亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        精液對(duì)母兔子宮免疫及孕向發(fā)育的影響

        2012-10-17 09:13:44劉瑞風(fēng)劉新峰郝志明
        黑龍江動(dòng)物繁殖 2012年2期
        關(guān)鍵詞:肥大細(xì)胞母兔精液

        劉瑞風(fēng),劉新峰,郝志明

        (1.天津市神澤農(nóng)業(yè)開發(fā)有限公司,天津 301721;2.天津農(nóng)學(xué)院 動(dòng)物科學(xué)系,天津 300384)

        與自然本交相比,人工授精和胚胎移植的妊娠成功率和產(chǎn)仔率都還較低,特別是胚胎移植,其妊娠率還有較大的差距,嚴(yán)重影響了其在畜牧生產(chǎn)中的應(yīng)用,成為胚胎移植技術(shù)推廣應(yīng)用的瓶頸。比較自然本交妊娠和胚胎移植妊娠可以發(fā)現(xiàn),在胚胎移植情況下,特別是家畜的胚胎移植,胚胎生長發(fā)育的子宮環(huán)境常常并未與精液接觸。

        近年來的研究表明,精液與子宮內(nèi)膜的接觸能夠促進(jìn)胚胎的生長,能夠提高母畜的受胎率和產(chǎn)仔數(shù)。Carp H J等研究發(fā)現(xiàn),不與結(jié)扎輸精管的公鼠交配,胚胎移植受體鼠的胚泡著床率會(huì)下降,胚胎的發(fā)育生長會(huì)減緩[1]。在家畜,胚胎移植受體母畜若未與輸精管結(jié)扎的公畜交配,移植的胚胎雖能正常附植,但胎兒生長和胎盤發(fā)育緩慢[2]。另外,Mah J等在進(jìn)行豬的配種時(shí)發(fā)現(xiàn),自然本交的母豬,若再用輸精管結(jié)扎的公豬交配來補(bǔ)充精漿能夠提高母豬的受胎率和產(chǎn)仔數(shù)[3]?;诖?,本試驗(yàn)擬就精液對(duì)兔子宮免疫及孕向發(fā)育的影響進(jìn)行探究,以期揭示接觸精液的子宮所發(fā)生的形態(tài)學(xué)和免疫學(xué)特性的變化,為提高人工授精和胚胎移植的成功率奠定理論基礎(chǔ)。

        1 材料和方法

        1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

        健康的新西蘭白兔10只,空懷,體重2.0~2.5 kg,其中母兔8只,公兔2只。試驗(yàn)動(dòng)物購買后,飼養(yǎng)觀察兩周再進(jìn)行試驗(yàn)。試驗(yàn)前和試驗(yàn)期間,試驗(yàn)兔飼養(yǎng)在室溫條件下,喂以青草和兔專用配合飼料。

        1.2 試驗(yàn)方法

        1.2.1 精液的采集

        采精時(shí),一手抓住母兔的兩耳及頸部皮膚將其保定好,使母兔后軀朝向籠內(nèi),另一手將自制假陰道置于母兔兩后肢之間,假陰道開口緊貼母兔外陰部,并使假陰道與水平面呈30°。當(dāng)公兔爬跨母兔并伸出陰莖時(shí),立即將假陰道套于陰莖上。射精時(shí),公兔會(huì)尖叫一聲倒向一側(cè),這時(shí)應(yīng)將母兔放開,豎直假陰道,讓精液流入集精杯。

        1.2.2 母兔誘導(dǎo)發(fā)情和誘發(fā)排卵

        為了模擬發(fā)情排卵后母兔的生理狀態(tài),試驗(yàn)?zāi)竿眯柽M(jìn)行誘導(dǎo)發(fā)情和誘發(fā)排卵處理。

        誘導(dǎo)發(fā)情處理:所用藥物為孕馬血清(PMSG,寧波市三生藥業(yè)有限公司產(chǎn)品,批號(hào)070108),按照50IU/kg的劑量,于早上6:00~7:00一次頸部皮下注射。

