞 15 229±99.0［1］