李燦宇，申愛榮，張自森，封全靈，吳 敏

(1.鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，河南鄭州450052;2.鄭州大學(xué)第五附屬醫(yī)院腫瘤科，河南 鄭州450052)

Hedgehog信號通路是人類胚胎發(fā)育過程中調(diào)控細(xì)胞增殖和組織分化的重要信號通路。近年來的研究發(fā)現(xiàn)，其異常激活能導(dǎo)致肺癌、消化道腫瘤、前列腺癌等多種腫瘤的發(fā)生［1－2］。神經(jīng)膠質(zhì)瘤相關(guān)基因同源蛋白(glioma-associated oncogene homolog，GLI)是 Hedgehog信號通路末端的轉(zhuǎn)錄調(diào)控因子，具有很強的轉(zhuǎn)錄激活功能。目前國內(nèi)外有關(guān)SHH、GLI1在宮頸癌中的研究報道較少。本研究用免疫組化方法檢測了Hedgehog信號通路中SHH、GLI1蛋白在宮頸癌前病變和早期宮頸癌組織中的表達情況，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 取2008年2月至2011年5月經(jīng)病理證實的早期宮頸癌患者36例、CINⅢ級28例、正常宮頸20例作為研究對象。所有標(biāo)本經(jīng)體積分?jǐn)?shù)10%甲醛固定，石蠟包埋，切片。根據(jù)FIGO分期，36例宮頸癌中Ⅰa期10例，Ⅰb期20例，Ⅱa期6例;組織類型均為鱗癌;細(xì)胞分化程度:Ⅰ級2例，Ⅱ級10例，Ⅲ級24例;有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移6例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移30例。宮頸癌患者年齡28～65歲，中位年齡48歲。

1.2 免疫組化檢測方法 所有組織均用體積分?jǐn)?shù)10%甲醛固定，常規(guī)石蠟包埋后連續(xù)切片、HE染色。兔抗人SHH單克隆抗體、兔抗人GLI1多克隆抗體購自美國Santa Cruz公司，稀釋度為1∶100。免疫組化采用S-P法，枸櫞酸鈉溶液內(nèi)微波修復(fù)，一抗4℃過夜，二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色，每組均設(shè)PBS做陰性對照。

1.3 結(jié)果判定 以細(xì)胞膜或細(xì)胞漿內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性。結(jié)果判斷根據(jù)陽性細(xì)胞所占的比例及顯色程度，400倍光學(xué)顯微鏡下計數(shù)5個視野或1 000個細(xì)胞做半定量分析。按染色強度分為:無著色為0分，淺著色為1分，中等著色為2分，強著色為3分。按陽性細(xì)胞所占比例分為:無陽性細(xì)胞為0分，≤25%為1分，＞25% ～50%為2分，＞50%為3分。染色強度和陽性細(xì)胞所占比例得分相乘為最后得分:＜2分為陰性(－)，2～3分(+)，4～6分(++)，＞6分(+++)。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 13.0進行統(tǒng)計學(xué)分析，率的比較采用χ2檢驗或Fisher確切概率法，檢驗水準(zhǔn)α =0.05。

2 結(jié)果

2.1 SHH和GLI1蛋白在不同宮頸組織中的表達SHH蛋白陽性表達率分別為正常宮頸組織20.0%(4/20)、宮頸 CIN Ⅲ 60.7%(17/28)、早期宮頸癌69.4%(25/36)，兩兩比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P均＜0.05)。SHH蛋白在正常宮頸、宮頸CINⅢ和早期宮頸癌組織中的平均表達強度分別為 1.254±0.286、3.453 ±0.563和4.674 ±0.598，兩兩比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P均＜0.05)。GLI1蛋白陽性表達率分別為正常宮頸組織 25.0%(5/20)、宮頸 CIN Ⅲ 53.6%(15/28)、早期宮頸癌58.3%(21/36)，兩兩比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P均＜0.05)。GLI1蛋白在正常宮頸、宮頸CINⅢ和早期宮頸癌組織中的平均表達強度分別為0.452 ±0.162、1.874 ±0.368 和 3.752 ± 0.840，兩兩比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P均＜0.05)。見表1。

表1 SHH和GLI1蛋白在不同宮頸組織中的表達 例

2.2 SHH和GLI1蛋白的表達與早期宮頸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系 SHH和GLI1蛋白的表達與早期宮頸癌患者年齡、FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理分級均無關(guān)(P 均 ＞0.05)。見表2。

表2 SHH和GLI1蛋白的表達與早期宮頸癌臨床病理參數(shù)的關(guān)系 例

3 討論

Hedgehog基因是在1980年篩選果蠅胚胎發(fā)育基因時首次被鑒定的。在哺乳動物中共有3個Hedgehog同源體，分別是SHH、IHH和DHH。SHH基因位于7q36，所編碼的分泌蛋白與生長發(fā)育密切相關(guān)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)因子。Hedgehog信號通路在脊椎動物的胚胎發(fā)育過程中具有非常重要的作用。

