張 莉，黃哲甦

(天津市藥品檢驗(yàn)所，天津 300070)

復(fù)方氨基酸注射液(18AA－Ⅳ)臨床上主要用于改善外科手術(shù)前后病人的營養(yǎng)狀態(tài)，適用于各種疾病引起的營養(yǎng)不良，同時(shí)作為節(jié)氮療法補(bǔ)充營養(yǎng)。復(fù)方氨基酸注射液(18AA－Ⅳ)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)現(xiàn)收載于國家藥品標(biāo)準(zhǔn)新藥轉(zhuǎn)正標(biāo)準(zhǔn)第44冊(cè)。5－羥甲基糠醛(5－h(huán)ydroxymethylfurfural)為該制劑中的原料組分葡萄糖在放置及加熱滅菌過程中的分解產(chǎn)物。由于5－羥甲基糠醛損害人體橫紋肌和內(nèi)臟，因此在含有葡萄糖成分的輸液類制劑中應(yīng)嚴(yán)格控制5－羥甲基糠醛的含量［1］。原國家標(biāo)準(zhǔn)采用顏色反應(yīng)(不產(chǎn)生櫻桃紅色)來控制樣品中的5－羥甲基糠醛量，該法為定性反應(yīng)，準(zhǔn)確性差。為進(jìn)一步準(zhǔn)確測(cè)定復(fù)方氨基酸注射液(18AA－Ⅳ)中5－羥甲基糠醛的含量，確保人民用藥安全。本文建立了高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方氨基酸注射液(18AA－Ⅳ)中5－羥甲基糠醛的含量，方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、重復(fù)性好。

1 儀器與試藥

1.1 儀器LC－20A島津液相色譜儀，梅特勒XS205電子天平。

1.2 試藥 5－羥甲基糠醛對(duì)照品(CHEMICAL LTD，批號(hào)L460k10，純度:98%);復(fù)方氨基酸注射液(18AA－Ⅳ)(天津天安藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)201003141、 201003154、 201007311、 201008193、201009261、201101154、201103281 和 201103293);甲醇(色譜純)、磷酸二氫鉀和四丁基氫氧化銨溶液(分析純)、蒸餾水。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱:Phenomenex PRODIGY ODS(3)C18100A 分析柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);流動(dòng)相:磷酸鹽緩沖液［0.1 mol/L的磷酸二氫鉀溶液和四丁基氫氧化銨溶液(取0.01 mol/L四丁基氫氧化銨溶液用磷酸調(diào)節(jié)pH值至4.5)等量混合］－甲醇(95∶5);流速:1.0 m l/min;檢測(cè)波長(zhǎng)284 nm;柱溫:40℃。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對(duì)照品溶液的制備 取5－羥甲基糠醛對(duì)照品適量，精密稱定，加水溶解并稀釋制成每1 ml中含15μg的溶液，即得。

2.2.2 供試品溶液的制備 取本品直接作為供試品溶液。

2.2.3 陰性對(duì)照溶液的制備 按處方量制備不含有葡萄糖的樣品作為陰性對(duì)照溶液。

2.3 方法專屬性考查 分別取對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液依法測(cè)定記錄色譜圖，見圖1。結(jié)果，陰性對(duì)照溶液在對(duì)照品相同保留時(shí)間處無吸收峰，表明樣品中無干擾5－羥甲基糠醛的成分存在。

圖1 對(duì)照品(A)供試品(B)陰性對(duì)照(C)HPLC色譜圖

2.4 線性關(guān)系考查 精密量取150μg/m l的5－羥甲基糠醛對(duì)照品儲(chǔ)備液，用水配制成濃度0.029 89、0.119 6、0.597 8、1.793 4、2.989、5.978、8.967、11.956、14.945、17.934、20.923 和 23.912 μg/ml的系列對(duì)照品溶液。分別精密量取上述對(duì)照品溶液20μl，照“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜圖。以濃度為橫坐標(biāo)，相對(duì)應(yīng)的峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸。結(jié)果表明5－羥甲基糠醛在0.029 9～23.912μg/ml濃度范圍內(nèi)與峰面積呈良好線性關(guān)系?；貧w方程為Y=79 420.25 X+441.18(r=0.999 6)。