        誘發(fā)排卵處理:在PMSG注射后約50 h前后,當(dāng)母兔陰戶濕潤腫大,陰道黏膜潮紅,并接受試情公兔爬跨時(shí),將無菌玻璃棒插入陰道,以此來刺激陰道,誘發(fā)排卵。

        1.2.3 精液宮內(nèi)注入手術(shù)

        誘發(fā)排卵處理后4 h進(jìn)行精液宮內(nèi)注入手術(shù)。手術(shù)方法:犬眠寶(0.1 mL/kg)皮下注射麻醉。在最后一對(duì)乳頭前約1 cm的腹中線處,常規(guī)手術(shù)方法打開腹壁。當(dāng)腹壁打開后,小指伸入腹腔,觸摸拉出子宮。用縫線結(jié)扎兩側(cè)子宮頸,以防注入兩側(cè)子宮角的液體混合,并以縫線打結(jié)方式在一側(cè)子宮角作標(biāo)記。分別在兩側(cè)子宮角注入0.3 mL新鮮精液(試驗(yàn)組)或生理鹽水(對(duì)照組)。然后將子宮送回腹腔,常規(guī)方法縫合腹壁并消毒。

        1.3 子宮的采集和分析

        1.3.1 子宮大小和重量的測(cè)量

        精液宮內(nèi)注入手術(shù)后48 h,處死試驗(yàn)兔,完整摘取子宮,去除周圍脂肪等組織,拍照。用游標(biāo)卡尺分別測(cè)量兩側(cè)子宮角的長度和直徑,并分別進(jìn)行稱重。根據(jù)體重和子宮角重量,計(jì)算子宮角指數(shù)。

        子宮角指數(shù)=一側(cè)子宮角重量(g)/體重(kg)

        1.3.2 子宮組織切片制作和觀察測(cè)定

        按常規(guī)方法進(jìn)行制片,并分別進(jìn)行HE和甲苯胺蘭染色。顯微鏡下利用計(jì)算機(jī)圖像采集系統(tǒng)分別測(cè)量子宮壁、子宮肌層、黏膜層、黏膜上皮和腺上皮的厚度以及腺體的周長,計(jì)數(shù)子宮黏膜單位面積內(nèi)的血管、腺體和肥大細(xì)胞數(shù)量。每個(gè)切片采集10個(gè)視野進(jìn)行觀察和計(jì)數(shù),最后算出平均數(shù)。

        1.3.3 子宮沖洗液體細(xì)胞計(jì)數(shù)和涂片染色觀察

        自子宮角基部剪斷子宮,吸取1 mL無菌生理鹽水,從宮管結(jié)合部向子宮角基部沖洗子宮腔,收集沖洗液。子宮沖洗液體細(xì)胞計(jì)數(shù)按白細(xì)胞計(jì)數(shù)方法進(jìn)行。為確定子宮沖洗液中的細(xì)胞類型,還進(jìn)行了涂片姬姆薩染色觀察。

        1.4 試驗(yàn)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)處理

        試驗(yàn)數(shù)據(jù)用樣本均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差來表示,并用PSPS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行差異顯著性分析。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 精液對(duì)子宮免疫的影響

        同一子宮的兩個(gè)子宮角分別注入生理鹽水(對(duì)照組)和精液后48 h,子宮黏膜內(nèi)的肥大細(xì)胞數(shù)分別為3.72±0.04/mm2和2.85±0.05/mm2,精液組子宮黏膜的肥大細(xì)胞數(shù)明顯減少(P<0.05);兩子宮角沖洗液中的細(xì)胞數(shù)也有很大差異,對(duì)照組為8.87±0.36×109/L,精液組為53.3±4.03×109/L,精液組極顯著高于對(duì)照組(P<0.01),詳見表1。子宮沖洗液涂片染色檢查發(fā)現(xiàn),子宮沖洗液細(xì)胞主要為嗜中性粒細(xì)胞。

