李 靜，賀紹君，趙書景，魏 鑫

（安徽科技學(xué)院 動物科學(xué)學(xué)院，安徽 鳳陽 233100）

金錢草對草酸鈣結(jié)石小鼠紅、白細(xì)胞數(shù)的影響

李 靜，賀紹君，趙書景，魏 鑫

（安徽科技學(xué)院 動物科學(xué)學(xué)院，安徽 鳳陽 233100）

研究金錢草對草酸鈣結(jié)石模型小鼠的紅、白細(xì)胞數(shù)目的影響.方法：30只小鼠按體重相近原則分為3組，Ⅰ組作為對照組小鼠自由飲用自來水，Ⅱ、Ⅲ組作為試驗組小鼠自由飲用主要由1%氯化銨和1%乙二醇配制成的成石液，每組小鼠每日灌服藥液0.5mL，Ⅰ、Ⅱ組小鼠灌服生理鹽水，Ⅲ組小鼠灌服金錢草水提取液.28天灌服結(jié)束后，選取每組小鼠，乙醚吸入麻醉，立即眶后靜脈采血，血樣放入加了抗凝劑的樣品管.采集的血樣用于紅細(xì)胞計數(shù)、白細(xì)胞計數(shù)和白細(xì)胞分類計數(shù).結(jié)果：與試驗Ⅲ組小鼠白細(xì)胞數(shù)目和嗜中性粒細(xì)胞所占比例兩項指標(biāo)相比，對照組Ⅰ組白細(xì)胞數(shù)目少了3211個/μL（P＜0.01），嗜中性粒細(xì)胞所占比例增多11%（P＜0.05）；試驗Ⅱ組白細(xì)胞數(shù)目少了2619個/μL（P＜0.01），嗜中性粒細(xì)胞所占比例增多17%（P＜0.05）.結(jié)論：金錢草能夠通過調(diào)整小鼠內(nèi)白細(xì)胞的變化來改變機(jī)體的免疫力，進(jìn)而發(fā)揮抗結(jié)石的作用.

金錢草；小鼠；草酸結(jié)石；紅細(xì)胞；白細(xì)胞

隨著人們生活節(jié)奏不斷加快、飲食結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，結(jié)石病的發(fā)病率逐年攀升，給人們的健康帶來了嚴(yán)重的危害.在結(jié)石病的防治方面，目前國內(nèi)外大部分研究集中在對體內(nèi)已形成的結(jié)石進(jìn)行處理，促使其排出體外，而對于體內(nèi)預(yù)防結(jié)石形成的研究報道較少.金錢草是《中國藥典》收錄的一味中草藥.體外內(nèi)藥理研究表明，金錢草含有多種化學(xué)成分，具有利尿和排石作用[1].本研究采用1%乙二醇和1%氯化銨飲水誘導(dǎo)小鼠形成草酸鈣結(jié)石模型，用金錢草為干預(yù)因素進(jìn)行給藥實驗，檢測小鼠血液紅、白細(xì)胞的變化，初步探討金錢草抑制草酸鈣結(jié)石形成的干預(yù)作用，進(jìn)一步探究其藥用價值，為開發(fā)防治寵物尿石癥的藥物提供試驗依據(jù)，同時也為人類防治泌尿系統(tǒng)結(jié)石病提供參考.

1 材料與方法

1.1 試驗材料

1.1.1 試驗動物

30只實驗用昆明小鼠（45日齡），雌雄各半.

1.1.2 試驗藥品試劑

氯化銨（NH4Cl），分析純，滬試生產(chǎn)，批號：F20050621；乙二醇（C2H6O2），分析純，分子量62.07，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)，批號：T20110608；金錢草，正品，安徽國鑫中藥飲片有限公司，批號：20110601；抗凝劑 EDTANa2（10%），濃度為0.01mol/L,分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司生產(chǎn)，批號：T20090303；瑞氏染粉、甲醛、NaCl.

1.1.3 試驗飼料

實驗鼠顆粒飼料，安徽長臨河醫(yī)藥科技有限公司生產(chǎn).

