郭躍偉，黃偉暉，陳雯婷，劉海利

（中國(guó)科學(xué)院上海藥物研究所國(guó)家新藥研究重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海 201203）

水團(tuán)花Adinapilulifera是茜草科（Rubiaceae）水團(tuán)花屬植物，分布在福建、江西、湖南、浙江、廣西和廣東等地，它的根部可供藥用，有清熱利濕、消瘀定痛、止血生肌的功效[1]。我國(guó)學(xué)者曾對(duì)該植物化學(xué)成分進(jìn)行研究，從中分離得到生物堿、色原酮、雞納酸及其糖脂等化學(xué)成分[2-3]。為了進(jìn)一步尋找該植物的生物活性成分，闡明其藥理作用的物質(zhì)基礎(chǔ)，課題組對(duì)采自廣東的水團(tuán)花根部進(jìn)行了系統(tǒng)的化學(xué)成分研究。從水團(tuán)花根部位分得12個(gè)化合物，經(jīng)波譜分析和化學(xué)方法分別鑒定為quinovic acid（1），quinovic acid 3-β-D-glucopyranoside（2），quinovic acid 3-β-D-glucopyranoside（28→1）-β-D-glucopyranoside（3），quinovic acid 3-β-D-glucopyranosyl-（1→ 3）-rhamnopyranoside（4），蘆薈大黃素（5），sweroside（6），loganin（7），noreugenin（8），undulatoside B（9），5，7-dihydroxy-2-methyl-chromone 7-O-β-D-apiofuranosyl-（1→6）-β-D-glucopyranoside（10），β-谷甾醇（11）和胡蘿卜苷（12）（見(jiàn)圖1）。其中，化合物4、5、6、11和12為首次從水團(tuán)花植物中分離得到。本文報(bào)道這些化合物的提取分離和結(jié)構(gòu)鑒定工作。

1 儀器和材料

Bruker-DRX 400型核磁共振儀，以TMS為內(nèi)標(biāo)；Finnigan-MAT-95質(zhì)譜儀。柱層析和薄層層析硅膠（青島海洋化工廠），其余試劑均為分析純。實(shí)驗(yàn)材料采自廣東省肇周鼎湖山，由中國(guó)科學(xué)院上海藥物研究所沈金貴教授鑒定為茜草科水團(tuán)花屬水團(tuán)花Adinapilulifera的根。

2 提取分離

將1 kg水團(tuán)花根粗粉用95%的乙醇浸提，超聲3次，過(guò)濾，合并濾液后減壓濃縮，混懸于水中，分別用乙酸乙酯和正丁醇萃取，得乙酸乙酯萃取部位4 g，正丁醇萃取部位50 g。正丁醇萃取部位（50 g）經(jīng)100～200目硅膠柱層析，以三氯甲烷-甲醇（95∶5→90∶10→80∶20→70∶30→0∶100）梯度洗脫，每個(gè)梯度3000 mL，每個(gè)流分收集約1000 mL，共收集18份，經(jīng) TLC檢查，合并第1～3份，4～5份。

正丁醇部位第1～3份（2.1 g）經(jīng)200～300目硅膠柱層析，以石油醚 -丙酮（95∶5→90∶10→85∶15→75∶25→50∶50）梯度洗脫，每個(gè)梯度 300 mL，每個(gè)流分收集約100 mL，共收集16份，其中第4-5份析出白色結(jié)晶為化合物11（15 mg），第10～13份析出橙黃色結(jié)晶為化合物8（25 mg），第14份析出白色粉末狀晶體為化合物1（11 mg）。