        表1 精液對(duì)子宮黏膜肥大細(xì)胞數(shù)及子宮沖洗液體細(xì)胞數(shù)的影響

        2.2 精液對(duì)子宮孕向發(fā)育的影響

        2.2.1 對(duì)子宮大小和子宮角指數(shù)的影響從表2看,宮內(nèi)注入精液可使子宮角指數(shù)明顯增加(P<0.05),子宮角長度顯著延長(P<0.05),子宮角明顯增粗(P<0.05)。

        表2 精液對(duì)子宮角指數(shù)、長度及直徑的影響

        對(duì)照組子宮角指數(shù)、子宮角長和子宮角直徑分別為 0.85±0.07 cm、5.58±0.30 cm和0.80 ±0.05 cm,而精液組則分別為1.30±0.04 cm、6.93±0.32 cm和0.90±0.04 cm。

        2.2.2 對(duì)子宮壁、黏膜層、黏膜上皮層和肌層厚度的影響

        表3 精液對(duì)子宮壁、黏膜層、黏膜上皮層及肌層厚度的影響

        子宮注入精液后48 h,子宮壁、黏膜層、黏膜上皮層和肌層的厚度分別達(dá)到1.92±0.03 mm、1.51±0.02 mm、2.06±0.02 μm和0.29±0.06 mm。與對(duì)照組相比,子宮壁及黏膜層的厚度顯著增加(P<0.05),黏膜上皮層的厚度極顯著增加(P<0.01),子宮肌層的厚度雖有增加但差異不顯著(P﹥0.05),詳見表3。

        2.2.3 對(duì)黏膜腺體和血管的影響

        表4 精液對(duì)子宮黏膜腺體數(shù)、腺上皮厚、腺體周長以及血管數(shù)的影響

        由表4可見,子宮注入精液后,每平方毫米子宮黏膜內(nèi)的腺體數(shù)量較對(duì)照組明顯增加(P<0.05),達(dá)11.75±0.27個(gè);腺上皮厚度較對(duì)照組顯著增加(P<0.05),達(dá)1.65±0.03 μm;腺體周長與對(duì)照組比較則沒有明顯差異(P﹥0.05)。另外,每平方毫米子宮黏膜內(nèi)的血管數(shù)精液組較對(duì)照組也有明顯增加(P<0.05)。

        3 討論

        3.1 精液對(duì)子宮免疫的影響

        在整個(gè)妊娠期,小鼠和田鼠子宮壁內(nèi)肥大細(xì)胞的數(shù)量都呈先減少后增加的變化,據(jù)認(rèn)為,這種變化與胚泡的附植有關(guān)[4]。胚泡植入子宮壁時(shí)肥大細(xì)胞數(shù)量減少,可使子宮局部免疫水平暫時(shí)低下,從而使具有父方抗原特征的胚泡不被排斥,可能是胚泡不被母體排斥的免疫學(xué)機(jī)制之一。本試驗(yàn)就精液對(duì)子宮壁肥大細(xì)胞數(shù)量的影響也進(jìn)行了研究。結(jié)果表明,兔的精液也可明顯降低母兔子宮壁肥大細(xì)胞數(shù)量,生理鹽水組子宮壁肥大細(xì)胞數(shù)為3.72±0.04個(gè)/mm2,而精液組只有2.85±0.05個(gè)/mm2。另外,從我們的試驗(yàn)看,妊娠早期母兔子宮肥大細(xì)胞數(shù)量的減少可能是從子宮接觸精液開始的,精液有可能是子宮肥大細(xì)胞減少的啟動(dòng)物。