GLI1是Hedgehog信號傳導(dǎo)通路的關(guān)鍵基因，Hedgehog信號激活后通過其進入細(xì)胞核中啟動靶基因的轉(zhuǎn)錄，是Hedgehog信號傳導(dǎo)的主要通路之一。越來越多的研究［1－5］顯示，Hedgehog信號通路與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有著密切的關(guān)聯(lián)。祝芳等［1］研究發(fā)現(xiàn)SHH及GLI1隨胃癌惡性程度增高、TNM臨床分期升高而表達強度升高，且伴有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移者表達強度升高，胃癌患者生存期隨著SHH及GLI1表達強度的升高而縮短。

有研究［6］報道宮頸癌組織中也明顯存在Hedgehog信號通路的異?；罨琒HH的過表達與HPV16型感染密切相關(guān)。本研究也發(fā)現(xiàn)早期宮頸癌及其癌前病變組織中的SHH和GLI1蛋白均存在過度表達，與國內(nèi)外報道一致［7］。但檢測到的陽性表達率低于國內(nèi)同類報道，這可能與病例選擇有關(guān)。本組患者的SHH和GLI1蛋白的表達均與年齡、FIGO分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、病理分級無關(guān)，與文獻報道一致［2］。這些提示SHH信號途徑可能在宮頸癌發(fā)生發(fā)展過程中起重要作用。

本研究結(jié)果還顯示，GLI1蛋白的陽性表達率低于SHH蛋白，這說明GLI1的基因和蛋白的表達可能受到其他轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子的影響。最新研究［8］就發(fā)現(xiàn)Zic2可作為GLI1轉(zhuǎn)錄表達的一個調(diào)節(jié)因子，可協(xié)同增強GLI1在宮頸癌細(xì)胞核中的保留進而調(diào)節(jié)其癌基因活性。目前以Hedgehog信號通路為治療靶點的研究也日趨增多，Yanai等［9］發(fā)現(xiàn)Hedgehog信號通路可能是有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的低分化胃癌潛在治療靶點。針對Hedgehog信號傳導(dǎo)通路的SMO受體的治療可能改善胰腺癌的預(yù)后［10］。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)SHH、GLI1在宮頸癌前病變和早期宮頸癌組織中呈現(xiàn)過度表達，其信號通路可能參與了宮頸癌的發(fā)生發(fā)展，兩者的檢測有助于宮頸癌早期診斷。

［1］祝芳，杜國能，陳劍輝，等.Sonic hedgehog信號通路中Shh蛋白及其下游轉(zhuǎn)錄因子Glil在胃癌組織中的表達及意義［J］.中華實驗外科雜志，2011，28(6):941 －943.

［2］胡偉國，熊炯邤，王春友，等.胚胎發(fā)育信號通路Sonic hedgehog在胰腺癌組織中的表達及意義［J］.中華肝膽外科雜志，2009，15(5):368－370.

［3］Katoh Y，Katoh M.Hedgehog target genes:mechanisms of carcinogenesis induced by aberrant hedgehog signaling activation［J］.Curr Mol Med，2009，9(7):873 －886.

［4］郭麗梅，林梅，張燕，等.Shh在大腸腺瘤及大腸癌中的表達與意義［J］.腫瘤基礎(chǔ)與臨床，2009，22(3):185 －188.

［5］Medina V，Calvo MB，Díaz-Prado S，et al.Review:Hedgehog signalling as a target in cancer stem cells［J］.Clin Transl Oncol，2009，11(4):199－207.

［6］玄延花，李貴鈴，姜宏宇，等.子宮頸癌中Hedgehog信號通路蛋白表達與人乳頭狀瘤病毒16型感染的關(guān)系［J］.中華病理學(xué)雜志，2009，38(3):178 －182.

［7］Xuan YH，Jung HS，Choi YL，et al.Enhanced expression of hedgehog signaling molecules in squamous cell carcinoma of uterine cervix and its precursor lesions［J］.Mod Pathol，2006，19(8):1139－1147.

［8］Chan DW，Liu VW，Leung LY，et al.Zic2 synergistically enhances Hedgehog signalling through nuclear retention of Gli1 in cervical cancer cells［J］.J Pathol，2011，225(4):525 －534.

［9］Yanai K，Nagai S，Wada J，et al.Hedgehog signaling pathway is a possible therapeutic target for gastric cancer［J］.J Surg Oncol，2007，95(1):55 －62.

［10］Kelleher FC.Hedgehog signaling and therapeutics in pancreatic cancer［J］.Carcinogenesis，2011，32(4):445 －451.