圖1 化合物1～10的結(jié)構(gòu)式

正丁醇部位第4～5份（1.5 g）經(jīng)200～300目硅膠柱層析，以三氯甲烷 -甲醇 -水（9∶1∶0.1→8.5∶1.5∶0.1）梯度洗脫，每個(gè)梯度500 mL，每個(gè)流分收集約100 mL，共收集10份，其中第2～3份再經(jīng)硅膠柱層析以三氯甲烷-甲醇-水（9.5∶0.5∶0.05→9∶1∶0.1）梯度洗脫，經(jīng)TLC檢查后合并相同流分，分得化合物12（22 mg）和化合物2（28 mg）；第4份再經(jīng)200～300目硅膠柱層析，以正丁醇-三氯甲烷-醋酸 -水（6∶2∶0.3∶0.3）洗脫后經(jīng) RP-18反相硅膠柱層析，以50%→70%甲醇／水純化，分得化合物4（12 mg）；第5份經(jīng) Sephadex LH-20凝膠柱層析，以甲醇洗脫，每流分收集20 mL，經(jīng)TLC檢查，合并第4～7份再上硅膠柱（200～300目），以正丁醇 -三氯甲烷 -醋酸 -水（6∶2∶0.5∶0.5）洗脫后，合并有紫外吸收部分，用反相硅膠柱純化，分得化合物7（12 mg）。

正丁醇部位第6份（105 mg）經(jīng)200～300目硅膠柱柱層析，以三氯甲烷-甲醇-水（9.5∶0.5∶0.05→9∶1∶0.1→8.5∶1.5∶0.1）梯度洗脫，每個(gè)梯度200 mL，每個(gè)流分收集約50 mL，共收集12份，經(jīng)TLC檢識(shí)，合并為6份。第1份放置若干天有橙紅色針狀析出，為化合物5（8 mg）；第4份再上硅膠柱（200-300目），以正丁醇-三氯甲烷-醋酸-水（6∶1.5∶0.5∶0.5）洗脫后，合并有紫外吸收部分，得化合物 6（26 mg）。

正丁醇部位第8份（1.5 g）經(jīng)G-60型硅膠柱層析，經(jīng)三氯甲烷 -甲醇 -水（8∶2∶0.1）洗脫，每個(gè)流分收集約50 mL。經(jīng)TLC檢查，合并其中第2～4份再經(jīng)硅膠柱（200～300目），以三氯甲烷 -甲醇 -水（7.5∶2.5∶0.1）洗脫，經(jīng) TLC檢查后合并相同成分，合并為前后2份，分別經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱層析純化，前一份得化合物3（15 mg），后一份得化合物 9（10 mg）。

正丁醇部位第11份（50 mg）經(jīng)Sephadex LH-20凝膠柱層析以甲醇洗脫，每流分收集20 mL，經(jīng)TLC檢查，合并第3～6份，再反復(fù)經(jīng)硅膠柱（200-300目）層析，得化合物10（32 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

3.1 化合物1

白色粉末。1H-NMR（C5D5N，400 MHz）δ6.01（1H，brs，H-12），3.25（1H，dd，J＝0.2 Hz，H-3），2.80（1H，m，H-18），1.21（3H，d，J＝6.2 Hz，19-CH3），1.16（3H，s），1.06（3H，s），0.99（3H，s），0.95（3H，s），0.81（3H，d，J＝6.5 Hz，20-CH3）；13C-NMR（C5D5N，100 MHz）δ39.0（t，C-1），26.1（t，C-2），77.7（d，C-3），39.0（s，C-4），55.5（d，C-5），18.6（t，C-6），36.8（t，C-7），39.0（s，C-8），47.0（d，C-9），37.1（s，C-10），23.1（t，C-11），128.7（d，C-12），133.8（s，C-13），56.5（s，C-14），27.9（t，C-15），25.2（t，C-16），48.4（s，C-17），54.7（d，C-18），37.4（d，C-19），39.8（d，C-20），30.2（t，C-21），36.8（t，C-22），28.6（q，C-23），16.3（q，C-24），16.3（q，C-25），18.0（q，C-26），177.7（s，C-27），179.8（s，C-28），18.6（q，C-29），21.0（q，C-30）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[4]報(bào)道的化合物 quinovic acid基本一致。