        交配后白細(xì)胞遷移進(jìn)入子宮腔是精子上行過程中的重要組成部分[5,6]。許多研究顯示,豬交配后精液可誘導(dǎo)子宮發(fā)生炎癥反應(yīng),可使大量多核嗜中性粒細(xì)胞(PMN)進(jìn)入子宮腔[6]。在母馬也有類似現(xiàn)象[7]。與上述研究結(jié)果相似,本試驗(yàn)在兔同一子宮的兩側(cè)子宮角分別注入精液和生理鹽水后,注入精液側(cè)的子宮角腔沖洗液中的細(xì)胞數(shù)極顯著高于對(duì)照子宮角腔沖洗液中的細(xì)胞數(shù);對(duì)子宮沖洗液細(xì)胞涂片染色檢查發(fā)現(xiàn),其中主要也是嗜中性粒細(xì)胞。

        3.2 精液對(duì)子宮孕向發(fā)育的影響

        我們知道,動(dòng)物發(fā)情排卵后,殘留的卵泡發(fā)育轉(zhuǎn)變?yōu)辄S體,使子宮由雌激素誘導(dǎo)下的發(fā)育轉(zhuǎn)變成由孕酮誘導(dǎo)下的發(fā)育,從而導(dǎo)致子宮的組織結(jié)構(gòu)發(fā)生一系列變化。這些變化主要表現(xiàn)為子宮黏膜上皮的生長;子宮腺的增生,腺體的彎曲和分支增多,分泌物增加;以及子宮頸的收縮等[8]。子宮的這種在孕酮作用下的發(fā)育就叫孕向發(fā)育。

        在發(fā)情排卵時(shí)通過自然本交或人工授精輸入雌性生殖道的精液對(duì)妊娠有什么作用已有一些報(bào)道。在豬,自然交配的同時(shí)給母豬輸入精漿可使母豬的產(chǎn)仔率由70%提高到80%,即使在既進(jìn)行人工授精又進(jìn)行自然本交的母豬,若再輸入精漿也能提高產(chǎn)仔率和產(chǎn)仔數(shù)[9]。對(duì)生殖道遭受過感染的雌性動(dòng)物,人工授精時(shí)增加精漿輸入量可提高這些動(dòng)物的妊娠率和產(chǎn)仔率[10]。在家畜,胚胎移植受體母畜若未與輸精管結(jié)扎的公畜交配,移植的胚胎雖能正常附植,但胎兒生長和胎盤發(fā)育緩慢[2]。另外在大鼠和小鼠的研究也表明,胚胎移植受體動(dòng)物子宮在移植前與精漿接觸,能促進(jìn)胚胎的卵裂和胚泡的附植,能提高胚胎和胎兒的發(fā)育速度,減少流產(chǎn)和畸形胎兒的產(chǎn)生[11,1]??梢酝茰y(cè),精漿的這些作用肯定是對(duì)子宮原有的孕向發(fā)育產(chǎn)生影響,從而改變了胚胎發(fā)育賴以生存的子宮內(nèi)環(huán)境所致。

        精液對(duì)子宮的孕向發(fā)育到底有什么樣的影響,我們還未見到一篇有關(guān)的報(bào)道。從本研究的試驗(yàn)結(jié)果來看,精液注入48 h后,可以顯著增加子宮的大小;可明顯增加子宮壁、黏膜層和黏膜上皮層的厚度;可明顯增加黏膜中腺管和血管的數(shù)量,可顯著增加腺上皮的厚度。

        [1] Carp H J,Serr D M,Mashiach S,et al.Influence of insemination on the implantation oftransferred rat blastocysts [J].Gynecol Obstet Invest,1984,18:194-198.

        [2] Bromfield J J,Roberts C T,Robertson S A.Seminal plasmaprograms uterine receptivity and pregnancy outcome[J].Biol Reprod,2004,17:94.

        [3] Mah J,Tilton J E,Williams G L et al.The Effect of repeated mating atshortintervals on reproductive performance of gilts [J].Anim Sci,1985,60:1052-1054.