2.5 檢出限試驗(yàn) 取5－羥甲基糠醛對(duì)照品，用水稀釋制成不同濃度的溶液，在選定色譜條件下，按信噪比為3對(duì)最低檢測(cè)量進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果表明，5－羥甲基糠醛最低檢出濃度 0.03 μg/m l，檢出限為 0.3 ng。

2.6 溶液的穩(wěn)定性 取供試品溶液分別在0、2、4、6和8 h進(jìn)樣，考查溶液室溫放置穩(wěn)定性，結(jié)果表明，供試品溶液在8 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 回收率試驗(yàn) 取5－羥甲基糠醛對(duì)照品，配制3個(gè)濃度(300、375和450μg/ml)的樣品溶液，每個(gè)濃度取3份，分別精密量取1ml，置25ml量瓶，加空白輔料溶液稀釋至刻度。照“2.1”項(xiàng)下色譜條件進(jìn)行分析，結(jié)果平均回收率為99.10%，RSD為1.08%。

表1 5-羥甲基糠醛回收率試驗(yàn)結(jié)果(n=9)

2.8 中間精密度試驗(yàn) 取本品(批號(hào)201103281)，由不同人員，不同日期，在不同儀器上測(cè)定含量，RSD為1.60%。

2.9 樣品中5－羥甲基糠醛含量測(cè)定 取8批復(fù)方氨基酸注射液(18AA－Ⅳ)樣品，按本法測(cè)定5－羥甲基糠醛的含量，結(jié)果見表2。

表2 樣品中5-羥甲基糠醛含量測(cè)定結(jié)果

3 討論

3.1 對(duì)于含有葡萄糖成分的輸液制劑，其中所含5－羥甲基糠醛的檢查方法中，干擾較少、準(zhǔn)確度較高的為HPLC法，《中國藥典》2005年版二部首次收載了采用該法檢查葛根素葡萄糖注射液中5－羥甲基糠醛的含量。由于5－羥甲基糠醛是作為雜質(zhì)檢查，因此檢測(cè)波長(zhǎng)的選擇較為重要，否則將影響其檢出，甚至漏檢。5－羥甲基糠醛的最大吸收波長(zhǎng)為284 nm，因此HPLC法檢查時(shí)該波長(zhǎng)應(yīng)為首選檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.2 流動(dòng)相的選擇，參考了《中國藥典》2010年版二部收載的含有葡萄糖成分的輸液制劑中有關(guān)物質(zhì)5－羥甲基糠醛測(cè)定的色譜條件。經(jīng)反復(fù)試驗(yàn)，最終選定胞磷膽堿鈉葡萄糖注射液［2］有關(guān)物質(zhì)項(xiàng)下的色譜條件適宜測(cè)定復(fù)方氨基酸注射液(18AA－Ⅳ)中5－羥甲基糠醛的含量，分離效果較好。

3.3 目前已批準(zhǔn)的含有葡萄糖成分的輸液制劑大多對(duì)5－羥甲基糠醛限度進(jìn)行控制，但限度范圍不一。一般約為0.02%(以葡萄糖計(jì))。根據(jù)《中國藥典》2005年版二部葡萄糖注射液中5－羥甲基糠醛檢查的規(guī)定，供試品葡萄糖溶液的濃度為10 mg/ml，“在284 nm的波長(zhǎng)處測(cè)定，吸光度不得大于0.32”。初步推測(cè)《中國藥典》所規(guī)定的“吸光度不得大于0.32”時(shí)相對(duì)應(yīng)的5－羥甲基糠醛濃度約為2μg/ml，即5－羥甲基糠醛的限度為0.02%(以葡萄糖計(jì))。本方法根據(jù)此限度確定了對(duì)照品溶液的濃度。

3.4 該制劑8批樣品中含5－羥甲基糠醛很少，但是在生產(chǎn)和儲(chǔ)藏過程中葡萄糖容易降解生成5－羥甲基糠醛。因此有必要對(duì)該制劑的5－羥甲基糠醛含量進(jìn)行控制，以確保用藥安全。

1 何伍，凌霄.含葡萄糖注射液中5－羥甲基糠醛限度的檢測(cè)方法.中國醫(yī)藥工業(yè)雜志，2008，39(1):47

2 中國藥典.二部.2010:603