1.1.4 試驗主要儀器設(shè)備

生物顯微鏡：SA3000型，北京泰克儀器有限公司制造；蘇泊爾電磁爐：SDHC04-210x型，浙江蘇泊爾股份有限公司；立式壓力蒸汽滅菌器：LDZX-50FBS型，上海申安醫(yī)療器械廠；小鼠飼養(yǎng)籠具、電子天平、血細(xì)胞計數(shù)板、載玻片、染色缸、血蓋片、染色架、吸管.

1.2 試驗方法

1.2.1 動物分組

實驗用昆明小鼠30只，雌雄各半，45日齡，適應(yīng)性飼養(yǎng)1w后，按體重相近原則分為對照組Ⅰ組和試驗組Ⅱ、Ⅲ組.每組雌鼠和雄鼠各5只.用染色筆標(biāo)記，編號.

1.2.2 試驗藥品配制

成石液：1%氯化銨和1%乙二醇溶液的配制，用電子天平稱取氯化銨5g，置于500mL容量瓶中，用10mL移液管吸取5mL的乙二醇于容量瓶中，取200mL的蒸餾水注入容量瓶，搖動容量瓶使氯化銨完全溶解，用蒸餾水定容到500mL.

金錢草水提取物的制備：將500g的金錢草在2.5L水中浸泡2h，進(jìn)行煎煮.煎煮30min后，過濾；藥渣再次加入1.5L水煎煮20min后再次濾過.將兩次濾液混合，濃縮至250mL，相當(dāng)于2g/mL.配制完成后倒入藥瓶并標(biāo)記.

瑞氏染色液：稱取瑞氏染粉0.1g置于研缽中.加20mL甲醛研磨，使其溶解，然后將已溶解的染色液倒入潔凈的染色玻瓶，剩下未溶解的染料再加入10mL甲醇研磨，并將溶解的染色液合并，之后每次加入10mL甲醇研磨，如此繼續(xù)操作3次，直至全部染料溶解為止.在室溫中保存7日后即可應(yīng)用.

1.2.3 動物飼養(yǎng)

小鼠飼養(yǎng)在安徽科技學(xué)院動物科學(xué)學(xué)院實驗動物房進(jìn)行，每天固定時間換水換料，固定的時間給藥，自動飲水瓶每天固定時間清洗，用具每日固定時間紫外線消毒.使用刨花作為小鼠墊料，墊料在陽光下曬干，經(jīng)紫外燈照射3～4h，再裝入自制的布袋中于121℃高溫蒸汽滅菌20min，然后置入干燥箱內(nèi)60℃鼓風(fēng)干燥后備用.

試驗Ⅱ、Ⅲ組小鼠飲用配制好的成石液，空白對照組Ⅰ組小鼠飲用自來水，小鼠自由飲水，環(huán)境溫度20～24℃，濕度50～65%，光照12～13h，每周定期稱重一次.小鼠給藥采用灌胃方式，空白對照組和試驗Ⅰ組灌胃生理鹽水0.5mL，試驗Ⅱ組灌胃金錢草水提取液0.5mL（相當(dāng)于1g中藥），持續(xù)4w.試驗過程中認(rèn)真進(jìn)行小鼠的一般檢查，記錄小鼠的精神狀態(tài)、采食、飲水、活動、臨床癥狀、環(huán)境溫度與濕度及通風(fēng)等情況.

1.3 樣品采集與處理

試驗結(jié)束時，小鼠禁食不禁水過夜，逐只稱重，采血，血樣放入加有抗凝劑的樣品管，用記號筆標(biāo)記.采血后的小鼠立即解剖，取心、肝、脾、肺、腎、胸腺、脾臟進(jìn)行稱重，記錄下重量和觀察情況.采集的血液分別用于紅細(xì)胞計數(shù)、白細(xì)胞計數(shù)和白細(xì)胞分類計數(shù).

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

所有試驗數(shù)據(jù)均采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（M±SD）.spss17.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，利用單因素方差分析各數(shù)據(jù)之間的統(tǒng)計學(xué)差異，P＜0.05為有統(tǒng)計學(xué)意義.