        [4] Deng-ZP.Quantitative studies on mast cells and histamine in the endometrium of cow and sheep [J].China Vet Sci,1994,1:50.

        [5] Lovell J W,Getty R.Fate of semen in the uterus of the sow:histologic study of endome-trium during the 27 hours after natural service [J].American Journal of Veterinary Research,1968,29:609-625.

        [6] Rozeboom K J, Tredsson M H, Crabo B G.Characterization of uterine leukocyte infiltra -tion in gilts after artificial insemination [J].Reprod Fertil,1998,114:195-199.

        [7] Alghamdi A S,F(xiàn)oster D N,Troedsson M H T.Equine seminal plasma reduces sperm bind - ing to polymorphonuclear neutrophils(PMNS)and improves the fertility of fresh semen inseminated into inflamed uteri.Reprodution,2004,127:593-600.

        [8] 趙興緒.獸醫(yī)產(chǎn)科學(xué) [M].北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,第三版,2002:77.

        [9] Flowers W L,Esbenshade K L.Optimizing management of natural and artificial matings in swine [J].Reprod Fertil,1993,48:217-228.

        [10] Rozeboom K J,Tredsson M H,Hodson H H,et al.The importance of seminal plasma on the fertility of subsequent artificial inseminations in swine[J].Anim Sci,2000,78:443-448.

        [11] Watson J G,Carroll J,Chaykin S.Reproduction in mice:The fate ofspermatozoa notinvolved in fertilization [J].Gamete Res,1983,7:75-84.

        猜你喜歡
        肥大細(xì)胞母兔精液
        豬人工授精精液采集、處理和保存方法
        牛冷凍精液的制作、保存和解凍方法
        巧用糯米讓兔產(chǎn)奶多
        《大鼠及小鼠原代肥大細(xì)胞表面唾液酸受體的表達(dá)》圖版
        提高母兔產(chǎn)仔率妙招
        公兔精液冷凍保存技術(shù)
        精液長時(shí)間冷凍儲(chǔ)存與冷凍復(fù)蘇率的相關(guān)性研究
        肥大細(xì)胞在抗感染免疫作用中的研究進(jìn)展
        肥大細(xì)胞與腎臟疾病
        提高母兔繁殖力二法
        亚洲手机国产精品| 亚洲成av人片在线观看| 成人亚洲一区二区三区在线| 色偷偷久久一区二区三区| 中文字幕一区二区三区四区在线| 国产一级一厂片内射视频播放| 日本一区二区三区高清在线视频| 一区二区三区国产| 女同亚洲女同精品| 亚洲区福利视频免费看| 中文字幕乱码在线人妻| 日本怡春院一区二区三区| 99久久国产视频| 亚洲综合精品一区二区三区| 国产成人精品一区二区20p| 丰满人妻熟妇乱又伦精品软件| 欧美成人中文字幕| 国产激情免费观看视频| 日韩人妻另类中文字幕| 亚洲人成电影在线观看天堂色 | 性感的小蜜桃在线观看| 亚洲精品一区二区国产精华液| 无尽动漫性视频╳╳╳3d| 无码伊人久久大杳蕉中文无码 | 国产性一交一乱一伦一色一情| 大香蕉青青草视频在线| 伊人精品久久久久中文字幕| 亚洲日韩精品国产一区二区三区| 日本熟妇精品一区二区三区| 女同同志熟女人妻二区| 欧美性受xxxx白人性爽| 国产精品福利小视频| 隔壁的日本人妻bd高清中字| 欧美最猛黑人xxxx黑人猛交| 亚洲一区中文字幕在线电影网| 五月天亚洲av优女天堂| 99re6在线视频精品免费下载| 色婷婷综合久久久久中文| 亚洲欧美成人在线免费| 一区二区三区在线视频观看| 人妻丰满熟妇av无码区不卡|