3.2 化合物2

白色粉末。1H-NMR（CD3OD，400 MHz）δ5.60（1H，brs，H-12），4.30（1H，d，J＝8.1 Hz，H-1′），3.85（1H，dd，J＝11.9，2.2 Hz），3.65（1H，dd，J＝11.9，5.1 Hz），3.10～3.40（4H，overlap），1.02（3H，s），0.98（3H，s），0.91（3H，d），0.90（3H，d），0.89（3H，s），0.84（3H，s）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[5]報(bào)道的 quinovic acid 3-β-D-glucopyranoside基本一致。

3.3 化合物3

白色針狀。1H-NMR（CD3OD，400 MHz）δ5.61（1H，brs，H-12），5.38（1H，d，J＝8.0 Hz，H-1″），4.30（1H，d，J＝7.7 Hz，H-1′），3.81（2H，m），3.66（2H，m），3.10～3.45（8H，overlap），1.01（3H，s），0.97（3H，s），0.92（3H，d），0.91（3H，d），0.88（3H，s），0.83（3H，s）；13C-NMR（CD3OD，100 MHz）δ40.5（t，C-1），27.6（t，C-2），91.2（d，C-3），40.6（s，C-4），55.8（d，C-5），19.7（t，C-6），38.3（t，C-7），40.7（s，C-8），48.5（d，C-9），38.3（s，C-10），24.4（t，C-11），131.4（d，C-12），133.7（s，C-13），57.8（s，C-14），26.3（t，C-15），26.9（t，C-16），48.9（s，C-17），57.4（d，C-18），38.7（d，C-19），41.3（d，C-20），31.6（t，C-21），37.5（t，C-22），29.0（q，C-23），19.7（q，C-24），17.5（q，C-25），18.6（q，C-26），179.6（s，C-27），178.4（s，C-28），17.6（q，C-29），22.0（q，C-30），107.2（d，C-1′），75.7（d，C-2′），79.1（d，C-3′），72.1（d，C-4′），78.1（d，C-5′），63.3（t，C-6′），96.1（d，C-1″），74.4（d，C-2″），78.7（d，C-3″），71.7（d，C-4″），78.7（d，C-5″），63.0（t，C-6″）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6-7]報(bào)道的 quinovic acid 3-β-D-glucopyranoside（28→1）-β-D-glucopyranoside基本一致。

3.4 化合物4

白色粉末，ESI-MSm／z：793[M-H]-，分子式為 C42H66O14。1H-NMR（CD3OD，400 MHz） δ4.51（1H，brs，H-1′），4.29（1H，d.J＝6.9Hz，H-1″），3.68（1H，dd，J＝6.5，6.2 Hz），3.55（1H，m），3.00～3.40（8H，overlap），1.15（3H，d），1.05（3H，d），0.80（3H，s），0.75（3H，d），0.72（3H，s），0.72（3H，s），0.61（3H，s）；13C-NMR（CD3OD，100 MHz）δ40.3（t，C-1），27.0（t，C-2），90.8（d，C-3），40.5（s，C-4），57.1（d，C-5），19.9（t，C-6），38.4（t，C-7），38.8（s，C-8），48.5（d，C-9），38.4（s，C-10），24.3（t，C-11），131.0（d，C-12），134.4（s，C-13），57.8（s，C-14），24.3（t，C-15），26.2（t，C-16），49.5（s，C-17），56.0（d，C-18），38.8（d，C-19），40.9（d，C-20），31.7（t，C-21），38.4（t，C-22），29.2（q，C-23），18.4（q，C-24），17.6（q，C-25），19.6（q，C-26），179.6（s，C-27），180.2（s，C-28），18.7（q，C-29），22.0（q，C-30），104.5（d，C-1′），72.7（d，C-2′），82.7（d，C-3′），73.5（d，C-4′），70.3（d，C-5′），17.4（t，C-6′），107.1（d，C-1″），75.8（d，C-2″），78.1（d，C-3″），71.6（d，C-4″），78.1（d，C-5″），67.4（t，C-6″）。以上理化常數(shù)和波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[8-9]報(bào)道的基本一致，鑒定為quinovic acid 3-β-D-glucopyranosyl（1→3）-rhamnopyranoside。

