顏世波，王廷斌，戴志江

(1.黑龍江省湯原縣職業(yè)技術(shù)學院，154700;2.佳木斯市家畜繁育指導站，154007)

1 范圍

適用于人工授精員對牛進行細管冷凍精液的人工授精技術(shù)操作。

2 人工授精

用特定的輸精器材，將冷凍精液正確解凍后人工輸入發(fā)情母牛生殖道內(nèi)，使之受孕。

3 細管冷凍精液

采集種公牛精液，經(jīng)特殊冷凍處理制成細管冷凍精液制劑。

4 運輸

用液態(tài)氮生物容器運輸。而解凍后的精液要保溫運輸，在盡量短的時間內(nèi)輸精，不超過2～6 h。

5 液氮灌的正確使用

滿罐液氮靜止應保持20～30 d有液氮。凍精在液態(tài)氮中保存。液氮少于1/3時及時加液氮。查看或取出凍精要在罐口下5～8 cm處，取出停留3～5 s以內(nèi)送還罐內(nèi)或解凍。空罐加液氮需預冷，輕拿輕放，罐體出霜、出汗要及時檢查與更換。

6 有關發(fā)情的概念

6.1 發(fā)情

母牛出現(xiàn)陰門腫脹、有黏液、鳴叫，表現(xiàn)出爬跨和接受爬跨的性行為，并能正常排卵，自然交配或人工授精具有受孕可能。母牛的這一表現(xiàn)稱作發(fā)情。

6.2 適配年齡

母牛性成熟后，身體發(fā)育到成年體重70%左右，初配奶牛體重在350 kg以上。

6.3 發(fā)情周期

性成熟的母牛每18～24 d(平均21 d)，周而復始地出現(xiàn)發(fā)情癥狀和表現(xiàn)，為一個發(fā)情周期。母牛是常年發(fā)情家畜。發(fā)情周期分為發(fā)情前期、中期、后期和休情期。

6.4 發(fā)情持續(xù)時間

是指母牛發(fā)情外表征狀出現(xiàn)開始，到征狀消失為止所持續(xù)的時間。一般母牛發(fā)情持續(xù)時間為12～36 h，平均24 h。黃牛的時間偏長。

6.5 發(fā)情鑒定

就是鑒定母牛是否發(fā)情及發(fā)情的階段，以便正確掌握人工授精的時間。

6.6 發(fā)情鑒定方法

外部觀察法:通過觀察發(fā)情行為、性興奮和外陰變化癥狀來判定發(fā)情與階段。

直腸檢查法:手伸進牛直腸，觸摸子宮角判斷其長短、粗細、質(zhì)地。觸摸卵巢，檢查卵泡大小、質(zhì)地、發(fā)育程度來確定牛發(fā)情及階段。

6.7 真發(fā)情與假發(fā)情

凡是發(fā)情能正常排卵，輸精或配種可受孕的是真發(fā)情。凡是有發(fā)情癥狀但不能正常排卵的發(fā)情為假發(fā)情。

7 有關卵子、精子的概念與指標

7.1 排卵時間

母牛一般在發(fā)情結(jié)束后10～15 h排卵，在發(fā)情開始后24～36 h排卵，在靜立發(fā)情后12～24 h排卵。多數(shù)在凌晨至早晨排卵。

7.2 卵子保持受精能力的時間

8 h以內(nèi)受精能力強，以后減弱。

7.3 有效精子數(shù)

0.25 mL或0.5 mL細管冷凍精液每劑有效精子數(shù)不少于800～1 000萬。保持受精能力的時間18～24 h，以輸精后6～18 h效果為好。

8 人工授精操作

8.1 輸精前的器材藥品準備

輸精槍、塑料外套、長臂手套、顯微鏡、載玻片、解凍容器、溫水和溫度計、消毒防腐藥、注射器、生理鹽水、生殖激素及子宮炎治療藥物。

8.2 冷凍精液的解凍

取出凍精在空氣中停留3～5 s，放入38～42℃的水中解凍8～12 s，全部融化后取出擦干，保溫，等待鏡檢或輸精。

8.3 鏡檢活力

調(diào)整好顯微鏡，加熱載玻片至38～40℃，凍精空氣端刺小孔取精液1滴在載玻片上，迅速鏡檢，要求活力大于0.3可用于輸精。

8.4 輸精時間

在牛發(fā)情后期輸精，靜立發(fā)情后12～24 h輸精，牛拒爬后0～8 h輸精。

8.5 母牛的保定與外陰衛(wèi)生消毒

在保定架或配種欄中保定，輸精員在牛體正后方，以免牛傷人。用0.05%的高錳酸鉀溶液或清水清洗外陰，紙巾擦干后輸精。

8.6 輸精過程

采用直腸把握法輸精。輸精員戴上長臂塑料手套，伸入直腸，排出糞便，隔著直腸壁握住子宮頸管。手臂下壓使陰門開張。輸精槍斜上45°從陰門緩緩插入10 cm，避開尿道口再平插至子宮頸口，通過2～3個皺壁將輸精管緩慢套入子宮頸，達到子宮體，將輸精槍稍微后拉即可輸精。輸精持續(xù)5 s以上，然后緩慢退出輸精槍。

