徐應(yīng)臣 張 旭 張翠薇 伍 洋

1.四川省瀘州市人民醫(yī)院急診科，四川瀘州 646000；2.瀘州醫(yī)學(xué)院病理教研室，四川瀘州 646000；3.瀘州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院急診科，四川瀘州 646000

急性腎衰竭是指由各種原因引起的腎功能在短時(shí)間（幾小時(shí)至幾天）內(nèi)突然下降而出現(xiàn)的臨床綜合征，其機(jī)制主要為各種原因?qū)е履I小管急性壞死[1]。有研究證明[2]慶大霉素類抗生素能導(dǎo)致急性藥源性腎功能衰竭，因此，對(duì)于使用這類抗生素導(dǎo)致的急性腎衰竭患者來說，找到一種可以抑制或緩解腎毒性的藥物意義重大。左旋肉毒堿（也稱L-肉毒堿），于1958年Fritz首次發(fā)現(xiàn)并證實(shí)L-肉毒堿能促進(jìn)線粒體對(duì)脂肪的代謝速率，明確了其在脂肪氧化中的重要作用，從此L-肉堿的作用越來越受到重視。臨床上L-肉毒堿相關(guān)的研究主要是用于慢性腎衰竭的貧血癥狀的緩解治療[3]，而用于急性腎衰竭的相關(guān)研究較少，由于它具有轉(zhuǎn)運(yùn)長(zhǎng)鏈脂肪酸、抗氧化應(yīng)激的功能，若將其作用于急性腎衰竭模型，可能會(huì)對(duì)腎臟有保護(hù)作用。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和試劑

成年雄性SD大鼠40只（購(gòu)自瀘州醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心），8周齡大小，體重180～200 g，慶大霉素注射液，L-肉毒堿注射液（購(gòu)自西安瑞迪生物有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷慕⒓皠?dòng)物分組 將所有SD大鼠隨機(jī)分為4組，先飼養(yǎng)1周左右適應(yīng)環(huán)境。然后各組連續(xù)8 d腹腔內(nèi)注射等量藥物：A組注射生理鹽水，B組注射慶大霉素[80mg/（kg·d）]，C 組注射 L-肉毒堿[200 mg/（kg·d）]，D 組依次注射 L-肉毒 堿[200 mg/（kg·d）]和慶大霉素[80 mg/（kg·d）]，兩次給藥時(shí)間間隔1 h。各組大鼠于注射后第9天行膀胱穿刺取尿，再抽取尾部靜脈血后處死，留取腎臟組織。

1.2.2腎功能檢測(cè) 利用全自動(dòng)生化儀檢測(cè)各組大鼠血液中血清尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）的含量，并判定腎功能情況。

1.2.3 尿總量收集及尿蛋白定量 通過收集24 h尿液并檢測(cè)各組大鼠尿液中尿蛋白的相對(duì)含量。

1.2.4 腎組織病理形態(tài)學(xué)觀察 將腎組織用4%中性甲醛固定，石蠟包埋，制成4 μm厚的腎組織切片，HE染色，在光鏡下觀察腎臟皮質(zhì)區(qū)和皮髓交界區(qū)腎小管及間質(zhì)結(jié)構(gòu)的病理變化。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行相關(guān)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，兩兩比較采用t檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 血清尿素氮、肌酐的結(jié)果比較

B組與A組相比血清尿素氮、肌酐明顯增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。C、D組與B組相比肌酐明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表1。

表1 各組大鼠血清尿素氮、肌酐的結(jié)果比較（±s）

表1 各組大鼠血清尿素氮、肌酐的結(jié)果比較（±s）

注：與 A 組比較，※P<0.01；與 B 組比較，▲P<0.05

組別 只數(shù) BUN（μmol/L） Cr（μmol/L）A組B組C組D組10 10 10 10 5.3±1.2 30.5±2.5※6.0±1.9▲10.6±3.5▲45.6±13.6 245.5±50.5※55.5±20.5▲85.5±15.5▲

2.2 各組大鼠尿液總量以及尿蛋白含量的比較

B組與A組大鼠相比，24 h尿液總量明顯減少，尿蛋白含量明顯增多，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；C、D組與B組相比，尿液總量明顯增多，尿蛋白含量明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P ＜ 0.05）。 見表 2。

表2 各組大鼠尿液總量與尿蛋白含量測(cè)定比較（±s）

表2 各組大鼠尿液總量與尿蛋白含量測(cè)定比較（±s）

注：與 A 組比較，※P<0.01；與 B 組比較，▲P<0.05

組別 只數(shù) 尿液總量（mL） 尿蛋白（g/L）A組B組C組D組10 10 10 10 12.3±1.9 4.5±0.5※10.0±1.3▲7.6±1.7▲1.6±0.6 6.5±1.5※2.5±0.5▲3.5±1.5▲