3.5 化合物5

橙紅色針晶。1H-NMR（C5D5N，400 MHz）δ8.16（1H，s，H-4），7.90（1H，d，J＝7.4 Hz，H-7），7.69（1H，s，H-2），7.61（1H，dd，J＝8.1，7.8 Hz，H-6），7.37（1H，d，J＝8.3 Hz，H-5），5.00（2H，s，3-CH2OH）；13C-NMR（C5D5N，100 MHz）δ163.1（s，C-1），117.9（d，C-2），155.0（s，C-3），121.3（d，C-4），119.8（d，C-5），137.3（d，C-6），124.6（d，C-7），162.5（s，C-8），181.8（s，C-9），192.7（s，C-10），116.4（s，C-1′），134.0（s，C-4′），134.2（s，C-5′），115.0（s，C-8′），63.2（t，3-CH2OH）。綜合以上波譜數(shù)據(jù)并與文獻(xiàn)[10]對(duì)照，確定化合物5為蘆薈大黃素。

3.6 化合物6

透明液狀。1H-NMR（C5D5N，400 MHz）δ7.93（1H，s，H-3），5.78（1H，s，H-1），5.32（1H，d，J＝7.4 Hz，H-1′），5.32（1H，m，H-8），5.00（2H，m，H-10），4.10～4.60（5H，overlap），4.00（2H，m，H-7），3.60～3.90（1H，overlap），3.00（1H，m.H-5），2.60（1H，m，H-9），1.21～1.70（2H，m，H-6）；13C-NMR（CD3OD，100 MHz）δ98.4（d，C-1），154.5（d，C-2），106.5（s，C-3），28.9（d，C-4），26.4（t，C-5），70.2（t，C-6），133.8（d，C-7），44.3（d，C-8），121.3（t，C-9），169.0（s，C-10），100.1（d，C-1′），75.2（d，C-2′），78.3（d，C-3′），72.0（d，C-4′），78.8（d，C-5′），63.1（t，C-6′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[11]報(bào)道的 sweroside基本一致。

3.7 化合物7

透明液狀，ESI-MSm／z：779（2M-H）-，分子式為 C17H26O10。1H-NMR（CD3OD，400 MHz） δ7.39（1H，s，H-3），5.21（1H，d，J＝4.4 Hz，H-1），4.61（1H，d，J＝7.8 Hz，H-1′），4.02（1H，m），3.88（1H，dd），3.64（3H，s，-OCH3），3.61（1H，m，H-8），3.10～3.55（3H，overlap），2.21（1H，ddd，J＝7.9，1.5 Hz，H-5），2.01（2H，m，H-9），1.85（1H，m，H-6），1.60（1H，m，H-7），1.09（3H，d，J＝6.9 Hz，7-CH3）；13C-NMR（CD3OD，100 MHz）δ98.2（d，C-1），152.6（d，C-3），114.5（s，C-4），32.6（d，C-5），42.7（d，C-6），47.0（d，C-7），75.5（d，C-8），43.2（t，C-9），13.9（q，C-10），170.0（s，C-11），52.1（q，-OCH3），100.5（d，C-1′），75.2（d，C-2′），78.5（d，C-3′），72.0（d，C-4′），78.8（d，C-5′），63.2（t，C-6′）。綜合以上理化常數(shù)和波譜數(shù)據(jù)，并與文獻(xiàn)[12]對(duì)照，確定化合物7為loganin。

3.8 化合物8

淡黃色針晶。1H-NMR（C5D5N，400 MHz）δ6.68（1H，d，J＝2.2 Hz，H-8），6.58（1H，d，J＝2.2 Hz，H-6），6.07（1H，s，H-3），2.06（3H，s，2-CH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[5]報(bào)道的noreugenin基本一致。