2 結(jié)果與分析

2.1 金錢草對草酸鈣結(jié)石小鼠紅、白細(xì)胞數(shù)，白細(xì)胞比例的影響

表1 金錢草對草酸鈣結(jié)石小鼠紅、白細(xì)胞數(shù)，白細(xì)胞比例的影響

由表1可以看出，試驗Ⅲ組比試驗Ⅱ組白細(xì)胞數(shù)目多出2619個/μL（P＜0.01）、嗜中性粒細(xì)胞所占比例低17%（P＜0.05），比對照組Ⅰ組白細(xì)胞數(shù)目多出3211個/μL（P＜0.01）、嗜中性粒細(xì)胞所占比例低11%（P＜0.05）.分析：金錢草能夠刺激草酸鈣結(jié)石小鼠的白細(xì)胞的產(chǎn)生，使白細(xì)胞數(shù)目增多，嗜中性粒細(xì)胞所占比例減少來改變機(jī)體的免疫力，進(jìn)而發(fā)揮抗結(jié)石的作用.

3 討論

血液細(xì)胞學(xué)檢查分析是診斷和鑒別診斷系統(tǒng)疾病的主要依據(jù)，針對血液成分開展的血液學(xué)檢驗所獲得的信息可及時了解發(fā)病原因、病情進(jìn)展、疾病程度以及進(jìn)行預(yù)后判斷,從而為疾病的診斷、治療及預(yù)防提供依據(jù)[2].金錢草具有緩解疼痛、減少血尿及促進(jìn)排石等功效的經(jīng)典中草藥，國內(nèi)外對于體外抑制結(jié)石形成方面已有報道[3]，而臨床和體內(nèi)實驗研究均鮮有報道.我們通過對小鼠結(jié)石模型形成過程進(jìn)行給藥干預(yù)，檢測試驗28日齡小鼠血液紅細(xì)胞數(shù)、白細(xì)胞數(shù)、淋巴細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞比例、嗜中性粒細(xì)胞比例的變化，初步探討金錢草抑制草酸鈣結(jié)石形成的干預(yù)作用.

3.1 金錢草對草酸鈣結(jié)石小鼠紅細(xì)胞數(shù)的影響

與其它器官相比，腎臟內(nèi)更容易形成結(jié)石，從而引起炎癥，使腎臟功能降低，分泌紅細(xì)胞生成素減少，從而引起紅細(xì)胞數(shù)目減少.本試驗數(shù)據(jù)顯示，試驗Ⅱ組和Ⅲ組比試驗Ⅰ組紅細(xì)胞數(shù)目少，但對照組和試驗組紅細(xì)胞數(shù)目比較差異不顯著（P＞0.05），說明結(jié)石在一定程度上能夠引起紅細(xì)胞數(shù)目減少，但這種減少變化輕微.試驗Ⅲ組比試驗Ⅱ組紅細(xì)胞數(shù)目多，說明金錢草可以通過干擾草酸鈣結(jié)石的形成，從而緩解因腎臟結(jié)石引起的炎癥反應(yīng)對機(jī)體造成的影響.

3.2 金錢草對草酸鈣結(jié)石小鼠白細(xì)胞數(shù)的影響

動物機(jī)體發(fā)生炎癥或其他疾病時，可引起白細(xì)胞總數(shù)的變化，因此檢查白細(xì)胞總數(shù)成為輔助診斷的一種重要方法[4].體內(nèi)結(jié)石的刺激容易引起炎癥，反之，炎性產(chǎn)物的聚集也促進(jìn)結(jié)石的形成.研究表明，當(dāng)機(jī)體由結(jié)石造成的損傷引起炎癥時機(jī)體會進(jìn)行免疫反應(yīng)，白細(xì)胞的數(shù)目會出現(xiàn)一定程度上的增多[12].本試驗數(shù)據(jù)顯示試驗Ⅱ組和試驗Ⅲ組比對照組Ⅰ組白細(xì)胞數(shù)目多，試驗Ⅲ組比試驗Ⅱ組白細(xì)胞數(shù)目多（P＜0.01）說明結(jié)石引起炎癥反應(yīng)后刺激機(jī)體白細(xì)胞大量生成，進(jìn)入感染部位進(jìn)行抗炎，金錢草促進(jìn)草酸結(jié)石小鼠白細(xì)胞數(shù)目的增多，增強(qiáng)機(jī)體免疫反應(yīng)，金錢草對草酸鈣結(jié)石小鼠白細(xì)胞數(shù)的影響較大.