8.7 輸精后的觀察

發(fā)現(xiàn)槍頭有少量血液(紅點)屬于正?，F(xiàn)象，說明即將排卵。發(fā)現(xiàn)槍頭脫落、棉塞推出屬于事故，但牛一般在下次發(fā)情可排出。如不發(fā)情，要跟蹤檢查確認是否妊娠還是殘留，針對癥狀日后解決。出槍有少量膠凍狀微透明黏液為正常，如發(fā)現(xiàn)黏液渾濁、有膿或有氣泡則屬于炎癥，針對癥狀治療。發(fā)現(xiàn)精液逆流要及時補配。

9 難孕牛的診治與輸精

輕癥子宮炎可在輸精前、后治療并輸精?？ㄋ?、隱性、卡他膿性子宮炎的牛本次可以適時輸精。在輸精3 h前或輸精后1～12 h子宮內(nèi)灌藥。應采用對精子影響小的抗生素治療。

重度子宮炎的牛在本期治療而不輸精，宮注子宮專用消炎藥，下期發(fā)情觀察再決定治療或輸精。

10 應用生殖激素提高受胎率

促排3號(LHRH-A3)一般在發(fā)情中期使用即在輸精前6 h肌注25 μg，用的過早或劑量過大效果差，容易造成卵泡黃體化不能排卵。促黃體素(LH)和絨促性素(hCG)在輸精時分別肌注100單位和1 000單位。催產(chǎn)素(OX)在輸精后肌注40～80單位，加速精子上行。

11 保胎

應用生殖激素促進副黃體形成，維持卵巢功能達到保胎作用。在輸精后3～4 d肌注促排3號、促黃體素和絨促性素25～50 μg、100單位和1000單位，使卵巢小卵泡黃體化，形成副黃體。黃體酮(P4)在輸精后5～7 d連續(xù)注射80～100單位，拮抗卵巢上小卵泡產(chǎn)生雌激素的作用，降低子宮活動性，達到保胎功效。在妊娠4～5月時，少量妊娠牛出現(xiàn)假發(fā)情現(xiàn)象，可肌注黃體酮保胎。分5次5 d遞減注射，劑量分別是前3 d 100單位，后2天為50單位、25單位。

12 妊娠診斷

12.1 外部觀察法

妊娠牛行動穩(wěn)健，采飼量增加，被毛光亮，陰門出皺，陰蒂增大，陰道黏液呈黏稠狀，并粘有糞便夾 (俗稱“掛牌”)。腹圍逐漸增大，妊娠后期(7～9個月)右側(cè)腹壁推診可觸及到胎兒，青年母牛在妊娠4～5個月乳房開始發(fā)育。妊娠牛眼線明顯，眼角膜上的血管增粗，暗紅或紫紅，有1～3條;未妊娠牛的血管細而鮮紅，分支不明顯。

12.2 直腸檢查法

觸摸子宮角、卵巢黃體。根據(jù)黃體有無、子宮質(zhì)地、大小、彈性、位置等斷定是否妊娠及胎兒月齡。

12.3 酒精法

用純酒精滴定被檢查的奶樣，如果出現(xiàn)絮狀物即為妊娠。但酒精陽性乳的奶樣和乳房中頭幾把乳不能檢查，因為乳房炎乳或乳池剩乳可能被污染。

12.4 B超診斷法

可以檢查35 d以后階段的胎兒。

13 母牛輸精配種記錄

記錄養(yǎng)殖場戶名、地址、聯(lián)系人、電話，母牛品種與耳號、年齡或產(chǎn)次、輸精時間，與配公牛凍精品種與牛號，人工授精員姓名、電話。復配記錄同上。分析造成復配的原因，本次的技術(shù)處理方法。

14 牛細管冷凍精液標記方法與識別

以黑龍江省家畜繁育指導站凍精為例，

說明:HLJ:黑龍江省家畜繁育指導站代號(拼音字頭)HS:荷斯坦奶牛的品種代號(拼音字頭)。080629:生產(chǎn)日期06028:該場該公牛身份證后5位數(shù)，即2006年出生，28號公牛。

15 種公牛品種與代號

品種代號由兩位漢語拼音字頭組成。荷斯坦牛HS、娟珊牛JS、西門塔爾XM、夏洛來XL、利木贊LM、安格斯AG、德國黃牛DH、海福特HF、皮埃蒙特PA、兼用短角JD、肉用短角RD、南德文(溫)ND、蒙貝利亞MB。