3.9 化合物9

無(wú)定型白色粉末，[α]20D＝-67.8°（c0.20，吡啶），ESI-MSm／z：485[M-H]-，分子式為 C21H26O13。1H-NMR（C5D5N，400 MHz） δ7.00（1H，d，J＝2.2 Hz，H-8），6.78（1H，d，J＝2.2 Hz，H-6），6.04（1H，s，H-3），5.60（1H，d，J＝7.6 Hz，H-1′），4.91（1H，d，J＝7.1 Hz，H-1″），4.76（1H，d，J＝9.9 Hz，H-6′b），4.36（1H，m，H-3′），4.34（1H，d，J＝9.9 Hz，H-6′a），4.33（1H，m，H-5′），4.32（1H，d，J＝10.2 Hz，H-5″b），4.25（1H，m，H-2′），4.20（1H，m，H-4″），4.18（1H，m，H-4′），4.10（1H，m，H-3″），4.07（1H，m，H-2″），3.61（1H，d，J＝0.9 Hz，H-5″a），2.10（3H，s，2-CH3）；13C-NMR（C5D5N，100 MHz）δ20.2（q，2-CH3），168.0（s，C-2），108.9（d，C-3），182.9（s，C-4），162.5（s，C-5），100.8（d，C-6），164.0（s，C-7），95.5（d，C-8），158.4（s，C-9），106.4（s，C-10），102.0（d，C-1′），74.7（d，C-2′），77.7（d，C-3′），71.5（d，C-4′），78.5（d，C-5′），70.3（t，C-6′），106.2（d，C-1″），75.0（d，C-2″），78.2（d，C-3″），71.1（d，C-4″），67.1（t，C-5″）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12]對(duì)照，其理化常數(shù)和波譜數(shù)據(jù)與undulatoside B基本一致。

3.10 化合物10

淡黃色粉末， [α]20D＝-48.8°（c0.62，MeOH）。1H-NMR（C5D5N，400 MHz）δ6.92（1H，d，J＝2.2 Hz，H-8），6.76（1H，d，J＝2.2 Hz，H-6），6.04（1H，s，H-3），5.68（1H，d，J＝2.4 Hz，H-1″），5.60（1H，d，J＝7.6 Hz，H-1′），4.75（1H，d，J＝2.2 Hz，H-2″），4.72（1H，d，J＝1.5 Hz，H-6′b），4.60（1H，d，J＝9.3 Hz，H-4″b），4.36（1H，d，J＝9.3 Hz，H-4″a），4.35（1H，m，H-3′），4.34（1H，m，H-5′），4.30（1H，m，H-2′），4.20（2H，s，H-5″），4.12（1H，d，J＝1.5 Hz，H-6′a），4.10（1H，m，H-4′），2.17（3H，s，2-CH3）；13C-NMR（C5D5N，100 MHz） δ20.0（q，2-CH3），168.0（s，C-2），108.9（d，C-3），182.8（s，C-4），162.5（s，C-5），100.7（d，C-6），164.0（s，C-7），95.4（d，C-8），158.4（s，C-9），106.3（s，C-10），102.0（d，C-1′），74.7（d，C-2′），78.6（d，C-3′），71.6（d，C-4′），77.5（d，C-5′），69.1（t，C-6′），111.3（d，C-1″），78.0（d，C-2″），80.5（s，C-3″），75.2（t，C-4″），65.8（t，C-5″）。以上理化常數(shù)和波譜數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[12-13]報(bào)道的 5，7-dihydroxy-2-methylchromone 7-O-β-D-apiofuranosyl-（1 → 6）-β-D-glucopyranoside基本一致。

3.11 化合物11

無(wú)色針晶。與標(biāo)準(zhǔn)品共薄層層析，Rf值一致；與對(duì)照品對(duì)照氫譜數(shù)據(jù)一致，故鑒定為β-谷甾醇。

3.12 化合物12

白色粉末。與標(biāo)準(zhǔn)品共薄層層析，Rf值一致；與標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照氫譜數(shù)據(jù)一致，故鑒定為胡蘿卜苷。