3.3 金錢草對草酸鈣結(jié)石小鼠淋巴細(xì)胞的影響

淋巴細(xì)胞是在適應(yīng)性免疫中起關(guān)鍵作用的白細(xì)胞.研究表明，當(dāng)機(jī)體由結(jié)石造成的損傷引起炎癥反應(yīng)時機(jī)體會進(jìn)行免疫反應(yīng)，結(jié)石引起的炎癥反應(yīng)對機(jī)體淋巴細(xì)胞的產(chǎn)生影響不大[5].本試驗數(shù)據(jù)顯示試驗Ⅱ組比對照組Ⅰ組淋巴細(xì)胞所占比例減少（P＞0.05），試驗Ⅲ組和試驗Ⅱ組、試驗Ⅰ組相比淋巴細(xì)胞所占比例出現(xiàn)增大（P＞0.05），說明金錢草可以促進(jìn)草酸鈣結(jié)石小鼠淋巴細(xì)胞的產(chǎn)生，但影響不顯著.

3.4 金錢草對草酸鈣結(jié)石小鼠嗜酸性粒細(xì)胞的影響

嗜酸性粒細(xì)胞是白細(xì)胞的一種，一般認(rèn)為在抗寄生蟲感染及I型超敏反應(yīng)中發(fā)揮重要作用.本試驗中，對照組Ⅰ組和試驗組Ⅱ組嗜酸性粒細(xì)胞所占比例相比較結(jié)果相等差異不顯著（P＞0.05），試驗Ⅲ組比試驗Ⅰ組、試驗Ⅱ組嗜酸性粒細(xì)胞所占比例大（P＞0.05）說明金錢草能夠刺激草酸鈣結(jié)石小鼠機(jī)體產(chǎn)生嗜酸性粒細(xì)胞但影響不明顯.

3.5 金錢草對草酸鈣結(jié)石小鼠嗜中性粒細(xì)胞的影響

嗜中性粒細(xì)胞是白細(xì)胞的一種，結(jié)石引起的炎癥反應(yīng)能夠刺激機(jī)體嗜中性粒細(xì)胞的產(chǎn)生.本試驗中，試驗Ⅱ組比對照組Ⅰ組嗜中性粒細(xì)胞所占比例大（P＞0.05），試驗Ⅲ組比試驗Ⅱ組、對照組Ⅰ組嗜中性粒細(xì)胞所占比例?。≒＜0.05），說明金錢草能夠干擾小鼠體內(nèi)草酸結(jié)石的形成過程，從而減少炎癥反應(yīng)過程.

綜上所述，金錢草對草酸鈣結(jié)石小鼠白細(xì)胞影響較顯著，金錢草能夠刺激草酸鈣結(jié)石小鼠的白細(xì)胞的產(chǎn)生，使白細(xì)胞數(shù)目增多，嗜中性粒細(xì)胞所占比例減少.金錢草作為經(jīng)典治療泌尿系結(jié)石的中草藥，能夠通過影響白細(xì)胞來改變機(jī)體的免疫力.

4 結(jié)論

金錢草能夠刺激草酸鈣結(jié)石小鼠的白細(xì)胞的產(chǎn)生，使白細(xì)胞數(shù)目增多，嗜中性粒細(xì)胞所占比例減少來改變機(jī)體的免疫力，進(jìn)而發(fā)揮抗結(jié)石的作用.為進(jìn)一步探究了其藥用價值，開發(fā)防治寵物尿石癥的藥物提供試驗依據(jù)，同時也為人類防治泌尿系統(tǒng)結(jié)石病提供參考.

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S853.7

A

1673-260X（2012）09-0151-03

安徽科技學(xué)院自然科學(xué)研究項目（ZRC2012323）