2.3 腎組織病理形態(tài)學(xué)觀察

給藥后第9天，A組和C 組大鼠可見腎臟腎小管結(jié)構(gòu)完整，小管間排列緊密，腎小管上皮細(xì)胞無異常改變；B組大鼠大量腎小管上皮細(xì)胞腫脹壞死、脫落，間質(zhì)水腫，大量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)；D組大鼠以腎小管上皮細(xì)胞變性為主，伴少量炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)及灶狀壞死。

3 討論

急性腎衰竭是一種臨床綜合征，主要表現(xiàn)為氮質(zhì)廢物血肌酐和尿素氮的升高，水、電解質(zhì)和酸堿平衡紊亂，以及全身各系統(tǒng)并發(fā)癥[4]。如果不及時(shí)治療，容易危及生命。目前筆者認(rèn)為狹義的急性腎衰竭就是急性腎小管的壞死[5]。以慶大霉素作為氨基糖苷類抗生素的代表目前所引起的急性腎衰竭越來越受到重視。尋找合適的藥物抑制或者緩解引起的腎衰竭勢(shì)在必行。

左旋肉毒堿又稱L-肉毒堿，機(jī)體內(nèi)主要產(chǎn)生器官是腎臟和肝臟。它在脂肪代謝中的機(jī)制主要是將長(zhǎng)鏈脂肪酸轉(zhuǎn)運(yùn)至線粒體進(jìn)行氧化并產(chǎn)生能量。在急性腎衰竭的機(jī)體中，由于急性腎小管的壞死，可能導(dǎo)致肉毒堿的缺乏。臨床研究證實(shí)補(bǔ)充左旋肉毒堿對(duì)于慢性腎衰竭患者的貧血癥狀有較好的療效[6]。同時(shí)體外研究證實(shí)，L-肉毒堿作為一種有效的氧自由基清除劑，在緩解氧化應(yīng)激、減少脂質(zhì)過氧化中均具有明顯的保護(hù)作用，它主要通過阻止花生四烯酸介導(dǎo)的NADPH氧化激活，抑制蛋白激酶 C途徑，從而阻止超氧陰離子生成[7]。在腎臟的毒性損傷中，左旋肉毒堿可能通過減輕內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激，對(duì)抑制急性腎衰竭患者的腎小管損傷有積極的作用。

本實(shí)驗(yàn)中通過利用慶大霉素誘導(dǎo)大鼠急性腎衰竭模型，并給予L-肉毒堿干預(yù)，發(fā)現(xiàn)補(bǔ)充L-肉毒堿的大鼠組血清肌酐、尿素氮、尿蛋白都明顯低于慶大霉素組，而尿總量多于慶大霉素組。說明L-肉毒堿對(duì)急性腎衰竭有保護(hù)作用。其機(jī)制可能為：慶大霉素導(dǎo)致的急性腎小管壞死，一方面引起腎小球率過濾降低，導(dǎo)致尿量減少，血中肌酐、尿素氮等含氮廢物的增加；另一方面，由于腎小管的壞死引起局部細(xì)胞缺氧作用，使腎組織中線粒體腫脹，能量代謝異常，其內(nèi)的乙酰輔酶A、總一氧化氮、硫代巴比妥酸反應(yīng)產(chǎn)物增加。在慶大霉素的持續(xù)作用下，肉毒堿可能耗盡，導(dǎo)致進(jìn)行性的血清肌酐、尿素氮含量增加，線粒體內(nèi)CoA-SH和ATP下降；相反地，補(bǔ)充L-肉毒堿有緩解血清肌酐、尿素氮含量的增加，對(duì)腎功能有保護(hù)作用。此外，腎組織病理形態(tài)學(xué)觀察也證實(shí)，L-肉毒堿對(duì)慶大霉素誘導(dǎo)的急性腎衰竭具有保護(hù)作用，說明左旋肉毒堿可能在急性腎衰竭的發(fā)生過程中，通過轉(zhuǎn)運(yùn)長(zhǎng)鏈脂肪酸到線粒體，補(bǔ)充腎小管上皮氧化需要的能量，從而抑制急性腎小管的壞死，達(dá)到保護(hù)腎臟的作用。當(dāng)然，其具體機(jī)制還需要進(jìn)一步的研究及檢測(cè)加以證實(shí)。

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